健康體檢人群Hp感染實驗室診斷及血清抗體譜分析

吳秋花 蔡云祥

自上個世紀90年代，幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）在胃組織里被發現以來，大量的研究證實了Hp感染與慢性萎縮性胃炎、胃淋巴瘤、胃癌等疾病密切相關［1］。分離培養的方法作為Hp檢測的“金標準”，因其培養要求高，所以臨床上基本不用，目前常規實驗室檢測胃Hp感染的方法主要分為兩類［2-3］，其中一類為侵入性檢測：胃鏡下取胃組織進行脲酶試驗；另一類為非侵入性檢測：檢測患者血清中Hp抗體和糞便中的Hp抗原。本文擬通過比較體檢人群糞便Hp抗原、血清Hp檢測與14C-尿素呼氣試驗（14C-UBT）檢測結果，觀察三者檢查結果的一致性及調查浙江地區體檢人群中Hp的感染率；調查體檢人群中糞便Hp抗原、血清Hp結果存在的不同模式的流行病學意義；描述體檢者血清Hp抗體陽性患者血清中Hp抗體譜特征；為進一步積累體檢人群中Hp感染的流行病學資料和揭示Hp在體檢人群中的感染機制研究奠定基礎。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2017年1月至12月浙江省湖州市第一人民醫院健康體檢人員596例。其中男347例（12～80歲），女249例（14～83歲），按照年齡各分6組（＜21 歲，21～30 歲，31～40 歲，41～50 歲，51～60歲，＞60歲）。納入標準：（1）未進行Hp治療或近期未服用與幽門螺桿菌治療有關的藥物者；（2）剔除體檢過程中已經明確有消化道疾病癥狀（胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍及胃癌等）、相關病史和家族史者；（3）患者雖沒有消化道癥狀，但明確有其他疾?。ㄈ缪翰?、自身免疫性疾病等系統性疾病）可能影響檢測結果的同樣剔除。

1.2 試劑盒儀器14C放射性液閃儀及0.75μCi/粒（14C-UBT）尿素膠囊（深圳市中核海得威生物科技有限公司），幽門螺桿菌糞便抗原、血清抗體檢測試劑盒（均來自杭州艾康生物有限公司），Hp免疫印跡試驗試劑盒（深圳市伯勞特生物制品有限公司）。

1.3 方法 （1）14C-UBT：受檢者清晨空腹或餐后2h口服1粒14C尿素膠囊，靜坐25min后開啟CO2吸收劑一瓶，向瓶內平靜吹氣約1～3min，然后向瓶內加入稀釋閃爍液4.5ml，加蓋密封，于閃爍儀上作14C放射性測試2min，結果判斷：14C-UBT≥100dpm/mmol CO2可判斷為Hp陽性。（2）膠體金糞便Hp抗原與血清Hp抗體檢測：同時收集受檢者的糞便與血清標本，按試劑盒說明書進行操作和結果判斷。（3）免疫印跡試驗血清抗體譜檢測及血清分型：當血清Hp抗體檢測結果陽性時，進行Hp血清抗體譜分析，操作按試劑盒說明書進行操作；區帶結果判斷：細胞毒素相關蛋白（CagA-116KD）、空泡毒素（VacA-95KD，VacA-91KD）、尿素酶亞單位（UreA-66KD，UreB-30KD）區帶相關抗體顯色深淺低于質控帶判斷為陰性結果，反之則為陽性結果；嚴格按照實際說明書進行分型結果判斷：根據文獻［4-5］標準進行分型，CagA-116KD、VacA-95KD、VacA-91KD區帶相關抗體中有任一陽性結果判為血清Ⅰ型，三者均為陰性則為Ⅱ型。

1.4 統計學方法 采用SPSS 19.0統計軟件包。計數資料以%表示，不同Hp感染檢測方法之間陽性結果（率）差異的比較采用配對χ2檢驗，不同年齡組之間Hp感染率采用有序2×C表線性趨勢χ2檢驗，不同性別Hp感染率采用χ2檢驗，不同年齡組血清Hp抗體譜分布采用R×C表χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Hp感染不同檢測方法比較 見表1。

表1 三種檢測幽門螺桿菌感染的方法比較（n）

2.2 健康人群中糞便Hp抗原和血清Hp抗體聯合檢測不同結果模式分析 見表2。

表2 體檢人群Hp感染不同結果模式分布

2.3 不同性別及年齡段Hp感染率調查 見表3。

表3 不同性別及年齡段Hp感染調查

2.4 不同年齡段血清Hp抗體譜及血清型 見表4。

表4 不同年齡組血清抗體譜與血清型差異性比較

3 討論

本資料中采用14C-UBT、糞便Hp抗原和血清Hp抗體同時用于體檢人群的篩查，比較三者之間在檢測結果上的區別，發現體檢人群中Hp總感染率39.09%，且三者方法之間的感染率差異無統計學意義（P＞0.05），另外，糞便Hp抗原與血清Hp檢測兩者在體檢人群篩查中起到了相輔相成的作用，糞便Hp與血清Hp抗體陽性分布的不同階段，與Hp感染的發生、發展以及治療預后的判斷緊密相關。因此，對于一般體檢人群Hp篩查選擇糞便Hp抗原和血清Hp抗體聯合檢測，不僅有助于判斷Hp是否感染，同時有助于了解疾病的感染階段和實施不同的治療措施。

作者將體檢Hp篩查病例按照性別和年齡進行分組統計發現：Hp感染在男女之間，感染率差異無統計學意義（P＞0.05），Hp感染與性別無關聯性；Hp感染在不同年齡段、感染率差異具有統計學意義（P＜0.05），Hp感染率與年齡組成正相關，隨著年齡的增長Hp感染率增加（30.23%～43.49%）。文獻報道，Hp不同抗原蛋白刺激產生的抗體和其致病特點、預后及耐藥密切相關［6］，依據此特性臨床上將Hp感染分為2個血清型，即分泌CagA/VacA（CagA或VacA抗體檢測任一陽性）為血清Ⅰ型，無分泌 Cag A/VacA（CagA或VacA抗體檢測均為陰性）為血清Ⅱ型［4-5］。兩者在胃和十二指腸疾病中致病性和造成的結局不完全一樣，血清Ⅱ型Hp一般不產生細胞毒素，其雖然能覆蓋在部分胃黏膜上，并使人體產生相應的免疫應答（產生Hp抗體），但不能侵入胃上皮細胞，可長期無臨床癥狀。相反，感染血清Ⅰ型Hp后，由于細胞毒素（CagA/VacA）的作用造成胃上皮細胞空泡、損傷、壞死及潰瘍，更易誘發胃、十二指腸潰瘍及胃部腫瘤。為此本文調查了一般體檢人群中Hp血清型的分布。由表4可知：在一般體檢人群中Hp血清Ⅰ型的感染率大約為70.39%，明顯高于血清Ⅱ型；另外Hp血清Ⅰ型在不同年齡組中的分布差異具有統計學意義（P＜0.05），＜50歲Hp血清Ⅰ型的感染率呈現逐年上升的趨勢，而＞50歲Hp血清Ⅰ型的感染率出現下降，這種現象符合疾病發生、發展、轉歸的一般規律。