呼吸道九聯(lián)檢試劑在兒童呼吸道感染病原體檢測(cè)中的應(yīng)用價(jià)值

陳文鋒 阮永欽 李 樺

廣東省陽(yáng)江市婦幼保健院檢驗(yàn)科，廣東陽(yáng)江 529500

呼吸道感染是一種兒科常見病，引起感染的原因很多，如衣原體、支原體、病毒、真菌、細(xì)菌等，一種病原體可具有多種表現(xiàn)形式，同一種臨床表現(xiàn)又可由多種病原體所致[1]。及早查明兒童呼吸道感染的病原體，對(duì)于提高治療方案的有效性、準(zhǔn)確性、針對(duì)性具有重要意義。在孔京慧等[2]研究中，認(rèn)為呼吸道九聯(lián)檢應(yīng)用于兒童呼吸道感染疾病診斷中，可有效檢出不同病原體，具有重要的診斷價(jià)值。本研究納入本院2017年6月～2019年6月兒科收治的呼吸道感染患者1500例、同期門診體檢的健康兒童1500例，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入2017年6月～2019年6月本院兒科收治的呼吸道感染患者1500例作為實(shí)驗(yàn)組，以及同期門診體檢的健康兒童1500例作為對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組男820例，女680例；年齡2～12歲，平均（7.1±1.5）歲；病程 1～ 6d，平均（3.52±1.14）d；體 重 4.5～ 38.5kg，平 均（21.65±3.59）kg。 對(duì)照組男840例，女660例；年齡3～11歲，平均（7.05±1.44）歲；病程 2～ 5d，平均（3.55±1.11）d；體重 4.9 ～ 38.2kg，平均（24.71±3.66）kg。

本研究得到醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）均無(wú)口服抗菌藥物史；（2）無(wú)器質(zhì)性病變；（3）家屬已簽署此次研究知情同意書；（4）病情以及生命體征均穩(wěn)定。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在重大感染疾病者；（2）合并嚴(yán)重先天性、遺傳性疾病者；（3）腎、肝、心等臟器功能不全者；（4）存在血液系統(tǒng)疾病者；（5）未開展研究前1個(gè)月進(jìn)行抗菌治療者。

1.2 方法

采集標(biāo)本：抽取所有患兒3mL靜脈血，以3000r/min速率離心5min后，分離血清，當(dāng)天完成檢測(cè)，一切操作謹(jǐn)遵相關(guān)說明書進(jìn)行。試劑、儀器：三目熒光顯微鏡（日本奧林巴斯集團(tuán)，OLYMPUS CX-22），試劑由西班牙比爾塞有限公司VIRCELL，S.L.生產(chǎn)。

方法：間接免疫熒光法，取25μL血清，采用PBS（聚丁二酸丁二醇酯）以1∶1的比例進(jìn)行稀釋。取30μL稀釋后的血清，加入吸附劑150μL中，充分混勻，而后進(jìn)行離心處理，速率為12000r/min，離心時(shí)間為10min，將沉淀物質(zhì)除去。在載玻片上每個(gè)孔加入吸附劑15μL對(duì)處理過的血清進(jìn)行陽(yáng)性、陰性對(duì)照。將載玻片置入濕盒中，溫育90min，溫度為37℃。采用PBS緩沖液對(duì)載玻片漂洗10min后，采用蒸餾水漂洗。自然晾干載玻片之后，每個(gè)孔中加入熒光素結(jié)合物15μL，置入濕盒中，溫育30min，溫度為37℃。每個(gè)孔中加入封閉介質(zhì)1滴，蓋上蓋玻片，采用三目熒光顯微鏡在400倍鏡下觀察。

1.3 觀察指標(biāo)與判定標(biāo)準(zhǔn)

陽(yáng)性對(duì)照：PIVS、RSV、IFB、IFA以及ADV對(duì)陽(yáng)性血清1%～15%細(xì)胞的細(xì)胞膜、細(xì)胞漿、細(xì)胞核出現(xiàn)蘋果熒光綠色。COX、CP以及LP中所有的細(xì)菌會(huì)呈現(xiàn)出蘋果綠色熒光。MP對(duì)陽(yáng)性血清在細(xì)胞外圍則呈現(xiàn)出蘋果綠色熒光[3]。陰性對(duì)照：COX、CP以及 LP無(wú)熒光，PIVS、RSV、IFB、IFA、ADV、MP細(xì)胞呈紅色[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS26.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料數(shù)據(jù)以[n（%）]表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者病原體陽(yáng)性率比較

實(shí)驗(yàn)組檢出780例病原體陽(yáng)性，對(duì)照組檢出62例病原體陽(yáng)性。實(shí)驗(yàn)組病原體陽(yáng)性檢出率（100.00%）明顯高于對(duì)照組（91.94%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組患者病原體陽(yáng)性率比較[n（%）]

