探討IL-34對慢性根尖炎中RANKL/OPG平衡的影響

王敏 徐麗 朱永娜 張曉東

[摘 要] 該文研究之目的：慢性根尖炎主要是以根尖炎性骨破壞為表現的口腔常見疾病，RANKL/OPG調節慢性根尖周病中的骨吸收。該文主要研究炎性因子IL-34對RANKL/OPG的平衡的影響，從而進一步探索IL-34在該疾病中的致病機理。之方法：實驗組選用18組根尖周炎病例的肉芽組織，對照組選用正畸拔牙中的健康牙周組織8例。應用免疫組化檢測IL-34、RANKL及OPG的表達情況，并進行數據測量及定量分析三者之間的相關性。之結果：在慢性根尖周炎中IL-34在根尖周炎和對照組的表達量分別為0.206±0.038和0.131±0.023，差異有統計學意義（P<0.05）。在根尖周炎組IL-34與RANKL呈負相關（r=-0.578，P=0.039）;IL-34與OPG呈正相關（r=0.778，P=0.000），差異均有統計學意義。之討論：本次實驗證明了IL-34與根尖周炎的發生有很大關系，但IL-34可能只是很多影響RANKL/OPG平衡的炎性因子的一種。

[關鍵詞] IL-34;RANKL;OPG

[基金項目] 蚌埠醫學院自然科學基金（BYKY17118）

[作者簡介] 王 敏，就職于蚌埠醫學院第二附屬醫院口腔科;徐 麗，就職于蚌埠醫學院第一附屬醫院口腔科;朱永娜，張曉東，就職于蚌埠醫學院第二附屬醫院口腔科。

[中圖分類號] G642.0? ? [文獻標識碼] A? ? [文章編號] 1674-9324（2020）23-0113-02? ? [收稿日期] 2019-11-13

慢性根尖周炎是口腔臨床上最為常見的一種疾病，臨床表現為炎癥性的骨吸收導致的根尖組織破壞[1]。骨吸收主要由破骨細胞負責。核因子κB受體活化因子配體RANKL是由成骨細胞、骨細胞、T或B淋巴細胞等分泌的膜結合配體，其與受體RANK結合后，促進破骨細胞的形成并產生骨吸收[2]。而OPG（骨保護素）是另外一種配體，它可以結合RANK受體，從而阻斷了其與RANKL的結合，破骨細胞的產生被抑制了，從而壓抑了炎性骨的破壞[3-4]。RANKL/OPG的平衡受炎癥因子IL-34的調節。本課題組前期研究表明IL-34與慢性根尖周病的發生密切相關[5-7]，但是其在該病中的致病機理還不清楚。因此本課題旨在前期研究的基礎上通過免疫組化研究慢性根尖周肉芽腫和慢性根尖周囊腫中三者的表達，揭示IL-34對慢性根尖周病中RANKL/OPG平衡的調節，從而進一步探索IL-34在該疾病中的致病機理，為慢性根尖周病的臨床治療提供一定的理論依據。

一、資料與方法

（一）臨床資料

【實驗組及對照組】

根據X線表現確定標本

收集2018年1月—2018年6月在蚌埠醫學院第二附屬醫院口腔科就診的病例，患者年齡均為成年，患者無其他口腔疾病和全身系統性疾病。由兩名口腔影像學醫生與主治大夫一起根據X線參考標準[8]確定慢性根尖炎病例，并收集其組織標本40例。

收集因正畸拔除健康牙時切除的牙周組織10例為正常對照組。

（二）方法

1.HE染色。及時將收集的標本（軟組織）用去離子水仔細清洗。放于甲醛溶液中（4%）固定。一天后行石蠟包埋，連續切片后進行染色。在顯微鏡下觀察結果，嚴格遵照相應標準，并與影像學資料進行對比，最終得出18例實驗組，8例對照組。

2.免疫組化。嚴格按照SP免疫組化法，將實驗組與對照組進行抗原修復。每張切片加入相應的IL-34、RANKL及OPG抗體，加入DAB顯色液，蘇木素復染后得到觀察切片。在顯微鏡下觀察，每張切片隨機選擇其中5個視野進行拍照，用圖像軟件進行數據處理分析。

3.數據處理。將所得到的數據使用SPSS20.0軟件進行分析，將所得到的結果計量資料以均數±標準差（x±s）表示，相關結果比較用t檢驗，相關性分析用Pearson法，P<0.05為差異有統計學意義。

二、結果

（一）HE染色結果

根尖炎中的肉芽組織HE染色明顯可見大量炎性細胞浸潤（包括GRA、LYN及Plasma cell等），很多微小的新生血管形成。因正畸而拔牙的健康牙周組織HE染色見大量纖維組織，炎性細胞較少。

