HPLC法測定中藥制劑蘆薈散中蘆薈苷的含量

王建榮 林詩瑤

福州市第二醫院藥劑科，福建福州 350007

蘆薈作為藥用植物被應用的歷史已經達幾千年[1]，在2015年版《中國藥典》一部中記載蘆薈為百合科植物庫拉索蘆薈Aloe barbadensis Miller、好望角蘆薈Aloe ferox Miller或其他同屬近緣植物葉的汁液濃縮干燥物。蘆薈的原產地在非洲干燥沙漠地帶，如今在熱帶及亞熱帶地區有著較廣泛的分布[2]。蘆薈是在唐代中期傳入中國，現今我國主要的種植地區集中在廣東、海南、福建、云南等熱帶亞熱帶地區。蘆薈中的蘆薈苷，又稱蘆薈大黃素苷或蘆薈素，是蘆薈的主要活性成分[3-4]。一種傳統的中藥制劑以蘆薈和甘草為主要原料制成的蘆薈散，主要具有清熱下泄、消炎解毒等功效，主要用于治療濕癬抓搔有黃汁[5]。目前檢測含有蘆薈苷成分的方法主要有紫外分光光度法、薄層色譜法及高效液相色譜法[6-7]，蘆薈苷的檢測方法主要采用HPLC法，該中藥制劑成分簡單，采用HPLC法能夠準確有效的對制劑中蘆薈苷進行測定，并進行方法學研究，進一步驗證該方法的準確有效性。

1 材料與方法

1.1 實驗材料及儀器

實驗用蘆薈散由實驗室提供；蘆薈苷對照品購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈、甲醇均為色譜級，其余實驗用溶劑為分析級，實驗用水均為純凈水。實驗用儀器為戴安 Ultimate3000高效液相色譜儀（Thermo四元泵，紫外檢測器），電子天平產自梅特勒－托利多儀器（上海）有限公司，超聲提取器產自濟寧天華超聲電子儀器有限公司。

1.2 方法

觀察指標包括：線性試驗、重復性試驗、回收率試驗、耐用性試驗、檢出限試驗及測定樣品含量。

表1 線性關系試驗結果

1.2.1 對照品溶液的制備 取蘆薈苷對照品適量，精密稱定，加甲醇溶解并制成每1mL含0.4mg的對照品溶液。

1.2.2 供試品溶液的制備 取蘆薈散粉末（過120目篩）約0.2g，精密稱定，置100mL量瓶中，加甲醇適量，超聲振提處理（功率250W，頻率33k Hz）30min，放置至室溫，以甲醇定容至刻度。搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

1.2.3 測定 分別將對照品液與供試品液取上清液，過0.45μm濾膜，注入液相色譜儀，測定，計算。1.2.4 色譜條件 色譜柱：ACE C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈－水（25∶75）；柱溫：30℃；波長：355nm；流速：1.0mL/min；進樣量：10μL。

1.2.5 計算 試樣中蘆薈苷的質量分數X，數值以g/100g表示：

式中：

X—試樣中蘆薈苷的含量（g/100g）；A1—試樣中蘆薈苷的峰面積；C—標準液的質量濃度（mg/mL）；A2—標準液中蘆薈苷的峰面積；V—試樣定容體積（mL）；m—試樣的質量（g）。

2 方法學考察

2.1 線性關系考察

精密稱取蘆薈苷對照品適量，用流動相溶解并定容至10mL，混勻，制成0.4mg/mL標準液。分別吸取蘆薈苷標準液，配制成 0.04，0.08，0.10，0.15，0.20，0.25mg/mL的系列標準液，按1.2.4項下色譜條件進行分析。以對照品濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制線性標準曲線，得線性標準曲線方程為：y=192.84x+1.2883，R2=0.9996，表明線性關系良好。見表1。

