b型流感嗜血桿菌莢膜多糖提取新工藝中Triton X-114殘留含量的質量標準研究

朱文勇 歐陽圣潔 代小虎 宋紹輝 寸怡娜 陳 楓 廖國陽

中國醫學科學院醫學生物學研究所，云南昆明 650118

b型流感嗜血桿菌（Haemophilus influenzaetype b,Hib）為莢膜型致病菌，可導致敗血癥、會厭炎、肺炎、腦膜炎等多種侵襲性疾病[1-3]。接種Hib結合疫苗是目前預防其感染的最有效途徑[4]。Hib莢膜多糖是其最主要的毒力因子[5]和免疫抗原[6]，現在上市的Hib結合疫苗，莢膜多糖的提取均采用傳統工藝[7]，其中使用大量的苯酚，嚴重影響操作者的身體健康，破壞生態環境。為此，國內外開展了Hib莢膜多糖提取新工藝的研究[8-13]，其中利用Triton X-114進行多糖純化的新工藝，具有安全環保、成本低廉、線性放大好等優點，同時也有相關研究[14-15]將Triton X-114應用于生物制品成品生產工藝過程中。同時，新工藝提取的多糖與載體蛋白進行結合后的原液穩定性研究也初步顯示了良好的應用潛力[16]，因此，有望將該工藝投入到實際生產中。而對于其在莢膜多糖中的殘留控制則影響著疫苗產品的質量安全，目前在《中國藥典》中并沒有關于Triton X-114的檢測方法，但已有文獻[17]根據Triton X-100的檢測方法建立了Triton X-114的檢測方法，而其在Hib莢膜多糖中殘留含量的質量標準尚無相關研究。本文通過對苯酚法應用于Hib莢膜多糖中Triton X-114殘留含量檢測的可行性進行驗證，并對多批次的檢測數據進行統計，結合安全性評價結果初步制定出Hib莢膜多糖中Triton X-114殘留量的質量控制標準。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

Varioskan Flash全波長多功能酶標儀（美國Thermo公司）；苯酚（西隴化工有限公司）；Triton X-114（美國Sigma公司）。Hib莢膜多糖由中國醫學科學院醫學生物學研究所生物制品五室制備。……