降脂通絡方對高脂血癥模型大鼠膽固醇逆轉運蛋白的影響

徐則林 陳新宇 李曉屏 蔡虎志

摘要?目的：觀察降脂通絡方對高脂血癥模型大鼠膽固醇逆轉運蛋白的影響。方法：健康SD大鼠40只，隨機抽取10只為正常對照組，余30只建立高脂血癥模型后隨機分為模型對照組、降脂通絡組和辛伐他汀組，每組10只。各組連續干預30?d。檢測實驗末各組大鼠血清血脂和ABCA1/apoA-I/LCAT的表達水平。結果：與正常對照組比較，實驗各組血脂水平升高明顯（P<0.05），降脂通絡組和辛伐他汀組較模型對照組升高相對緩慢（P<0.05）。與正常對照組比較，實驗各組血清ABCA1/apoA-I/LCAT的表達明顯降低，降脂通絡組、辛伐他汀組較模型對照組降低相對緩慢（P<0.05），其中降脂通絡組對血清ABCA1和LCAT延緩下調作用較辛伐他汀組更為顯著（P<0.05）。結論：降脂通絡方對高脂血癥的治療作用可能是通過上調膽固醇逆轉運蛋白ABCA1、apoA-1和LCAT，進而促進成熟HDL-C的形成而實現的，這可能是其治療高脂血癥的重要機制之一。

關鍵詞?高脂血癥;降脂通絡方;ABCA1;apoA-I;LCAT;膽固醇;大鼠;中醫藥

Effect?of?Jiangzhi?Tongluo?Recipe?on?Cholesterol?Reverse?Transport?Protein?in?Hyperlipidemic?Rats

XU?Zelin，CHEN?Xinyu，LI?Xiaoping，CAI?Huzhi

（The?First?Affiliated?Hospital?of?Hunan?University?of?Chinese?Medicine，Changsha?410007，China）

Abstract?Objective：To?observe?the?effects?of?Jiangzhi?Tongluo?Recipe?on?cholesterol?reverse?transport?protein?in?hyperlipidemic?rats.Methods：A?total?of?40?healthy?SD?rats?were?randomly?divided?into?a?control?group，a?Jiangzhi?Tongluo?group?and?a?simvastatin?group，with?10?rats?in?each?group.And?another?10?rats?were?set?as?a?normal?control?group.Each?group?was?given?corresponding?treatment?for?30?days.Serum?lipids?and?ABCA1/apoA-I/LCAT?levels?in?each?group?were?detected?at?the?end?of?the?experiment.Results：Compared?with?the?normal?control?group，the?serum?lipid?level?of?the?experimental?groups?increased?significantly（P<0.05）.Compared?with?the?model?control?group，Jiangzhi?Tongluo?group?and?simvastatin?group?increased?relatively?slowly（P<0.05）.Compared?with?the?normal?control?group，the?expression?of?ABCA1/apoA-I/LCAT?in?serum?decreased?significantly.Compared?with?the?model?control?group，the?Jiangzhi?Tongluo?group?and?simvastatin?group?decreased?relatively?slowly（P<0.05）.The?effect?of?Jiangzhi?Tongluo?group?on?serum?ABCA1?and?LCAT?was?more?significant?than?that?of?simvastatin?group（P<0.05）.Conclusion：The?therapeutic?effects?of?Jiangzhi?Tongluo?Recipe?on?hyperlipidemia?may?be?realized?by?up-regulating?the?cholesterol?reverse?transporter?ABCA1，apoA-1?and?LCAT，and?then?promoting?the?formation?of?mature?HDL-C.This?may?be?one?of?the?important?mechanisms?for?treatment?of?hyperlipidemia.

Keywords?Hyperlipidemia;?Jiangzhi?Tongluo?Recipe;?ABCA1;?apoA-I;?LCAT;?Cholesterol;?Rats;?Traditional?Chinese?medicine

中圖分類號：R285.5文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.01.010

高脂血癥是人體內脂質代謝失常，血清中一種或多種脂質成分異常增高的一種病癥，可表現為高膽固醇血癥、高三酰甘油血癥、混合型高脂血癥，其實質是指機體內脂肪代謝和（或）轉運失常。近年來，醫學界逐漸認識到血清中高密度脂蛋白降低也是一種重要的血脂代謝紊亂[1]。現在普遍認為升高高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）是影響動脈粥樣硬化疾病的負相關危險因子[2]，能夠起到膽固醇逆轉運作用，而在成熟HDL-C的形成過程中，重要的逆轉運蛋白ATP結合盒轉運蛋白A1（ABCA1）、載脂蛋白A-I（apoA-I）和卵磷脂膽固醇脂酰轉移酶（LCAT）的表達發揮重要功能[3]。鑒于此，為探究降脂通絡方在治療高脂血癥的過程中是否對血清ABCA1/apoA-I/LCAT的表達起某種調控功能而進行此實驗研究。報道如下。

