復方增免散的處方篩選和臨床療效觀察

米同國,趙 達,魏淑玲

(1.河北工程大學生命科學與食品工程學院,河北邯鄲056000 ；2.石家莊市藁城區畜牧工作總站,河北石家莊052160 ；3.河北省農業廣播電視學校石家莊市鹿泉區分校,河北石家莊050200)

目前，在養禽生產中普遍存在著疫苗接種預防效果不佳，以及用藥量逐漸加大未能達到理想的治療效果。近年來，免疫增強劑的研究越來越引起人們的關注，尤其是中藥免疫增強劑具有純天然、低毒副的特點，日益受到大量學者的重視[1-2]。因此，根據傳統中獸醫理論和現代免疫理論，結合現代科學技術，篩選出復方增免散的最佳處方，并觀察其對臨床常見免疫抑制疾病-雞傳染性法氏囊病的療效，為今后雞傳染性法氏囊病的臨床用藥提供依據和參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 1日齡艾維因肉仔雞120只，由江山種禽(平山)有限公司提供。平山縣養雞戶孟某飼養的30日齡海蘭褐蛋雞，經診斷為雞傳染性法氏囊病。

1.2 試驗藥品 紫錐菊、黃芪、當歸、石菖蒲、紅景天、黨參、淫羊藿、枸杞子、甘草等10 余種中藥材，購自安國市中藥材市場，經鑒定均為符合藥典規范的道地中藥材。法氏囊卵黃抗體，購自河南艾美特生物制藥有限公司(批號為20160922，250 mL/瓶)；法氏囊瓊擴標準抗原(批號為201605)、法氏囊瓊擴標準陽性血清(批號為201511)、法氏囊標準陰性血清(批號為201502)，均購自中國獸醫藥品監察所。

1.3 中藥組方與制備 以扶正固本，補中益氣，提高機體免疫力為原則，3個組方如下：

處方1：紫錐菊50 g、黃芪40 g、當歸30 g、石菖蒲20 g、甘草10 g

處方2：紫錐菊50 g、黃芪40 g、紅景天20 g、黨參20 g、甘草10 g

處方3：紫錐菊50 g、黃芪40 g、淫羊藿20 g、枸杞子15 g、甘草10 g

將藥物洗凈，干燥，粉碎成粗粉過篩，混勻即得。

1.4 試驗用日糧及飼養管理 試驗雞用基礎日糧組成及營養水平，見表1。試驗前進行雞新城疫弱毒疫苗免疫，自由采食和飲水，其余管理按常規進行。

表1 基礎日糧配方及營養水平

1.5 試驗分組與給藥方法 將120只1日齡艾維因肉仔雞隨機分為4組， 雌雄各半，每組30只。試驗組雞分別按日糧的1%添加復方中藥組方，對照組不給藥。

1.6 檢測項目和方法

1.6.1 血樣采集 各組雞，于雞新城疫免疫后第0、7、14、21、28、35、42天頸靜脈無菌采血，分離血清，低溫冰箱保存，用于雞新城疫抗體效價的測定。

1.6.2 雞新城疫抗體效價檢測 對分離的血清，用血凝(HA)和血凝抑制試驗(HI)進行抗體檢測。計算每組血清抗體效價的平均值。

1.6.3 T細胞測定 試驗30 d時，各組選出6只雞，靜脈采血涂片，酯酶染色法測定T淋巴細胞總數。

1.6.4 免疫器官指數測定 飼喂30 d，各組捕殺12只，采用器官重量法進行免疫器官(脾臟、法氏囊和胸腺)指數的測定。

1.7 對雞傳染性法氏囊病臨床療效觀察

1.7.1 自然發病病例的確診 平山縣孟某養雞戶30日齡海蘭褐蛋雞，突然發病，病雞不斷啄肛，很快波及全群，發病后2～3 d出現死亡高峰。病雞精神萎頓，采食減少，嗜睡，縮頸垂翅，排出白色黏稠或水樣稀糞，脫水消瘦。剖檢死雞可見腿部和胸部肌肉出血，肌腺胃交界處有條狀出血；法氏囊水腫、出血、壞死；腎臟腫脹，有尿酸鹽沉積；死亡高峰期過后，法氏囊萎縮，囊內有干酪樣物質。取心臟血涂片，肝組織抹片，鏡檢未見細菌；取病雞心臟血，肝臟、腎臟滲出液接種營養肉湯和鮮血瓊脂平板，未見細菌生長；取病雞法氏囊研磨離心，取上清液，與標準陽性血清進行瓊脂擴散試驗，結果呈強陽性。進行動物感染試驗，動物接種2 d后發病，剖檢有典型法氏囊病變。確診為雞傳染性法氏囊病。

