臍紅獼猴桃組培快繁技術研究

成思瓊，梁彬，顏盟，韓秀清

(1.楊凌新世界組培有限公司，陜西楊凌 712100；2.陜西省果業研究發展中心；3.陜西新世界果業集團有限公司)

中華獼猴桃原產中國。中華獼猴桃系中的臍紅獼猴桃是紅陽獼猴桃的芽變優系，具有品質優、結果早、豐產等特點[1]。果肉黃綠色，果心周圍有放射狀紅色圖案，風味甜，具香氣，可溶性固形物含量19.9%，總糖含量12.56%，可滴定酸含量1.14%，每100g鮮果維生素C含量97.2mg[2]。2014年3月通過陜西省果樹品種審定委員會審定。

獼猴桃為雌雄異株植物，常規育苗方法是將獼猴桃實生苗嫁接優良品種或枝條扦插繁殖[3]。隨著繁殖技術的發展，組織培養無性繁殖周期短、效率高，已成為快速繁育獼猴桃苗的重要方式[4,5]。桂耀林最先進行了獼猴桃組織培養的相關研究，對獼猴桃不同組織器官例如莖段、葉片、根段、頂芽、腋芽、花藥、花粉、胚、胚乳等進行了離體培養，并開展了與植物組織培養技術等方面相關的基礎理論及應用研究[6]。

獼猴桃組織培養常用的外植體材料有葉片、莖尖、莖段等。葉片和莖段培養比較困難，愈傷組織培養次數過多會慢慢失去再生能力，而莖尖培養容易褐化[7]。筆者采用臍紅獼猴桃帶腋芽的莖段為外植體，分別研究了初代培養(即直接從植株取下細胞、組織和器官后立即進行培養，目的是建立良好的外植體)不同激素濃度及配比對外植體誘導的影響；繼代培養(對試管苗進行擴繁增殖，要在保證不影響正常生長的前提下達到較高的增殖系數)不同激素濃度及配比對試管苗分化的影響；生根培養，試驗不同激素濃度及配比對試管苗生根的影響，為臍紅獼猴桃苗工廠化生產提供技術指導。

1 材料與方法

1.1 試材

以臍紅獼猴桃健壯帶腋芽莖段為試驗材料，5月于楊凌新世界組培有限公司種質資源圃采集新梢，留葉柄摘除成齡葉片,剪成長3～5cm帶腋芽枝段待用。

生長調節劑為玉米素(ZT)、6-芐基腺嘌呤(6-BA)、吲哚丁酸(IBA)、吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)等。基礎培養基MS，122℃條件下滅菌20分鐘，培養室內溫度24±2℃，光照強度1500～2000Lx，光照時間每天16小時。

1.2 試驗方法

1.2.1 激素濃度和配比對初代培養的影響 外植體消毒，將剪成3～5cm長的獼猴桃新梢莖段用自來水沖洗30～60 分鐘，置于無菌超凈工作臺上。用75%酒精消毒30秒，無菌水沖洗2次，每次10～15秒。0.1%HgCl2處理8分鐘，無菌水沖洗5～6次。將莖段剪成1.5cm左右的帶腋芽(僅留葉柄)小段，接種在初代培養基上：基礎培養基MS+蔗糖30g/L+瓊脂6.5g/L，pH值5.8，添加不同的激素。激素添加設置18個處理組合，分別為6-BA(1.0、2.0、3.0mg/L)+NAA(0.05、0.1、0.2mg/L)，以及ZT(0.5、1.0、1.5mg/L)+NAA(0.05、0.1、0.2mg/L)，每個處理組合接種6瓶，每瓶5個外植體，即每個處理組合接種30個外植體，重復3次。置于培養室內培養，25天后統計外植體的誘導成活率。

1.2.2 激素濃度和配比對繼代培養的影響 將初代培養獲得的無菌外植體接種到繼代培養基上進行增殖培養(圖1)：基礎培養基MS+蔗糖40g/L+瓊脂6.5g/L，pH值5.8，激素添加量設置16個處理組合，分別為6-BA(2.0、3.0、3.5、4.0mg/L)+NAA(0.1、0.2、0.3、0.4mg/L)。每個處理組合接種6瓶，每瓶放置5個外植體，即每個處理接種30個外植體，重復3次，40天后調查外植體不定芽的生長狀況，統計增殖系數和平均莖干高度。

1.2.3 激素濃度和配比對生根培養的影響 繼代試管苗選擇高度1.5～2.0cm的健壯植株，接種于生根培養基上(圖2)：基礎培養基1/2MS+蔗糖25g/L+瓊脂6.5g/L，pH值5.8，激素添加量設置12個處理組合，分別為IBA(0.5、0.6、0.7mg/L)+IAA(0.5、1.0、2.0、3.0mg/L)，每個處理組合接種6瓶，每瓶放置5株苗，即每個處理接種30個繼代苗，重復3次，20天后統計試管苗的生根率和生根條數。