1?材料與方法

1.1?材料

1.1.1?動物?健康SPF級SD大鼠40只，雌雄各半，體質量200～220?g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供。動物許可證號SCXK（湘）2018-002。通過為期7天的自由喂養，使其能夠盡快適應環境。喂養環境包括：光/暗時間均為12?h，白天光照時間為早上6：00至晚上6：00、溫度參數為（18±3）℃、周圍噪聲為（35±15）db。

1.1.2?藥物?降脂通絡方由湖南中醫藥大學第一附屬醫院治未病中心提供。辛伐他?。ǜ拭C益爾藥業股份有限公司，國藥準字H20123110）。

1.1.3?實驗儀器和試劑?電子稱（湖南湘儀天平儀器生產企業，型號：TP-1500）、全自動生化檢測儀（德國羅氏試劑診斷中心，型號：Cobas?c800）、智能雙重純水蒸餾器（山東玻璃儀器四廠，型號：SZ-93）、低速離心機（北京醫用離心機廠，型號：LD522A）。低密度/高密度膽固醇脂蛋白檢測試劑盒、三酰甘油/總膽固醇檢測試劑盒，均由德國羅氏試劑診斷中心提供;ABCA1、apoA-I和LCAT?Elisa檢測試劑盒購自武漢博士德生物工程公司。

1.2?方法

1.2.1?模型建立與分組?依照參照文獻[4]方法，對30只建模大鼠進行高脂乳劑灌胃，連續45?d，灌胃結束后，斷尾采血檢測血脂水平，以評價模型建立情況。使用隨機區組設計將30只已成模大鼠分為模型對照組、降脂通絡組和辛伐他汀組3組，另設10只正常大鼠為正常對照組。

1.2.2?給藥方法?降脂通絡組、辛伐他汀組分別按0.46?mg/kg、1.33?mg/kg的劑量灌胃給藥，1次/d，連續30?d;正常對照組、模型對照組給予等量的蒸餾水灌胃，連續30?d。在給藥干預過程中，降脂通絡組、辛伐他汀組和模型對照組持續高脂乳劑灌胃，截止到實驗全部完成。

1.2.3?檢測指標與方法

1）血脂測定：用1.0?mLEP管量取0.5?mL血清，使用全自動生化檢測儀對其進行組分測定，確定樣本位，開啟后確定含量值。

2）血清ABCA1/apoA-I/LCAT的檢測：各組大鼠自腹主動脈取血，靜置10?min后，3?000?r/min離心15?min，后將其放在-80?℃冰箱中。以ELISA法對血清ABCA1、LCAT和apoA-I進行測定，具體操作步驟需要參照試劑盒標準說明行。

1.3?統計學方法?采用SPSS?20.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，選擇單因素方差分析法對各組均數組間進行比較，在方差齊時采用LSD法，若方差不齊，則選擇Tamhane′T2法。以P<0.05為差異有統計學意義。

2?結果

2.1?各組大鼠的體質量值比較?與正常對照組比較，實驗后所有實驗大鼠體質量均明顯增加，差異有統計學意義（P<0.05）;降脂通絡組和辛伐他汀組體質量升高較為緩慢，與模型對照組比較差異有統計學意義（P<0.05），降脂通絡組和辛伐他汀組進行比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2?各組大鼠血脂變化比較?與正常對照組比較，各實驗組大鼠血清LDL-C、TG、TC水平均有所上調，而HDL-C水平有所下調，差異有統計學意義（P<0.05）;辛伐他汀組、降脂通絡組血清LDL-C、TG、TC的水平上調稍緩，HDL-C水平下調稍緩，與模型對照組比較差異有統計學意義（P<0.05），辛伐他汀組、降脂通絡組之間的比較，差異無統計學意義（P>0.05）。見表2。

2.3?各組血清ABCA1/aPoA-I/LCAT變化比較?與正常對照組比較，各實驗組大鼠血清ABCA1、aPoA-I、LCAT均呈降低趨勢，差異有統計學意義（P<0.05）。與模型對照組比較，降脂通絡組和辛伐他汀組血清ABCA1、aPoA-I、LCAT表達下調略緩，差異有統計學意義（P<0.05），且降脂通絡組較辛伐他汀組在延緩血清ABCA1和LCAT水平降低方面比較，差異有統計學意義（P<0.05）。見表3。

