蛋雞白血病的診斷

劉勃興 張志強 史秋梅/河北科技師范學院 河北省預防獸醫學重點實驗室 071300

1 病料來源

病死澳洲黑雞，由唐山灤南縣某蛋雞養殖場送樣。

2 試驗材料

DL2 000 plus DNA Marker，購自中科瑞泰科技有限公司； 2 ×Taq Master Mix，購自康為世紀生物科技有限公司；檢測用病毒核酸提取試劑盒，購自北京艾德萊生物科技有限公司。PCR擴增引物合成服務均由上海生工生物公司完成。

3 禽白血病病毒（ALV）的PCR檢測

剖檢病死雞，無菌采取病死雞肝臟、脾臟等組織，用組織勻漿機研磨組織，12000 r離心1 min，取上清提取病毒DNA，提取步驟參照試劑盒說明書進行。以提取的DNA為模板進行PCR檢測。ALV通用檢測引物為：ALV-F（5 ＇- CGAGAGTGGCTCGCGAGATGG-3 ＇），ALV-R（5 ＇- ACACTACATTTCCCCCTCCCTAT -3 ＇）。PCR目的條帶大小2400bp。PCR擴增體系（20μL）為：2×Taq Master Mix 10μL，上、下游引物各 1μL，模 板 1μL，ddH2O 7μL。PCR擴增程序為：95℃預變性10min；94℃變性45秒，55℃退火30秒，72℃延伸90秒，共30個循環；72℃延伸10min。PCR反應結束后用1%瓊脂糖凝膠跑膠驗證，用凝膠成像系統進行觀察。

4 結果

4.1 病死雞臨床及剖檢癥狀

發病雞為135日齡左右的澳洲黑雞，產蛋停止。臨床剖檢，發現其脾臟、肝臟明顯腫大，易碎，卵巢糜爛出血。（見圖1）

圖1 病死雞剖檢結果

4.2 ALV的PCR檢測對病死雞肝臟、脾臟進行ALV的PCR檢測，均擴增出約為2400bp條帶，與預期的目的片段大小一致。表明病死雞肝臟、脾臟中均含有ALV（見圖2）。

5 結論

圖2 ALV的PCR檢測

通過對唐山灤南縣某蛋雞養殖場送檢的病死進行臨床剖檢及實驗室診斷，確定該養殖場飼養的蛋雞患有禽白血病，對該地區蛋雞白血病的防控提供參考。

6 診斷與防治

目前，未發現對禽白血病的有效治療方法。國內外控制禽白血病的方法為通過對禽白血病的檢測，淘汰檢測陽性雞。通過早期的檢測淘汰攜帶禽白血病病毒雞可減少該病的垂直傳播和接觸傳播的的概率，減少經濟損失。

禽白血病的診斷方法大致可分為3類，分別是病毒的分離鑒定、血清學檢測方法和分子生物學檢測方法。病毒的分離鑒定通過將血漿、血液、肝臟等器官或泄殖腔分泌物等接種于雞胚或雞胚成纖維細胞，經培養使病毒增殖，再用PCR、補體結合試驗等方法檢測，該類方法試驗周期長，費用較高，不適合大量檢測。血清學檢測方法包括中和試驗（NT）、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、間接免疫熒光試驗（IFA）、瓊脂擴散試驗（AGP）等，血清學檢測具有特異型強、靈敏度高、耗時較短和可大量檢測的優點，但檢測可出現假陽性，檢測試劑費用高。分子生物學檢測方法包括聚合酶鏈式反應（PCR）、實時熒光定量PCR（RT-PCR）、環介導等溫擴增技術（LAMP）。分子生物學檢測技術具有特異性靈敏性高、檢測時間短、試劑價格低等優點，但該類檢測方法對試驗要求較高，技術操作復雜。通過上述三類檢測方法基本可對禽白血病診斷，對檢測出陽性帶毒雞應及時處理，并應定期、多次檢測，了解雞群帶病情況。

禽白血病可在雞群內垂直傳播和水平傳播，在防控凈化時應注意該病的流行病學特征。養殖過程中防止禽白血病在雞群的垂直傳播，做到早診斷早處理，淘汰帶毒種雞、雞蛋、雞雛，凈化雞群；防止雞白血病在雞群的水平傳播，孵育階段對孵育工具定期消毒，育雛時對雞舍定期消毒，防止飼料與飲水污染，合理集中處理糞便，加強飼養管理，提高機體免疫力。

至今還沒有能有效預防治療禽白血病的疫苗和藥物等，因此，一方面應加快禽白血病的診斷試劑的研制，提高檢測的準確性，縮短檢測時間，降低檢測費用等；另一方面，加快禽白血病預防和治療藥物的研究，攻克禽白血病的預防和治療的難關，保障我國家禽養殖業的健康發展。