雞沙門氏菌病病原菌的分離鑒定

張麗嬌

山東省蓬萊市小門家畜牧獸醫站，山東蓬萊265600

沙門氏菌是一類腸道桿菌，其中一部分可以導致人和動物感染，統稱為沙門氏菌病。據最近研究，沙門氏菌有2 個種，分為42 個群，血清型有2 500多種，我國已經報道的血清型有240 種以上[1]。它是寄生于人和動物腸道內的無芽孢桿菌，是一大屬血清學相關的革蘭氏陰性菌[2]。沙門氏菌病的發病率高，死亡率高，臨床上最常見的是雞白痢和雞副傷寒。

1 材料與方法

1.1 材 料

1）材料。煙臺市某肉雞養殖場病死雞的肝臟和腎臟。

2）試驗藥劑。SS 營養瓊脂培養基，HE 營養瓊脂培養基，伊紅美藍營養瓊脂培養基，麥康凱培養基，三糖鐵瓊脂，TSB 營養液，葡萄糖、果糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖等生化發酵管；壯觀霉素，甲砜霉素，頭孢噻呋，卡那霉素，慶大霉素，新霉素，恩諾沙星，環丙沙星，氟哌酸，鏈霉素和阿米卡星藥敏試紙。

3）試驗動物。來自煙臺市某肉雞養殖場的雛雞。

1.2 方 法

1）臨床檢查。首先要了解本次流行的情況，包括最初發病的時間、地點、隨后蔓延的情況；再觀察整個雞群的狀況，包括精神狀態、飲食、飲水、糞便以及發病前有無飼養管理、飼料用藥、氣候等變化或其他應激因素存在。

2）病理剖檢。先觀察尸體的外觀變化，包括被毛及皮膚變化、表面有無尸僵出現；天然孔有無分泌物、排泄物和出血及其性質；體表有無腫脹或異常；再者檢查內臟，主要包括心臟、肝臟、腎臟、肺臟、脾臟等，看其表面有無炎癥、水腫、出血、變性、壞死、萎縮等異常病變。

3）病料采集。采自該養殖場7日齡的病死雞，經過解剖所得到的充血腫大的肝臟和腎臟。

4）細菌的分離與培養。取病死雞的腎臟或肝臟，在無菌操作下分別將病料接種于麥康凱營養瓊脂平板、SS 營養瓊脂平板、伊紅美藍營養瓊脂平板上，37 ℃恒溫培養24 h。然后找灰白色疑似沙門氏菌的菌落進行單菌落抹片，再染色進行鏡檢。

5）染色與形態觀察。用接種環蘸取生理鹽水與玻璃片上的病料相混合，并均勻涂片，自然干燥后用火焰固定；在片上滴加草氨酸結晶紫染色液，作用1～3 min，水洗；加染液進行媒染，作用1 min，水洗；加95%的酒精15～30 s 進行脫色，水洗；加復宏復染液染1 min 水洗，自然干燥后鏡檢，觀察細菌形態與顏色。

6）生化試驗。用接種針挑起純培養物，接種于各種生化發酵管中，37 ℃培養24 h。

7）藥敏試驗。選取SS 營養瓊脂上的菌落做藥敏試驗，用無菌小鑷子夾取各種藥敏片平貼于瓊脂表面，每一直徑90 mm 的平板可貼7 片紙片，每張紙片的間距≥25 mm，每張紙片距離平板的邊緣≥15 mm。然后把整個平板反過來于37 ℃培養18 h。時間到后取出平板，仔細觀察在藥敏片周圍有無抑菌圈形成，然后用游標卡尺度量其直徑的大小，按抑菌圈直徑的大小作為供試菌株敏感度指標報告敏感、中度敏感、高度敏感和耐藥的結果。

8）致病性試驗。在雞群中隨機抽取30 只健康雛雞，設6 個小組，每組5 只，包括5 個菌株試驗小組和1 個對照小組，將純培養的5 個菌株接種于TSB 溶液中進行增值培養，24 h 后取出菌液分別腹腔注射5 個小組的雛雞，每只0.4 mL，設第6 小組注射營養肉湯做對照，隨時觀察其發病及死亡情況。對發病致死的雛雞進行解剖，觀察其病理學變化，并取內容物接種于SS 營養瓊脂、伊紅美藍瓊脂培養基，觀察其菌落的形態和顏色。