3?討論

高脂血癥發展過程中，研究者們越來越重視HDL-C水平的原因是它介導了逆膽固醇轉運（Reverse?Cholesterol?Transport，RCT）[5]。RCT即將肝外組織的膽固醇轉運到肝臟，在肝內轉化成膽汁酸并排出體外，這一過程是人體中脂蛋白和膽固醇進行循環代謝的一個必要步驟，能夠降低膽固醇在血管壁的附著量。RCT的主要作用為促使外周細胞內游離的膽固醇轉移至肝臟，經肝臟代謝完成體內循環?，F今發現，外周細胞內膽固醇流出的主要路徑即為ABCA1/aPoA-I/LCAT通路[6-7]。作為主要的膽固醇逆轉運蛋白，ABCA1基因于1994年被克隆獲得[8-9]。ABCA1屬于ATP結合轉運蛋白家族中的一個重要分子，其通過ATP降解的方式形成，可以促進各種底物例如脂質等實現有效傳遞，屬于RCT的一個核心機制[10-11]。在膽固醇逆轉運的過程中，ABCA1蛋白發揮介導作用，包括2個環節[12-13]：1）外周細胞膜中的ABCA1將細胞中的磷脂介導轉運出胞，和細胞外的aPoA-I結合形成具有盤旋結構的磷脂復合物;2）細胞內的膽固醇通過擴散跨膜流出，被此復合物捕獲，形成前β高密度脂蛋白（HDL），在LCAT的作用下，轉變成富含膽固醇脂球狀的成熟HDL，將膽固醇轉運至肝臟，代謝排出體外。

降脂通絡方由丹參、西洋參、田三七、川芎、茯苓、薏苡仁、山楂、決明子組成。丹參，味苦，性微寒，歸心、肝經?！渡褶r本草經》云其“治心腹邪氣，腸鳴幽幽如走水，寒熱積聚，破癥除瘕，止煩滿，益氣”?！侗静菥V目》曰“丹參色赤味苦，氣平而降，陰中之陽也。入手少陰、厥陰經。心與包絡血分藥也”?？梢姷檠忠?，既能活血化瘀又能養血，不論虛實皆可用之。西洋參，味甘、微苦，性涼，歸心、肺、腎經?！夺t學衷中參西錄》言之“味甘微苦，性涼。能補助氣分，兼能補益血分，為其性涼而補，凡欲用人參而不受人參之溫補者，皆可以此代之”。西洋參益氣扶正以治本，與丹參共為方中君藥。田三七，味甘、微苦，性溫，歸肝、胃經?！毒霸廊珪氛f其“味甘氣溫，乃陽明、厥陰血分之藥，故善止血散血定痛”。田三七既能助丹參活血化瘀，又有補虛強壯之效[14]。川芎，味辛，性溫，歸肝、膽、心包經，為治氣滯血瘀諸痛癥之要藥，氣行則血行。田三七、川芎共助丹參活血化瘀之功，為方中臣藥。茯苓利水滲濕，健脾，寧心[15];薏苡仁利水滲濕，健脾止瀉，除痹，排膿，解毒散結[16]。茯苓、薏苡仁既能健脾，杜絕痰濕生成之源，又能直接利水滲濕，為方中佐藥。山楂消食健胃，行氣散瘀，化濁降脂[17]?！侗静輦渌帯吩弧盀a滯氣，消積，散瘀，化痰”。決明子清肝明目，潤腸通便?，F代藥理學研究明確，山楂、決明子有降血脂、抗動脈粥樣硬化的作用，亦為佐藥。全方共奏活血化瘀、健脾滲濕、降脂通絡之功。本實驗研究發現，降脂通絡方對高脂血癥的治療作用是通過上調RCT過程的關鍵蛋白ABCA1、aPoA-1和LCAT，進而促進成熟HDL-C的形成而實現的，這可能是其治療高脂血癥的重要機制之一。

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（2018-12-09收稿?責任編輯：芮莉莉）

基金項目：湖南省干部保健委員會資助項目（B2017-06）作者簡介：徐則林（1986.05—），女，碩士，主治醫師，研究方向：中醫藥防治慢性疾病的研究，E-mail：751825767@qq.com通信作者：蔡虎志（1986.09—），男，博士，助理研究員，主治醫師，研究方向：中醫藥防治心腦血管疾病的研究，E-mail：805032226@qq.com