生化檢驗(yàn)并不是你想的那么簡(jiǎn)單

熊子明

生化檢驗(yàn)是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的重要內(nèi)容，定量檢測(cè)是其顯著特征。很多人認(rèn)為，生化檢驗(yàn)中，只要使用先進(jìn)儀器設(shè)備，配合合格試劑，由有資質(zhì)的人進(jìn)行操作，便可很好地開展生化檢驗(yàn)工作。其實(shí)，生化檢驗(yàn)并不是你想的那么簡(jiǎn)單。生化檢驗(yàn)中存在諸多影響因素，稍有差池，便可能影響檢測(cè)結(jié)果。

標(biāo)本分離及測(cè)定

標(biāo)本的及時(shí)分離及測(cè)定是反映標(biāo)本真實(shí)情況的保障。通過NADH轉(zhuǎn)化成NAD的變化，檢測(cè)其物質(zhì)含量的試驗(yàn)，血液存放時(shí)間或多或少存在影響。原因在于存放的時(shí)間越長(zhǎng)，紅細(xì)胞通過血清中的糖，實(shí)現(xiàn)無氧酵解，產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸促使NADH轉(zhuǎn)化成為NAD，這樣一來，檢測(cè)結(jié)果容易出現(xiàn)假陽(yáng)性，包括LDH、HBDH、ALT、AST、BUN等。另外，因?yàn)樘墙徒猓S著存放時(shí)間延長(zhǎng)，血液中GLU按照5%～7%/小時(shí)的速度下降。故此，生化檢驗(yàn)中要與臨床做好溝通，加強(qiáng)抽血與標(biāo)本運(yùn)送人員的培訓(xùn)與指導(dǎo)，檢測(cè)人員收到標(biāo)本后，要迅速分離血清并完成檢測(cè)。同時(shí)，全自動(dòng)生化分析儀的延遲時(shí)間可設(shè)定超過60秒，延遲期內(nèi)，試劑消除丙酮酸的干擾，避免假陽(yáng)性。

規(guī)范抗凝劑使用

目前，臨床上常用抗凝劑有肝素、枸鹽酸鈉以及EDTA-2K等。其中，TBA與AFU不可選擇肝素作為抗凝劑，因?yàn)楦嗡貢?huì)導(dǎo)致TBA與AFU試劑出現(xiàn)混濁現(xiàn)象，吸光度假性升高，影響檢測(cè)結(jié)果。實(shí)際操作中，一定要按照試劑說明書正確使用。

儀器用水

合格的儀器用水直接關(guān)系檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性與可靠性。測(cè)定鋅、鈣、鎂、磷、銅及鐵等離子類項(xiàng)目時(shí)，儀器用水質(zhì)量至關(guān)重要，雖然目前一般醫(yī)院配備有生化儀制水系統(tǒng)，但是，制水系統(tǒng)基本上是制備去離子水，離子交換樹脂使用一段時(shí)間后，交換能力隨之下降，需要定期更換，否則制備的水離子含量較高，導(dǎo)致電導(dǎo)率升高。另外，二氧化碳、血氨等檢測(cè)項(xiàng)目，若是水質(zhì)不好，儀器用水含有的二氧化碳及氨含量較高，直接影響檢測(cè)結(jié)果。如果血清中含有GLDH，儀器用水有氨，NADH被消耗，利用NADH的酶聯(lián)連續(xù)監(jiān)測(cè)法，結(jié)果偏高。故此，生化檢驗(yàn)中需定期監(jiān)測(cè)水質(zhì)，若是儀器用水電阻<1.0M?，需要及時(shí)更換離子交換樹脂或者活性炭。

試劑使用

1.參數(shù)設(shè)置。生化分析儀一般由分析程序供用戶設(shè)置，如樣品量、試劑量、波長(zhǎng)以及分析方式與延遲時(shí)間、測(cè)試時(shí)間等。在此，以延遲時(shí)間與加樣程序設(shè)定為例，分享如何準(zhǔn)確設(shè)定分析參數(shù)。例如，肌酐苦味酸測(cè)定法，苦味酸基于堿性條件下，50秒前先快速與快反應(yīng)物質(zhì)（如乙酰、乙酸）產(chǎn)生紅色化合物，120秒后，堿性苦味酸與慢反應(yīng)物質(zhì)形成陽(yáng)性干擾，故此，延遲時(shí)間一般設(shè)定50～60秒，測(cè)定時(shí)間<60秒，如此一來，便可消除快反應(yīng)與慢反應(yīng)產(chǎn)生的干擾作用，提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性與真實(shí)性。試劑說明書中關(guān)于參數(shù)的設(shè)置，一般是由廠家驗(yàn)證合理、有效的，不過，檢驗(yàn)人員在實(shí)際操作中，還是需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件、樣本結(jié)果以及儀器狀態(tài)等情況適當(dāng)調(diào)整，保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

2.校準(zhǔn)液使用。目前，生產(chǎn)廠家提供的校準(zhǔn)液一般僅僅適用于某一特定分析系統(tǒng)，同一項(xiàng)目不同方法的校準(zhǔn)液不可混合使用。例如，膽紅素釩酸鹽法采用重氮法的校準(zhǔn)液進(jìn)行校準(zhǔn)，TBA循環(huán)酶法用比色法校準(zhǔn)液進(jìn)行校準(zhǔn)，影響檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。不同廠家的校準(zhǔn)品及試劑存在差異，建議檢驗(yàn)人員選擇與自己實(shí)驗(yàn)室相符合的校準(zhǔn)品，保證檢測(cè)準(zhǔn)確性。

3.開瓶穩(wěn)定性。開瓶穩(wěn)定性是判斷檢驗(yàn)試劑質(zhì)量的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。現(xiàn)目前，某些項(xiàng)目的方法并不能達(dá)到人們索要求的試劑，開瓶后，在儀器內(nèi)放的時(shí)間長(zhǎng)，無須定標(biāo)，例如，PH為堿性的試劑（如ALP、TP、GS），開瓶后，試劑吸收空氣中二氧化碳，降低試劑本身的PH值，若是長(zhǎng)時(shí)間開瓶不定標(biāo)或者校準(zhǔn)，檢測(cè)結(jié)果便會(huì)出現(xiàn)偏差。故此，上機(jī)試劑量需根據(jù)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本量決定，放置1～2天用量是可以的，試劑瓶的使用時(shí)間不可太長(zhǎng)，需及時(shí)更換，另外，要根據(jù)試劑的特性及時(shí)校準(zhǔn)。

交叉污染

全自動(dòng)生化分析儀使用過程中，檢驗(yàn)人員單做某一個(gè)項(xiàng)目時(shí)，結(jié)果沒有問題，但是將其與某些項(xiàng)目組合在一起的時(shí)候，結(jié)果出現(xiàn)異常。這種情況，我們首先考慮是否是交叉污染。交叉污染在生化分析儀檢測(cè)中很常見，原因可能是因?yàn)槿詣?dòng)生化分析儀的清洗系統(tǒng)隨著儀器使用時(shí)間的延長(zhǎng)，清洗效果下降，試劑交叉污染加劇。因此，檢驗(yàn)人員一定要按照要求，定期維護(hù)保養(yǎng)全自動(dòng)生化分析儀，及時(shí)更換零部件，定期對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，清洗到位，保證檢測(cè)準(zhǔn)確性;同時(shí)，一定要了解檢驗(yàn)項(xiàng)目的試劑組成、反應(yīng)原理以及所需條件，整合調(diào)整實(shí)驗(yàn)順序，盡量避免交叉污染現(xiàn)象。