2 結果與分析

2.1 臨床檢查

在該養殖場內大部分雞群精神沉郁，扎堆不動，而且病雞“糊肛”現象比較嚴重，其中死亡雞已經接近40 只，根據這些臨床癥狀可以初步判斷病死雞感染沙門氏菌病。

2.2 病理解剖

隨機抽取5 只病死雞進行解剖，發現肝臟、腎臟腫大都比較嚴重，肺臟的表面還伴有彌漫性充血和出血，把解剖的結果與以上所觀察的臨床結果相結合可以確診為病死雞感染了沙門氏菌病。為了進一步確診，采集其病變的肝臟、腎臟送往實驗室進行檢驗。

2.3 分離培養

將菌株接種于各個培養基中結果有很大區別，有5 株疑似沙門氏菌的菌株。在伊紅美藍瓊脂平板上呈表面光滑、圓形、微凸、邊緣整齊、淡藍色、直徑在1～2 mm 的小菌落；在SS 瓊脂平板上，呈現白色菌落；在麥康凱瓊脂平板上呈現圓形、微凸、邊緣整齊、直徑1～2 mm 的小菌落；在HE 瓊脂平板上呈圓形、微凸、邊緣整齊、灰褐色或灰綠色、直徑1～2 mm的小菌落。

2.4 生化試驗

由表1可知：疑似沙門氏菌的5 個菌株能發酵葡萄糖、麥芽糖和甘露醇產酸產氣；對乳糖和蔗糖不反應；尿酸酶試驗為陰性；在三糖鐵培養基中生長，斜面紅色，底層黃黑色。

2.5 染色及鏡檢

選取單個菌落進行革蘭氏涂片、染色、鏡檢，發現沙門氏菌為數量多、個頭短小的革蘭氏陰性桿菌，無芽孢，無莢膜，無運動能力。

2.6 藥敏試驗

由表2可知：沙門氏菌對不同藥物出現不同的敏感度。抑菌圈直徑在20 mm 以上的為高度敏感，10～20 mm 為中度敏感，10 mm 以下為低敏。5 個菌株對頭孢噻呋、甲砜霉素、壯觀霉素高敏；對卡那霉素、慶大霉素中敏；對恩諾沙星、環丙沙星不敏感或低敏。

3 討 論

1）科學的飼養管理。保證雞群健康成長的前提是有一個良好的生存環境，雞群生長的環境對雞群的健康狀況和生產性能有著重要的影響[3-4]。特別是雛雞的管理飼養，不能過分擁擠，而且飼料要搭配得當，定時添加微量元素和維生素。如果發現雞群異常，要立即將病雞隔離，已經治愈的雞仔也要持續隔離一段時間，以防止病原的繼續傳播。

表1 生化試驗結果

表2 藥敏試驗結果 mm

2）嚴格的消毒工作。健全場內的消毒制度，特別是雛雞場、育雛室在進雛前必須經徹底清掃、刷洗和消毒。設備、器具上的殘留物清除后再用3%火堿水、0.2%過氧乙酸或抗菌威等輪換消毒，最后每立方米用28 mL 福爾馬林熏蒸24 h，通風排凈氣味后才可進雛；10日齡以后的雛雞，每周用0.1%次氯酸鈉或0.1%過氯乙酸帶雞消毒1 次，育雛室每天清掃1 次，清掃后用0.3%過氧乙酸消毒；要實施全進全出的飼養制度。

3）合理的免疫程序。制定合理的免疫程序，飼養雞群時要嚴格按照免疫程序來接種，飼養員應根據每一批雞群飼養的結果及時做出總結，以對現有的程序進行適當的修改。

4 結 論

此次在煙臺市某肉雞養殖場所發生的疫病，通過細菌的分離培養、生化試驗、血清學試驗、藥敏試驗及致病性試驗可以基本確定為雞白痢沙門氏菌病。藥敏試驗結果表明，雞白痢沙門氏菌對頭孢噻呋和甲砜霉素高度敏感，所以在藥物治療時要首選頭孢噻呋和甲砜霉素。

通過藥敏試驗了解了此次沙門氏菌對恩諾沙星和環丙沙星保持著一定的耐藥性，耐藥性的產生主要是由于飼料中的抗生素含量過高和臨床上長期盲目用藥造成[3]。因此，在雞白痢沙門氏菌的診斷治療中，要把頭孢噻呋和甲砜霉素作為首選藥物。在治療雞細菌病、腹瀉病的同時，要輪換用藥，以減少由于耐藥性所產生的經濟損失。