抗核抗體對鼻咽癌的診斷價值

曹令儀　陳英杰　李仲笑

【摘要】 目的：探討間接免疫熒光法測定抗核抗體診斷鼻咽癌的可能性。方法：收集2018年6月-2019年10月江門市中心醫院收治的129例鼻咽癌，77例健康體檢標本作為對照組，通過間接免疫熒光法檢測血清中抗核抗體。結果：抗核抗體陽性率分別為Ⅰ～Ⅱ期鼻咽癌組52.9%，Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌組62.1%，對照組18.2%，三組比較差異有統計學意義（字2=11.809，P=0.003）;Ⅰ～Ⅱ期鼻咽癌組與Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌組分別與對照組比較，差異有統計學意義（字2=9.972、8.015，P=0.002、0.005）;Ⅰ～Ⅱ期鼻咽癌組和Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌組比較，差異無統計學意義（字2=0.874，P=0.310）。抗核抗體核熒光核型比較，兩組均以抗細胞核抗體為主，鼻咽癌組比對照組多了周期蛋白型、著絲點型和紡錘體型。抗核抗體熒光滴度比較，滴度1∶100，鼻咽癌組46.1%，對照組78.6%，差異有統計學意義（字2=5.003，P=0.025）;滴度1∶320，鼻咽癌組38.2%，對照組21.4%，差異無統計學意義（字2=1.444，P=0.229）;滴度≥1∶1 000，鼻咽癌組15.8%，對照組無。結論：鼻咽癌患者血清的抗核抗體不同于健康者生理性自身抗體，抗核抗體對鼻咽癌的診斷提供了一定的依據。

【關鍵詞】 抗核抗體 間接免疫熒光法 鼻咽癌

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.15.028 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2020）15-00-03

Diagnostic Value of Antinuclear Antibody in Nasopharyngeal Carcinoma/CAO Lingyi， CHEN Yingjie， LI Zhongxiao. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（15）： -67

[Abstract] Objective： To investigate the possibility of diagnosis of nasopharyngeal carcinoma by antinuclear antibody indirect immunofluorescence assay. Method： A total of 129 cases of nasopharyngeal carcinoma admitted to the Jiangmen Central Hospital from June 2018 to October 2019 were collected， and 77 healthy physical examination specimens were used as the control group. Determined antinuclear antibody by indirect immunofluorescence assay. Result： The positive rates of antinuclear antibodies were 52.9% in group Ⅰ-Ⅱ nasopharyngeal carcinoma， 62.1% in group Ⅲ-Ⅳ nasopharyngeal carcinoma， and 18.2% in control group. The difference among the three groups was statistically significant （字2=11.809， P=0.003）. The difference between the Ⅰ-Ⅱ nasopharyngeal carcinoma group and the Ⅲ-Ⅳ nasopharyngealcarcinoma group and the control group was statistically significant （字2=9.972， 8.015; P=0.002， 0.005）. There was no statistical difference between the Ⅰ-Ⅱ nasopharyngeal carcinoma group and the Ⅲ-Ⅳ nasopharyngeal carcinoma group （字2=0.874， P=0.310）. The anti-nuclear antibody fluorescence titer was 1∶100， 46.1% in the nasopharyngeal carcinoma group and 78.6% in the control group， the difference was statistically significant

（字2=5.003， P=0.025）. The titer was 1∶320， 38.2% in the nasopharyngeal carcinoma group and 21.4% in the control group， the difference was not statistically significant （字2=1.444， P=0.229）. The titer was ≥1∶1 000， 15.8% in the nasopharyngeal carcinoma group， and 0 in the control group. Compared with the nuclear nucleus of antinuclear antibody， both groups were mainly anti-nuclear antibodies， and the nasopharyngeal carcinoma group had more cyclin， centromere and spindle type than the control group. Conclusion： The anti-nuclear antibodies in the serum of patients with nasopharyngeal carcinoma are different from the healthy self-antibody antibodies， and anti-nuclear antibodies provide a basis for the diagnosis of nasopharyngeal carcinoma.

[Key words] Antinuclear antibody Indirect immunofluorescence Nasopharyngeal carcinoma

