藍漿果葉片再生不定芽的伸長研究

（合肥植物園，安徽合肥 230031）

藍漿果為杜鵑花科越桔屬植物，具有較高的營養價值和保健功能，我國南北均有種植[1-3].組培是藍漿果進行快速繁殖和培育優選系的有效方法[4]，不定芽伸長生長是葉片再生中一個非常關鍵的步驟，剛形成的芽很小，如不能實現芽的伸長生長，小芽極易干枯死亡[5].芽能否很好的伸長生長直接決定無根試管苗的生根狀況.本試驗在芽增殖的基礎上，為了進一步促進經切割后叢生芽的生長與伸長，分析了激素、培養基、光強、不定芽芽齡以及基因型對不定芽伸長的影響，探索最適伸長條件，為藍漿果組織培養進一步發展提供依據.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料

供試材料由葉片誘導生長30 d（不定芽芽齡影響試驗除外）的南方高叢藍漿果品種“南月”優選系A18 等的不定芽.其中基因型對不定芽影響的研究中所用材料為兔眼藍漿果品種“園藍”、“梯芙藍”、“燦爛”、“精華”、“巴爾德溫”、“藍美人”與南方高叢藍漿果品種“南月”優選系A17、A167、A119 葉片 培養伸長不定芽；激素、培養基、光強、不定芽芽齡對不定芽伸長影響研究均采用南方高叢藍漿果品種“南月”優選系A18 的不定芽為材料.

1.1.2 培養基

基本培養基為WPM（不同培養基處理除外），在培養基中加入蔗糖25 g·L-1、瓊脂7.5 g·L-1、ZT 0.5 mg·L-1(不同激素處理除外)，pH值調至5.3.配制好的培養基經常規滅菌后備用.

1.2 方法

取大小約0.5 cm2的不定芽芽塊36 塊，接種于培養基上，每個處理塊于溫度（25±2）℃、光照度1800～2000 lx、光照時間16 h·d-1的條件下培養.每天觀察并記錄不定芽生長情況，40 d 天后統計伸長芽塊數、伸長枝條數、平均苗高及對枝條進行形態描述.

1.2.1 激素對藍漿果再生不定芽伸長的影響

選取激素如下：ZT（0.2、0.4、0.8 mg·L-1）；2ip(0.5、1、2 mg·L-1)；NAA (1 mg·L-1)、2ip+NAA(1+0.1 mg·L-1)；ZT+NAA(0.4+0.1 mg·L-1)；對照（不添加任何激素）.

1.2.2 基本培養基對藍漿果再生不定芽伸長的影響

試驗培養基分別為WPM、MWPM、MS、1/2MS.

1.2.3 光照強度對藍漿果再生不定芽伸長的影響

光照強度處理分別設置為全暗（0）、弱光（0～500 lx）、中光（1000～1500 lx）、強光（2000～2500 lx）.

1.2.4 不定芽芽齡對藍漿果再生不定芽伸長的影響

不定芽芽齡分別為30 d、60 d、90 d.

1.2.5 不同品種（系）藍漿果再生不定芽伸長的比較

取兔眼藍漿果品種“園藍”、“梯芙藍”、“燦爛”、“精華”、“巴爾德溫”、“藍美人”；南方高叢藍漿果品種“南月”優選系A17、A167、A119 葉片培養伸長不定芽為材料.

2 結果與分析

2.1 激素對藍漿果再生不定芽伸長的影響

植物激素是培養基中的關鍵性物質，在葉片再生體系建立的研究中，調節細胞分裂素和生長素的種類與比例是激素使用的關鍵.目前，藍漿果葉片再生研究中常使用的細胞分裂素類物質有2ip、ZT、ZR（反玉米素）、ZT 核苷(ZTR)、TDZ、CPPU、6-BA 等，但不同的種和品種對以上各激素的反應相差很大[6-7].從表1可知，不同激素對不定芽伸長的影響不同.其中，低濃度的ZT、2ip 及ZT、NAA 配比對不定芽伸長效果較好，其中不定芽伸長率及伸長枝條數最高的激素處理為質量濃度為0.8 mg·L-1的ZT，不定芽伸長率及伸長枝條數最低為2ip（1 mg·L-1）和NAA（0.1 mg·L-1）配比（見圖1-5）.伸長枝條苗高及質量以質量濃度為0.5～1 mg·L-12ip 及0.2～0.8 mg·L-1ZT 的效果較好，而誘導質量較差的激素濃度為2ip（1 mg·L-1）和NAA（0.1 mg·L-1）組合.結果表明，對不定芽伸長誘導效果最好的激素處理為0.8mg·L-1的ZT.

表1 激素對藍漿果再生不定芽伸長的影響

表2 培養基對藍漿果再生不定芽伸長的影響

2.2 培養基對藍漿果再生不定芽伸長的影響

從表2 可知，培養基對不定芽伸長有一定影響.其中，伸長率最高的培養基為WPM，達41.67%，伸長枝條數為16；伸長率最低的培養基為1/2MS，低至0（見圖1 之8）.平均苗高以MWPM 及MS 誘導效果好.可見，對不定芽伸長效果最好的培養基為WPM.