2.2 實(shí)驗(yàn)組病原體單一感染與混合感染檢出情況

實(shí)驗(yàn)組780例陽(yáng)性標(biāo)本中，550例感染，占70.51%（550/780）。 其 中 380例 單 一 感 染，占69.09%（380/550）；170例混合感染，占 30.91%（170/550）。MP單一感染率以及混合感染率均高于其他病原體（PIVS、IFB、IFA、RSV、ADV、CP、COX、LP），P＜ 0.05（單一感染率，χ2=112.6393、142.5958、142.5958、86.6400、112.6393、112.6393、、112.6393、112.6393，P均 ＜ 0.05。 混 合 感 染 率，χ2=58.8642、58.8642、58.8642、37.7778、58.8642、37.7778、58.8642、58.8642，P均＜ 0.05）。見表 2。

表2 病原體單一感染與混合感染檢出情況比較[n（%）]

2.3 實(shí)驗(yàn)組男女性別陽(yáng)性率比較

實(shí)驗(yàn)組780例陽(yáng)性標(biāo)本中，女380例，占 48.72%（380/780）， 男 400例， 占 51.28%（400/780），男女性別陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.1026，P=0.7488 ＞ 0.05）。

3 討論

兒童由于免疫功能低下，呼吸道容易受到各種病原體的侵襲，進(jìn)而引發(fā)呼吸道感染，具體包括毛細(xì)支氣管炎、支氣管肺炎、支氣管炎、扁桃體炎等[5-6]。呼吸道感染中非典型性呼吸道感染患者臨床癥狀不典型，極易造成誤診，明顯增加了臨床治療難度[7]。據(jù)調(diào)查顯示，將近90%的小兒呼吸道感染為病毒感染[8]。兒童呼吸道感染中的非典型病原體包括副流感病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肺炎衣原體、肺炎支原體、嗜肺軍團(tuán)菌等[9-10]。對(duì)于不明原因發(fā)熱一周以上、喘息、反復(fù)咳嗽的患者，往往無(wú)法確定病原體，導(dǎo)致濫用抗生素，明顯增加了交叉感染率[11]。目前，我國(guó)對(duì)于兒童呼吸道感染病原學(xué)的研究相對(duì)較少，在臨床癥狀方面小兒肺炎患者病情輕重不一，因此加強(qiáng)對(duì)兒童呼吸大感染患者病原體檢查極為重要。

本研究九項(xiàng)呼吸道病原體檢測(cè)均為IgM，因?yàn)閮和粑栏腥净颊呤紫瘸霈F(xiàn)的抗體為IgM抗體[12]。病毒感染一般在發(fā)病1周后出現(xiàn)，發(fā)病7～14d內(nèi)會(huì)達(dá)到高峰，因此IgM抗體可作為近期感染的有效標(biāo)志物[13]。本研究示，實(shí)驗(yàn)組病原體陽(yáng)性檢出率明顯高于對(duì)照組，MP陽(yáng)性率明顯高于其他病原體（P＜0.05）。MP單一感染感染率以及混合感染率均高于其他病原體（P＜0.05）。本研究結(jié)果與王生清等[14]研究結(jié)果接近。提示兒童呼吸道感染中以MP-IgM病原體為主。機(jī)體在感染MPIgM之后，正常的免疫功能會(huì)發(fā)生紊亂，出現(xiàn)延遲型變態(tài)反應(yīng)，導(dǎo)致機(jī)體受損，增加其他病原體侵入幾率。需要注意的是流感病毒也是引發(fā)兒童呼吸道感染的重要病原體，IFA以及IFB往往會(huì)造成局部?jī)和粑栏腥颈┌l(fā)，因此加強(qiáng)對(duì)兒童呼吸道感染患者IFA以及IFB等病原體監(jiān)測(cè)極為重要。對(duì)于兒童呼吸道感染患者進(jìn)行呼吸道九聯(lián)檢試劑檢測(cè)IgM抗體，只需要一份血液標(biāo)本，即可檢測(cè)患者血清中PIVS-IgM、IFB-IgM、IFA-IgM、RSV-IgM、ADVIgM、CP-IgM、COX-IgM、MP-IgM、LP-IgM等病原體，具有檢測(cè)迅速、操作方便、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，在盡快確定致病因子，為臨床醫(yī)師制定治療方案具有重要的指導(dǎo)意義[15]。

綜上所述，對(duì)兒童呼吸道感染患者進(jìn)行呼吸道九聯(lián)檢試劑進(jìn)行病原體檢測(cè)，可有效避免臨床濫用抗菌藥物，值得在基層醫(yī)院大力推廣，給更多兒童呼吸道感染患者帶來福音，具有一定的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。