圖2生根苗

1.2.4 馴化煉苗并移栽 試管苗根長1cm左右，有5～6條側根時，將瓶苗置于溫室馴化煉苗，分閉口煉苗和開口煉苗兩個階段，開口煉苗3天后，當試管苗莖干顏色由嫩綠變青綠時開始移栽，將試管苗根系的培養基小心洗凈，移栽于穴盤中，穴盤下層2/3基質、上層1/3蛭石。

2 結果與分析

2.1 激素濃度和配比誘導外植體不定芽效果

不同激素處理組合對獼猴桃組培外植體不定芽的誘導效果不同(圖3)。當6-BA濃度和ZT濃度一定時，NAA在0.05～0.2mg/L濃度范圍內隨濃度升高，不定芽誘導成活率也升高；當NAA濃度一定時，不定芽誘導成活率隨6-BA(1.0～3.0mg/L)濃度增加而升高，隨ZT(0.5～1.5mg/L)濃度增加呈先升高后降低趨勢。當NAA濃度為0.2mg/L，6-BA 3.0mg/L和ZT 1.0mg/L時，不定芽誘導成活率最高，分別為81.2%和83.3%。綜合比較，最佳初代培養基為MS+ZT 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L。

2.2 激素濃度和配比對外植體繼代培養增殖率及莖干高度的影響

不同的激素組合處理對獼猴桃組培外植體芽的分化有影響(圖4)。將初代培養的外植體用不同濃度的6-BA和NAA處理，當6-BA濃度一定時，外植體增殖率和莖干高度隨NAA濃度(0.1～0.4mg/L)的增加而先升高后降低，NAA濃度為0.2mg/L時，兩項指標最佳；NAA濃度一定時，增殖系數和莖干高度隨6-BA(2.0～4.0mg/L)濃度的增加也呈先升高后降低趨勢，6-BA最佳濃度為3.5mg/L。因此，臍紅獼猴桃最佳的繼代培養基為MS+6-BA 3.5mg/L+NAA 0.2 mg/L，增殖系數和莖干高度分別為4.54和2.48cm。

2.3 激素濃度和配比對外植體生根率及生根條數的影響

由圖5可知，在含有不同激素的培養基上，臍紅獼猴桃生根效果不同。當IBA濃度一定時，生根率和生根條數隨IAA(0.5～3.0mg/L)濃度增加而增加，當IAA濃度一定時，生根率和生根條數在IBA濃度為0.6mg/L時達到最高。因此，臍紅獼猴桃最佳的生根培養基配方為1/2MS+IBA 0.6mg/L+IAA 3.0mg/L，生根率為95.2%，平均生根條數為4.8條。

2.4 試管苗移栽成活率

試管苗移栽是組織培養過程的重要環節，移栽于不同的基質中效果有差別。蛭石的保水性、透氣性好，有利于植株吸收營養和水分；山坯土主要成分是枯枝、葉片等形成的腐殖質，透氣保水性均較好；純沙透水透氣性好而保水性差；珍珠巖保水性強而易于積水。研究發現，當下層2/3基質(商品)、上層1/3蛭石時，試管苗移栽成活率最高，達97.6%。

3 小結與討論

采用臍紅獼猴桃帶腋芽的莖段為外植體進行組培快繁試驗，試管苗在各培養階段采用不同配方的培養基能夠培育高質量的健壯組培苗[6]。張茜等發現，紅陽獼猴桃的初代培養中，用6-BA代替ZT 誘導效果更為明顯，且可大大降低成本[8]。本研究發現，ZT和6-BA作用效果相近，而ZT更優，作為外植體的建立用量也少，MS+ZT 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L被認為是初代培養基的最佳配方。在繼代培養中，細胞分裂素與植物生長素作用是相互協同的。生長素對外植體的分化起到了輔助作用，適宜濃度的6-BA和NAA配合使用可促進芽苗的主莖伸長，否則，對芽苗主莖伸長有抑制作用[9]。MS+6-BA 3.5mg/L+NAA 0.2mg/L被選定為繼代培養基的最佳配方。當激素濃度較低時，生根速度慢，根系虛弱；激素濃度適當升高，生根速度加快，根系較強壯；當激素濃度繼續升高時，根系生長趨于弱化，這與高濃度的植物激素抑制了對不定芽生根的誘導作用有關[10]。1/2MS+IBA 0.6mg/L+IAA 3.0mg/L被選定為臍紅獼猴桃生根培養基的最佳配方。