1.7.2 試驗分組及處理 根據1.6的試驗方法，從3個處方中選取效果最好的中藥復方，將其命名為復方增免散。從平山縣養雞戶孟某雞場取出病雞1 200只，平均分為3 組，每組400 只，分為增免散治療組、卵黃抗體治療組、感染對照組。治療試驗雞群在發病后第2天開始給藥，連用5 d，觀察各組雞采食和精神狀態，記錄死亡情況。3組雞飼養管理環境、條件、方式相同。試驗分組及處理方法見表2。

2 結果

2.1 雞新城疫抗體效價測定 各組雞不同周齡的HI抗體效價加權平均值(Log2X)，結果見表3。表3結果表明，處方1、2、3組與對照組相比，新城疫抗體效價均有提高，尤其處方1組與空白對照組相比，HI抗體效價明顯升高(P<0.05)，這種差異顯著性從第14天開始持續到第42天。

表2 試驗分組及處理方式

2.2 外周血T淋巴細胞測定 結果見表4。T淋巴細胞測定結果顯示，處方1、2、3組陽性率分別為48.67%、45.33%、44.67%，均高于對照組39.33%，但以處方1組效果明顯，差異顯著(P<0.05)。

2.3 免疫器官指數測定 結果見表5。表5結果表明，免疫器官指數試驗組均高于對照組。處方1、3組脾臟、法氏囊指數明顯高于對照組(P<0.05)；處方1、2組胸腺指數顯著高于對照組(P<0.05)。

表3 各中藥復方對雞新城疫抗體效價的影響 (Log2X)

表4 各中藥復方對雞T淋巴細胞數的影響

表5 各中藥復方對雞免疫器官指數的影響

2.4 復方增免散對雞傳染性法氏囊病的治療結果 根據上述試驗結果，將處方1命名為復方增免散。在給藥當天及前2天，3組試驗雞均陸續出現死亡，從第3天開始增免散治療組與卵黃抗體治療組每天的死亡雞數減少，病雞多數精神狀態有所恢復，喜動，不過糞便仍為稀便，羽毛稍松亂。第4～5天就控制了病情，全群癥狀明顯緩解，基本停止死亡，10 d后絕大多數病雞痊愈。

增免散治療組與卵黃抗體治療組的功效相似，對傳染性法氏囊病都有很好的治療效果，治愈率分別為81%和83%；與感染未治療組相比，差異極顯著(P<0.01)，結果見表6。

3 討論

中藥免疫增強劑作為疫苗佐劑，能夠提高疫苗的效價和保護力[2]，本試驗中復方增免散亦有此功效，它能明顯提高雞新城疫的抗體效價，延長其在體內的存留時間，提高雞群保護率。對雞免疫器官指數的測定結果表明，復方增免散可顯著提高雛雞免疫器官的發育。外周血T淋巴細胞數也明顯增加。說明復方增免散能夠增強畜禽機體的特異性和非特異性免疫功能。

表6 復方增免散雞傳染性法氏囊病治療試驗結果

雞傳染性法氏囊病是一種免疫抑制性、高度接觸性傳染病[3-4]。治療預防本病應多注意提高雞體抵抗力，增加免疫力[5]。試驗證明，復方增免散的臨床治療試驗的效果略低于卵黃抗體治療組，其原因是卵黃抗體屬于特異性治療，注入機體后能快速中和體內病毒，從而有較高的治愈率，而中藥治療不屬于特異性治療，而是通過調節機體的免疫功能，提高免疫力來達到治療目的。但是卵黃抗體在實際應用中造價高，容易引起細菌污染，引起蛋源性疾病傳播[6]。

從上述試驗結果可以看出，復方增免散對雞傳染性法氏囊病有較好的治療效果，治愈率高達81%。并且該組方使用方便，藥源廣泛，價格低廉，殘留低，毒副作用小，具有進一步推廣應用的價值。