（二）IL-34的表達

兩組切片行免疫組化，后對根尖組（n=18）和對照組（n=9）進行IL-34表達測量，所得的兩組結果進行獨立樣本t檢驗，結果參見表1，統計學分析所得（t=2.59，P=0.017）P<0.05，兩者差異有統計學意義。

（三）IL-34與RANKL和OPG表達的關系

如表2所示，經Pearson相關檢驗，在根尖炎組中IL-34與RANKL的相關性分析結果有統計學意義（P<0.05），呈負相關。IL-34與OPG的相關性分析有統計學意義（P<0.05），呈正相關。

三、討論

本次實驗證實了IL-34與根尖周炎的發生發展有著很大的聯系。IL-34的表達與RANKL表達呈負相關，與OPG的表達呈正相關。彭彬等[9]在2005年就在SD大鼠的根尖周炎中發現了RANKL，在牙髓暴露后的7天觀察就發現破骨細胞樣細胞和RANKL呈陽性的細胞。14天后隨著炎性骨吸收進一步發生，破骨細胞和RANKL陽性細胞繼續增多。但28天以后，骨吸收減弱，相對應的破骨細胞和RANKL陽性細胞較少，正好與此次實驗結果不符。黃哲敏[ 10 ]在2015年發現，在類風濕性關節炎的患者中的血清中發現，IL-34與RANKL陽性細胞表達呈正相關。國外學者在2012年在大鼠的根尖周炎模型中發現，在根尖周炎發生后的第7和第8周，發現RANKL表達明顯增加，OPG表達明顯減少。其第7周，兩者比值是正常的對照組的30倍。第8周，兩者的比例是對照組的41倍[ 11 ]。Menezes R等[ 12 ]在2008年發現RANKL和OPG之間的比值大小，可以作為根尖周炎病變不同時期的標準。

本次實驗的結果的異常原因可能顯示影響RANKL/OPG平衡除了IL-34炎性因子外可能還有其他因子。另外和實驗切片的選取，抗體的購買選擇都有可能產生異常結果，未達到預期的實驗目的。故下一步實驗增加樣本量，并且對樣本的質量進行嚴格篩選，希望能找到除IL-34外其他能影響RANKL/OPG表達的炎性因子。

參考文獻

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[4]胡菊花，李倩，王艷青，等.白細胞介素-21和核因子κB受體活化因子配體在人根尖囊腫和肉芽腫中的表達及臨床意義[J].華西口腔醫學雜志，2015，3（3）：244-248.

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[6]Menezes R，Garlet T P，Letra A，et al.Differential Patterns of Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B Ligand/Osteoprotegerin Expression in Human Periapical Granulomas：Possible Association with Progressive or Stable Nature of the Lesions[J].Journal of Endodontics，2008，34（8）：932-938.

The Effect of IL-34 on the Balance of RANKL/ OPG in Chronic Periapical Inflammation

WANG Mina，XU Lib，ZHU Yong-naa，ZHANG Xiao-donga

（a.Department of Stomatology，The Second Affiliated Hospital of Bengbu Medical College，Bengbu，Anhui Province 233000，China;b.Department of Stomatology，The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College，Bengbu，Anhui Province 233000，China）

Abstract：Objective：Chronic apical inflammation is mainly a common oral disease characterized by apical inflammatory bone destruction.RANKL/OPG regulates bone resorption in chronic periapical disease.In this paper，the effect of inflammatory factor IL-34 on the balance of RANKL/OPG is studied，so as to further explore the pathogenic mechanism of IL-34 in the disease.Methods：The granulation tissue of 18 groups of periapical periodontitis was selected in the experimental group，and 8 cases of healthy periodontal tissue in orthodontic extraction were selected in the control group.The expression of IL-34，RANKL and OPG was detected by immunohistochemistry，and the data were measured and quantitatively analyzed.Results：In chronic periapical periodontitis，the expression levels of IL-34 in periapical periodontitis and control group were 0.206 ±0.038 and 0.131 ±0.023 respectively，and the difference was statistically significant （P<0.05）.In periapical periodontitis group，IL-34 was negatively correlated with RANKL （r=-0.578，P=0.039），and IL-34 was positively correlated with OPG （r=0.778，P=0.000）.Discussion：This experiment proves that IL-34 has a great relationship with the occurrence of periapical periodontitis，but IL-34 may only be one of the many inflammatory factors that affect RANKL/OPG balance.

Key words：IL-34;RANKL;OPG