ELL2在前列腺癌組織中表達水平分析

徐 珀

深圳市第二人民醫院急診科，廣東 深圳 518000

前列腺癌是男性常見的惡性腫瘤之一，每年全世界有100萬人左右被確診此病［1］。以前我國前列腺癌死亡率和發病率都較低，但是隨著人口老年化，前列腺癌的發病率漸漸呈上升趨勢。治療方案有前列腺切除術等大多數前列腺癌治療方案的療效是顯著的［2-3］，但激素非依賴性前列腺癌的療效不太樂觀［4］。

劉暢等［5］采用免疫組織化學染色法檢測前列腺癌中SKP2、kindlin-2蛋白的表達情況，結果發現前列腺癌組織中SKP2、kindlin-2蛋白的表達率顯著升高，該蛋白的表達與前列腺癌的發生、發展密切相關。周亮等［6］研究miR-372在前列腺癌中的表達及對前列腺癌細胞遷移的影響，結果發現miR-372在前列腺癌組織中表達下調，抑制癌細胞遷移，可作為前列腺癌的抑癌因子。張興華等［7］研究CaMKⅡδ在前列腺癌組織的表達及意義結果發現CaMKⅡδ在人前列腺癌組織中表達過度，該基因的表達表達與淋巴結轉移、前列腺癌的外侵顯著相關。定位于染色體19p13.1的人類ELL（Eleven-nineteen lysine-rich leukemia gene）基因在調節生長發育和腫瘤形成起到重要作用，但是ELL基因與定位于染色體11q23上的白血病基因發生易位［4］，在多種白血病患者中得到了證實。但是，對于ELL基因在前列腺癌中的表達情況，稀有報道。為了了解ELL2在前列腺癌組織中表達水平及其對前列腺癌細胞株C4-2增殖的影響，我們采用qRT-PCR及對ELL基因表達的上調或沉默，旨在揭示分析ELL基因在前列腺癌組織細胞中的表達，以及ELL基因在前列腺癌發生發展的作用。

1 一般資料

1.1 臨床資料

上海芯超前列腺癌芯片HProA150CS01中含有前列腺癌50例：癌100點/癌旁50點。Gleason分級6-10，臨床分期2期～4期。前列腺癌患者均為未接受抗腫瘤治療，且排除其他器官的惡性腫瘤。患者年齡（70.96±6.10）歲。前列腺癌病理分級標準參考Gleason評分系統中相關標準，腫瘤臨床分期參考《中國泌尿外科疾病診斷治療指南》。手術后取得供試的材料標本,液氮中速凍10～15 min后，-70℃保存。經病理學證實所有標本均是前列腺癌。100例患者中Gleason評分評分＜7分者6例，=7分者48例,Gleason評分＞7分者46例；腫瘤臨床分期:Ⅱ期15例，Ⅲ期61例，Ⅳ期18例。

1.2 ELL抗體行免疫組化檢測

經過石蠟切片脫蠟至水，將這些組織制成約3 mm，0.01MKPBS清洗5min×3后，加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液。室溫下孵育10min，以阻斷內源性過氧化物酶的活性，PBS沖洗3次/3 min，采用濃度為10%牛奶蛋白封閉，室溫孵育5 min，加入ELL2蛋白抗體（ELL2抗體購買自Abcam公司），室溫孵育2 h，PBS沖洗3次/5 min，滴加生物素化抗兔二抗，37℃孵育30 min，再用PBS沖洗3次/5min，加入NBT/BCIP色劑顯色，5min后復染，自來水沖洗，藍化，切片經梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固，晾干后觀察。

1.3 統計學方法

數據處理采用SPSS 21.0軟件，計數資料以例數和百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗;P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Gleason評分與ELL2基因蛋白表達情況分析

Gleason評分＜7分的組織中ELL2基因蛋白陽性表達率為83.33%；Gleason評分=7分的組織中中ELL2基因蛋白陽性表達率為75.00%；Gleason評分＞7分的組織中ELL2基因蛋白陽性表達率為13.04%，Gleason評分＞7分的組織中的ELL2基因的陽性表達率顯著小于其它兩種組織，差異有統計學意義（χ2=39.580，P＜0.001）。

表1 Gleason評分與ELL2基因蛋白表達情況

2.2 TNM分期與ELL2基因蛋白表達情況分析

TNM分期為Ⅱ的ELL2基因蛋白陽性表達率為86.67%；TNM分期為Ⅲ中ELL2基因蛋白陽性表達率為73.77%；TNM分期為Ⅳ的組織中ELL2基因蛋白陽性表達率為11.11%，TNM分期為Ⅳ的組織中的ELL2基因的陽性表達率顯著小于其它兩種組織，差異有統計學意義（χ2=27.668，P＜0.001）。

表2 Gleason評分與ELL2基因蛋白表達情況

3 討論

前列腺癌發病率僅次于的肺癌，是男性第二的腫瘤。前列腺癌死亡率在男性腫瘤中排名前列［8］。目前用于前列腺癌的生物標志物為總PSA（tPSA）和游離PSA（fPSA）［9］。

真核細胞轉錄延伸的調控是基因正常表達的重要條件。ELL家族是RNA聚合酶II（RNAPⅡ）轉錄因子,調控RNAPⅡ的功能的關鍵因子［10］。ELL2是ELL蛋白家族中的一員。本研究發現前列腺癌組織中，Gleason評分＞7分的組織中的ELL2基因的陽性表達率顯著小于其它兩種組織且TNM分期為Ⅳ的組織中的ELL2基因的陽性表達率顯著小于其它兩種組織。所以ELL2表達的下調可能是誘發前列腺癌的病因之一；ELL2可否作前列腺癌腫瘤標志物，評估惡性程度、提高早期診斷率，有待于進一步研究。楊鐵軍［11］報道前列腺癌的惡性程度越高，其組織ELL2表達水平越低。他推測ELL2基因可能是前列腺癌的抑癌基因，且ELL2可以作為反映前列腺癌惡性程度指標。

Zhou J等［12］報道ELL直接調控血小板反應蛋白1水平的高低，抑制血管生成；前列腺癌中ELL基因抑制腫瘤生長與；也有報道ELL2與EAF2結合，成為超級延伸復合體（SEC）的一部分。ELL2是ELL蛋白家族中的一員，該家族調控轉錄的功能類似。通過調節基因的表達，抑制細胞凋亡進程。本研也究探討ELL2對前列腺癌細胞凋亡與增殖的影響，發現ELL2基因的表達加速前列腺癌細胞C4-2凋亡，抑制前列腺癌細胞C4-2增殖。