2.3 光照強度對藍漿果再生不定芽伸長的影響

由表3 可知，在強光和中等光下，不定芽能伸長，強光下伸長率稍高，達16.67%，伸長枝條數6，但平均苗高較低，為0.48 cm，但枝條長勢較好；中等光下，伸長率稍低，為5.56%，伸長枝條數2，平均苗高較高，為1.25 cm，枝條長勢較差（見圖1 之7）.可見，光照強度對不定芽伸長有影響，強光較利于不定芽伸長，弱光及全暗情況下不定芽不伸長.

表3 光照強度對藍漿果再生不定芽伸長的影響

2.4 不定芽芽齡對藍漿果再生不定芽伸長的影響

由表4（見下頁）可知，培養60 d 的不定芽伸長率較高，伸長枝條數較多，平均苗高中等；培養90 d 的不定芽與培養30 d 的不定芽伸長率相差不大，但伸長枝條質量以培養30 d 效果較好（見圖1 之6）.綜合而言，不定芽芽齡對不定芽伸長效果有影響，培養60 d 不定芽較易伸長.

圖1 藍漿果葉片再生不定芽伸長情況

表4 不定芽芽齡對藍漿果再生不定芽伸長的影響

2.5 不同品種（系）藍漿果再生不定芽伸長的比較

由表5 可知，兔眼藍漿果“園藍”、“梯芙藍”、“巴爾德溫”及南方高叢藍漿果品種“南月”優選系A167、A119 較易伸長，伸長率較高，伸長枝條數較多；而平均苗高及伸長枝條質量以南方高叢藍漿果品種“南月”優選系A167、A119 較好；伸長能力最差的為兔眼藍漿果“藍美人”及南方高叢藍漿果品種“南月”優選系A17，伸長率低至2.78%；其他品種不定芽伸長能力居中（見圖1 之9）.可見，基因型不同，不定芽伸長能力不同，南方高叢藍漿果品種“南月”優選系A167、A119 不定芽較易伸長.

表5 不同品種（系）藍漿果再生不定芽伸長的

3 結論與討論

在增殖培養基上不定芽無法形成正常的再生植株，因此，需將不定芽接種到低濃度的培養基上進行伸長.適宜濃度的細胞分裂素類物質(6-BA、ZT、KT 等)對不定芽的分化、增殖等是必需的，太高濃度的細胞分裂素易造成不定芽不易伸長及形成畸形芽，而適當濃度的生長素類物質(NAA、2，4-D、IAA 等)則對伸長具有一定的促進作用.羅素蘭等[8]認為，不定芽伸長難的主要原因是由于其內源生長素水平較低，營養成分較缺乏，如離體培養時無外源生長素和適當的有機物營養成分的補充就會出現叢芽等問題，以致成苗率較低.楊國順[9]認為不定芽伸長率低的原因不是不定芽難以伸長，而是能否分化出完全不定芽而非葉狀體.劉娟旭[10]等認為不定芽分化不完全可能與植物生長調節劑或營養成分有關，過多或過少均不利于完全不定芽的形成.在本試驗中發現將不定芽轉至不添加生長素，添加低濃度的ZT、2ip 或添加低濃度的ZT 與NAA 配比的培養基中，不定芽較易伸長，這說明不定芽伸長難的原因是內源生長素水平較低，營養成分較缺乏.

培養基的選擇在組培工作中具有很關鍵的地位，Joshi 等[11]報道含硫酸銅的培養基能極其顯著地提高不定芽的伸長率，多數研究者認為子葉作為外植體其再生能力最強，分化后期需轉入伸長培養基才利于其伸長；Khan 等[12]用苗齡一個月的莖尖和莖段也能誘導體細胞胚，或直接分化出芽，進而長成小苗，而且自始自終只用一種培養基.在本試驗中研究發現WPM 培養基較適宜藍漿果不定芽伸長培養.

將不定芽切取后轉接至相應濃度的培養基上，繼續進行增殖培養，如果轉接過遲或不轉接，愈傷組織會將培養基中的水分和營養耗盡，不定芽生長受到抑制甚至死亡，適宜的轉接時間需把握好.在本研究中發現不定芽生長60 d 時為最佳轉接時間.

基因型是影響不定芽伸長的主要原因之一，這可能是因為不同品種內源激素含量不同，選擇再生能力強的品種（系）是建立高效再生體系的關鍵.劉娟旭[10]認為不定芽分化率高的品種不一定伸長率高，但不定芽分化率低的品種，芽伸長率都較低.本研究發現不同品種（系）不定芽伸長能力不同，其中以南方高叢藍漿果品種“南月”優選系A167、A119 較易得到伸長.

關于光照強度對不定芽伸長影響的研究未曾見報道.本研究發現在一定范圍內適當提高光照強度較利于不定芽伸長，這可能是因為光環境是影響組培苗光合作用和生長的內在因素，而光照弱是有糖組培苗光合機構功能失常的原因之一，適度提高光照可使組培苗結構發育更好地趨向于光合自養.