當歸保健藥酒中肉桂薄層鑒別和阿魏酸含量測定※

周 和，王 奧

(1.遵義市食品藥品檢驗所，貴州 遵義563002；2.遵義產品質量檢驗檢測院，貴州 遵義563002)

保健藥酒是中國醫藥科學的重要組成部分，有著數千年的應用歷史及其治疾健身記載[1]。隨著現代科學技術的進步，藥酒在酒浸中藥傳統工藝基礎上，通過萃取、浸提和生物工程等現代化手段提取中藥中有效成分而成。藥借酒力，酒助藥勢，可充分發揮其效力。當歸保健藥酒包含當歸、肉桂、黃芪等十余味中藥[2]，具有活血化瘀、抗疲勞等功效，用于改善氣虛乏力、疲勞等癥狀。當歸中阿魏酸具有清除自由基、抗血栓、抑制腫瘤、增強精子活力、防治高血壓及心臟病等保健功能，是當歸保健藥酒中的重要指標性成分[3]。肉桂具有補火助陽、引火歸元、散寒止痛、溫通經脈的功效，在該藥酒中用量僅次于當歸[2]。薄層鑒別用于判斷投料藥材的真偽，含量測定用于評價指標性成分的多少。本研究對當歸保健藥酒進行肉桂薄層鑒別[2-4]及當歸中阿魏酸含量測定[5-8]，以期為當歸保健藥酒質量控制奠定一定的研究基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 美國Agilent-1260高效液相系統，Waters XSelect HSS T3(4.6 mm×250 mm，5μm)色譜柱；梅特勒-托利多XPE56型十萬分之一電子天平，梅特勒-托利多MS204TS型萬分之一電子天平，KQ-500DV型超聲波清洗機。

1.2 試藥與試劑 當歸保健藥酒(遵義融昇酒業有限責任公司，批號20150101，20150102，20150103)，陰性樣品(批號20180001，不含肉桂；20180002，不含當歸)，硅膠G板(青島海洋化工廠有限公司，批號20170818)。肉桂對照藥材(中國食品藥品檢定研究院，批號110786-201703)和當歸中阿魏酸對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號111773-201614)，甲醇、醋酸為色譜純，其他實驗試劑均為分析純。

2 肉桂薄層色譜鑒別

2.1 TLC方法 取當歸保健藥酒約100 mL，置250 mL分液漏斗中，加二氯甲烷15 mL振搖提取，重復2次，合并二氯甲烷提取液，60℃以下水浴中揮發至約1 mL，作為供試品溶液；陰性樣品溶液(20180001，不含肉桂)同法制備。另取肉桂對照藥材1 g，用20 mL 50%乙醇溶液超聲處理15 min，過濾，取濾液同法制備肉桂對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述3種溶液各5μL，依次點在同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(17∶3)為展開劑，晾干后噴二硝基苯肼乙醇試液[2-4]。

2.2 TLC結果 在當歸保健藥酒供試品溶液色譜圖相應的位置上，成功檢測出相同顏色的肉桂對照藥材主斑點，Rf值(比移值)適中，陰性樣品無干擾。(見圖1，掃描文章標題處二維碼，下同)。

3 當歸中阿魏酸含量測定

3.1 色譜條件 色譜柱：Waters XSelect HSS T3(4.6 mm×250 mm，5μm)；流動相：0.5%冰醋酸水溶液-甲醇(73∶27)；流速：1.0 mL/min；檢測波長：316 nm；柱溫：25℃[8]。

3.2 溶液制備

(1)阿魏酸對照品溶液 取阿魏酸對照品適量，用XPE56型十萬分之一電子天平精密稱定，置容量瓶中，加甲醇稀釋制成32.80μg/mL的對照品貯備液，于4℃冰箱中保存備用。再精密吸取儲備液適量，依次稀釋配置成5個不同濃度(0.82、1.64、3.28、6.56、13.12μg/mL)的阿魏酸對照品溶液。