圖1 線性關系圖

2.2 重復性考察

分別稱取6個蘆薈散樣品，按1.2.2項下項下供試品溶液制備，并按1.2.4項下色譜條件進行分析，結果：RSD=1.56%，證明此方法重復性良好。

2.3 加樣回收率考察

分別稱取蘆薈散樣品約0.1g，共6份，精密稱定，分別精密加入相應對照品，按上述方法測定含量，計算回收率，結果：回收率均在92%～105%，RSD=0.92%，證明此方法的回收率良好。見表2。

2.4 耐用性試驗

分別考察不同流速（0.8、1.0、1.2mL/min）、不同柱溫（25℃、30℃、35℃）、不同色譜柱條件下樣品的含量變化。結果：RSD分別為0.79%、0.17%、0.57%，表明此方法耐用性較好。

2.5 穩定性試驗

考察樣品在24h內的穩定性，同一樣品每2h進樣一次測定峰面積，結果：RSD為2.07%，表明此方法在24h內穩定性較好。

2.6 檢出限試驗

分別稀釋對照品濃度為 0.004、0.01、0.02μg/mL，進樣分析。試驗結果：空白峰高為0.004，為空白峰高3倍的濃度為0.01μg/mL，故蘆薈苷的檢出限為0.01μg/mL。見圖 1 。

2.7 不同批次樣品含量測定

精密稱定6個蘆薈散樣品0.1g，按1.2.2項下供試品溶液制備，并按1.2.4項下色譜條件進行分析，結果表明：蘆薈苷平均含量為9.31g/100g。

3 討論

醫藥領域對于蘆薈的研究由來已久，歷經時間累積的研究證實，蘆薈中含有幾十種生物活性成分，對人體具有積極有益的藥理作用，具有促進創面愈合、潤腸通便、抗菌消炎等藥理作用[8-11]，因此又被稱為“多效良藥”“天然美容醫生”“植物大夫”等。隨著現代科學的進步及發展，人類對蘆薈的研究與開發也在不斷的進步和深化。由于蘆薈具備的多種藥用價值，現今在藥品、保健食品、化妝品及其他工農業等多個領域被廣泛應用[12]。綜上，蘆薈目前是極具研究與開發前景的一種藥用植物，因此對蘆薈的化學成分研究也是重中之重，那么構成蘆薈主要藥用價值的蘆薈苷的測定具有一定的研究價值及意義。

我國在20世紀80年代初才開始了對蘆薈的研究，當時的研究主要集中在蘆薈的分布情況、特性、栽培技術及生態環境需求等方面，而在化學成分、生物活性組成成分、產品生產加工工藝及臨床試驗等方面的發展研究與國外相比發展較慢，因此對蘆薈苷這種單一的成分測定及方法學研究分析也是目前鑒別及衡量蘆薈品質的一項重要手段[13]。

本研究應用高效液相色譜法對蘆薈散中蘆薈苷進行含量測定及方法學研究，試驗結果為：蘆薈苷在0.04～0.25mg/mL濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系，回歸方程為y=192.84x+1.2883，R2=0.9996；重復性RSD為1.56%，重復性良好；回收率平均值為96.52%，RSD為0.92%，回收率良好；耐用性考察不同流速、不同柱溫、不同色譜柱條件下樣品的含量，RSD分別為0.79%、0.17%、0.57%，耐用性良好；蘆薈苷的檢出限為0.01μg/mL。經研究證明，該方法準確可靠、切實可行，在試驗過程中發現，在對供試品和對照品進行處理時，必須采用現用現配原則，而且需要避光進行試驗，在超聲過程當中，超聲提取的時間不可過長，建議在超聲過程中控制溫度，可以適當加些冰塊進行超聲，試驗前期處理完成后應立即進行測定，檢測時間最好不要超過1d，避免因為操作過程中時間延長使蘆薈苷不穩定導致測定數值不準確[14]。

有研究表明，蘆薈苷大部分是蘆薈苷A和蘆薈苷B的混合體，其中蘆薈苷A具有較高的藥用價值[15]，對于蘆薈苷A產生藥用價值的機理，仍需進一步研究。