First-authors address： Jiangmen Central Hospital， Jiangmen 529000， China

鼻咽癌是我國常見的惡性腫瘤，早期（Ⅰ～Ⅱ期）鼻咽癌患者經過治療5年生存率可以高達90%[1-2]。由于早期癥狀不典型，鼻咽解剖位置深導致期發病隱匿，70%患者發現鼻咽癌時已達中晚期（Ⅲ～Ⅳ期）。中晚期鼻咽癌治療效果欠佳，5年生存率僅為40%[3]。EB病毒抗體檢測作為鼻咽癌的篩選實驗存在較高的假陽性，敏感性和特異性有待提高[4]。CT、核磁共振、病理活檢和鼻咽內鏡檢查等是診斷鼻咽癌的主要方法，但創傷損傷和高昂的費用限制了其臨床應用。抗核抗體（anti-nuclear antibody，ANA）是以真核細胞內所有抗原成分為靶抗原的器官非特異性自身抗體，主要用于輔助診斷自身免疫性疾病，觀察疾病活動度和治療反應。近年來研究表明，ANA高頻率出現于惡性腫瘤不同階段的患者血液中，它是惡性腫瘤早期診斷的潛在生物標志物[5]。國內學者對乳腺癌、肺癌研究表明，ANA作為腫瘤標志物能提高腫瘤的早期檢出率[6-7]。本研究將用間接熒光法比較健康者和鼻咽癌患者血清的自身抗體，分析ANA與鼻咽癌的相關性，以探討ANA作為鼻咽癌早期診斷指標的可能性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

江門市中心醫院2018年6月-2018年9月收治鼻咽癌患者129例，年齡24～79歲，中位年齡51歲，男104例，女25例。納入標準：患者必須經病理組織活檢確診為鼻咽癌及符合鼻咽癌的臨床指征，沒有自身免疫病臨床表現。健康體檢者既往身體健康，無慢性疾病史，無自身免疫病臨床表現。按照UICC8版分期標準：Ⅰ期8例，Ⅱ期23例，Ⅲ期57例，Ⅳ期41例。按照WHO鼻咽癌組織學分型標準（2005年版）：非角化性癌117例，角化性鱗癌12例。選擇同期健康體檢者77例對照，年齡24～76歲，中位年齡50歲，男58例，女19例。兩組年齡、性別比較差異無統計學意義（P>0.05）。

1.2 間接免疫熒光法檢測ANA

清晨空腹狀態下，抽取研究對象肘靜脈血液3 ml，3 000 r/min分離血清零下20 ℃低溫保存備用。檢測試劑購自德國歐蒙診斷公司，嚴格按照說明操作。首次PBS稀釋液將血清按1∶100稀釋，取25 μl滴加于反應板，將貼有生物薄片載片倒扣反應板凹槽，室溫放置30 min。PBS沖洗載片后，PBS浸泡5 min，取出晾干。滴加20 μl熒光素標記二抗于反應板，重復上述步驟后封片。ZISS熒光顯微鏡判讀結果，以抗體滴度≥100為陽性。陽性標本者進一步1∶320和1∶1 000稀釋。

1.3 統計學處理

用SPSS 25.0統計軟件分析數據，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗。組間的百分率比較用字2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義;當P<0.05，三組進行兩兩比較時，檢驗水準α=0.05/3=0.017。

2 結果

2.1 對照組和鼻咽癌Ⅰ～Ⅱ期組、Ⅲ～Ⅳ期組ANA的結果

77例體檢對照組檢出ANA陽性14例，陽性率18.2%;34例Ⅰ～Ⅱ期鼻咽癌患者組檢出ANA陽性18例，陽性率52.9%;95例Ⅲ～Ⅳ期鼻咽癌患者組檢出ANA陽性59例，陽性率62.1%，三組的陽性率差異有統計學意義（字2=11.809，P=0.003）。與對照組比，Ⅰ～Ⅱ期組和Ⅲ～Ⅳ期組的陽性率的差異有統計學意義（字2=9.972、8.015，P=0.002、0.005）。Ⅰ～Ⅱ期組與Ⅲ～Ⅳ期組比，陽性率的差異無統計學意義（字2=0.874，P=0.310），見表1。

2.2 對照組和鼻咽癌組的ANA的結果及熒光模式

對照組和鼻咽癌患者組ANA比較，陽性率分別為18.2%和58.9%，差異有統計學意義（字2=32.51，P=0.00）。鼻咽癌患者組7種熒光模式陽性，對照組只有4種熒光模式陽性，鼻咽癌組熒光模式更加豐富，見表2。

2.3 對照組和鼻咽癌組ANA陽性標本熒光滴度比較

ANA陽性標本，滴度1∶100，對照組陽性率78.6%，鼻咽癌組陽性率46.1%，兩者差異有統計學意義（字2=5.003，P=0.025）;滴度1∶320，對照組陽性率21.4%，鼻咽癌組陽性率38.2%，兩者差異無統計學意義（字2=1.444，P=0.229）;滴度1∶1 000，對照組未檢出，鼻咽癌組陽性率15.8%。對照組以低滴度1∶100為主，鼻咽癌組各個滴度都有分布，以中低滴度為主，見表3。

2.4 對照組和鼻咽癌患者組ANA陽性標本在細胞內定位比較

ANA陽性標本中，對照組和鼻咽癌患者組在細胞內均以抗細胞核抗體為主，占71.5%和72.4%，兩組間抗細胞核抗體和抗細胞漿抗體的比例差異無統計學意義（字2=0.233、0.082;P=0.630、0.775）。鼻咽癌組抗細胞分裂期蛋白抗體占抗核抗體陽性2.6%，對照組未檢出，見表4。