(2)當歸保健藥酒供試品溶液 精密量取當歸保健藥酒50 mL，置于100 mL蒸發皿中，90℃水浴蒸干，殘渣用30 mL水分3次(每次10 mL)溶解并轉移至100 mL分液漏斗中，用乙醚振搖萃取3次(分別長15、15、10 mL)，水浴揮發，殘渣用5 mL甲醇溶解并轉移到10 mL容量瓶中，再用4 mL甲醇分2次洗滌蒸發皿，轉移到容量瓶中，甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.22μm微孔濾膜濾過，即得。

(3)陰性樣品溶液 取陰性樣品(20180002，不含當歸)，按“3.2(2)”項下制備方法制備，作為陰性樣品溶液。

3.3 方法學考察

(1)系統適用性試驗 按“3.1”項下色譜條件取樣，記錄對照品、當歸保健藥酒供試品、陰性樣品色譜圖。對照品和供試品溶液中各化合物色譜峰均達到基線分離，與相鄰色譜峰的分離度＞1.5，且陰性樣品無干擾(見圖2)。

(2)線性關系 分別精密吸取10μL不同濃度阿魏酸對照品溶液(0.82、1.64、3.28、6.56、13.12μg/mL)，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以質量濃度(μg/mL)為橫坐標，峰面積(m Au)為縱坐標，繪制阿魏酸標準曲線，得線性方程Y＝48.45X－0.439(r＝0.9999)。結果表明0.82～13.12μg/mL濃度范圍內，阿魏酸呈良好線性關系，適用于當歸保健藥酒中阿魏酸含量測定。

(3)精密度 取3.28μg/mL的阿魏酸對照品溶液，連續測定6次，記錄峰面積，平均峰面積為161.12，RSD(n＝6)為0.38%，表明儀器精密度良好。

(4)重復性 取當歸保健藥酒(20150102)50 mL，分別制備6份當歸保健藥酒供試品溶液，進樣測定峰面積。外標法計算獲得指標性成分阿魏酸的平均含量為0.5454 mg/L，RSD(n＝6)為0.73%，重復性良好。

(5)穩定性 取當歸保健藥酒(20150102)供試品溶液，依次在0、2、5、10、16、24 h測定，平均峰面積為133.79，RSD(n＝6)為1.39%。結果表明在室溫條件下，當歸保健藥酒供試品溶液保存24 h，對阿魏酸含量測定無顯著影響。

(6)加標回收 分別取已知含量的當歸保健藥酒樣品6份(平均含量0.545 4 mg/L)，每份25 mL，精密加入對照品溶液(濃度為0.013 12 mg/mL)1 mL，按“3.2(2)”項下制備方法制備，即得。按“3.1”色譜條件測定，記錄色譜圖，計算阿魏酸回收率。結果表明平均回收率為99.50%，RSD(n＝6)為1.07%。見表1。

表1 當歸保健藥酒樣品阿魏酸回收率試驗結果

3.4 樣品檢測 取3批當歸保健藥酒供試品溶液，每次取3份，按外標法依次測定并計算阿魏酸含量。見表2。

表2 當歸保健藥酒阿魏酸含量測定結果(mg/L)

4 討論

當歸保健藥酒中含多味中藥，成分較多，筆者前期取當歸保健藥酒100 mL，水浴濃縮至約1 mL，作為當歸保健藥酒供試品溶液，得到TLC斑點多，背景干擾較大，目標色譜斑點模糊。采用肉桂TLC方法成功檢測出相同顏色的肉桂對照藥材主斑點，Rf值適中，陰性樣品無干擾，并按照國家藥典委員會《中藥分析方法驗證指導原則實施細則》的相關要求進行方法學耐用性考察，重現性良好。選擇乙腈-0.085%磷酸水溶液(17∶83)、0.5%冰醋酸水溶液-甲醇等多種流動相[5-8]進行阿魏酸含量測定，確定了適用于本研究的流動相比例，達到了較好的分離效果。本研究建立當歸保健藥酒中肉桂薄層鑒別及指標性成分阿魏酸的含量測定方法，具有簡捷快速、專屬性強、重現性好的優點，可為當歸保健藥酒質量控制提供一定的參考。