3 討論

早期診斷是治療鼻咽癌，降低死亡率，提高患者生活質量的關鍵。目前，臨床上以檢測EB病毒抗體篩選早期鼻咽癌。但超過90%的人曾經感染EB病毒，部分正常的人體內存在潛伏感染狀態的EB病毒。EB病毒感染存在于傳染性單核細胞增多癥等多種疾病。部分鼻咽癌患者EB病毒感染陰性。尋找新的血清標志物單獨或聯合EB病毒抗體診斷早期鼻咽癌是當今腫瘤研究的熱門[8]。腫瘤在發生發展的過程中，惡性轉化的細胞過量表達正常的成分、合成新的成分或者對自體蛋白翻譯后俢飾、錯誤折疊產生腫瘤相抗原。腫瘤相抗原已經廣泛應用于臨床輔助診斷腫瘤。腫瘤早期，腫瘤相抗原濃度低，在血液存在時間短或集中的局部不能進入循環系統，常規方法難以檢測。腫瘤抗原刺激機體免疫系統產生自身抗體[9]，自身抗體的產生放大了檢測的生物信號，在腫瘤產生的早期就達到抗體檢測的血清水平。自身抗體能夠穩定地存在循環血液中，便于收集檢測。自身抗體出現在臨床癥狀前數月甚至數年的患者血液中，而且易于檢測。相對于低濃度的腫瘤相關抗原，自身抗體能夠更早輔助診斷惡性腫瘤[10-11]。自身抗體是診斷早期腫瘤十分有前景的腫瘤標志物。

間接免疫熒光法檢測ANA是臨床檢查自身抗體實驗室檢測的推薦方法[12]。本研究中，鼻咽癌組患者ANA陽性率高于對照組，差異具有統計學意義，顯示患者體內存在針對鼻咽癌組織的自身抗體，和童永清[13]研究相符。對照組ANA以1∶100低滴度為主，鼻咽癌患者組以1∶100和1∶320中低滴度為主，還有一部分對照組未檢出的1∶1 000高滴度。咽癌組患者組和對照組都是以抗細胞核抗體為主，熒光模式比健康者豐富。Ⅰ～Ⅱ期組和Ⅲ～Ⅳ期患者陽性率差異無統計學意義，ANA與腫瘤轉移關系不大。生理狀態下，健康者能產生少量自身抗體，建立獨特性和抗獨特性網絡，抑制自身免疫的出現發揮生理調節的作用。少部分健康者血清能檢出低滴度的自身抗體。鼻咽癌腫瘤細胞惡變產生了新的蛋白質，或者某些蛋白質被過度表達，從而引起免疫應答產生自身抗體。腫瘤抗原的自身抗體增加了患者血清的陽性率，提高免疫熒光的滴度。鼻咽癌是一個多因素、多階段、多基因參與的惡性腫瘤。腫瘤細胞惡變形成不同的腫瘤抗原，經免疫應答產生不同的自身抗體。鼻咽癌患者血清比健康者有更多不同種類的自身抗體，在ANA檢測中顯現更多的熒光核型。比較對照組和鼻咽癌患者組ANA分布的細胞定位和熒光模型，兩組均以抗細胞核抗體為主。周期蛋白型、著絲點型和紡錘體型的熒光模式只出現在患者血清中，核仁型也比對照組高。前三種熒光核型自身抗體對應的靶抗原都是細胞有絲分裂分裂期出現的蛋白質[14]。核仁含有豐富的核糖體蛋白，與細胞增殖生長密切相關。核仁型行對應的靶抗原可能是某些與細胞增殖或生物合成有關的蛋白質。這提示了鼻咽癌患者體內ANA相應的靶抗原可能是某些與細胞分裂或細胞內生物合成有關的蛋白質。這就為ANA早期診斷鼻咽癌，甚至治療鼻咽癌提供了理論上的可能性。

間接免疫熒光法檢測ANA能對靶抗原所在的細胞成分進行熒光染色，顯現出特征性的熒光模式。熒光模式初步區分不同的ANA，但不能確認靶抗原的本質。利用蛋白質微陣列，血清學篩選cDNA表達文庫等技術[15-16]分析特征性熒光核型，明確其靶抗原的本質。研究靶抗原在鼻咽癌發生發展的分子機制，為鼻咽癌的診斷與治療提供理論支持。篩選靶抗原對應的自身抗體，尋找對鼻咽癌特異性的自身抗體或自身抗體譜以補充或者驗證ANA對鼻咽癌的早期診斷。

綜上所述，鼻咽癌患者和健康者ANA的差異為鼻咽癌的早期診斷提供了一定的依據。

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（收稿日期：2019-02-03） （本文編輯：張亮亮）