四種去內(nèi)毒素試劑盒提取質(zhì)粒中內(nèi)毒素水平的比較

楊振蘋 張靜靜 邢體坤 王 斌 宋路萍 荊新蕊 宋彥君 黃 帥 王亞萍 潘若文▲

1.華蘭生物工程股份有限公司研發(fā)中心，河南新鄉(xiāng) 453003；2.華蘭基因工程有限公司質(zhì)量控制部，河南新鄉(xiāng) 453000

近年來，建立在DNA基礎(chǔ)上的基因療法和DNA疫苗已成為一個熱門的研究方向，有望成為解決全球衛(wèi)生問題的最有前景的方法之一。與重組病毒比較，重組質(zhì)粒因具有免疫原性低、安全等特點(diǎn)而占有更大的優(yōu)勢。

質(zhì)粒（plasmid）是獨(dú)立于染色體外的雙鏈閉合環(huán)狀DNA分子，大小范圍為0.8～120kb，具有自主復(fù)制和轉(zhuǎn)錄能力，常以超螺旋狀態(tài)存在，廣泛存在于細(xì)菌、放線菌和真菌中[1]。質(zhì)粒作為基因工程的常用載體，能夠?qū)⒛康幕蛲ㄟ^DNA重組技術(shù)轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞中。

內(nèi)毒素（Endotoxin）最早于十九世紀(jì)由Richard Pfeiffer在研究發(fā)熱物質(zhì)過程中發(fā)現(xiàn)并提出[2]。內(nèi)毒素是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁外膜上的特有結(jié)構(gòu)，其主要化學(xué)成分是脂多糖。脂多糖由核心寡糖、雜多糖鏈、菌株特異性O(shè)抗原和疏水的脂質(zhì)A組成，其中脂質(zhì)A是其主要的活性位點(diǎn)[3]。研究表明，內(nèi)毒素是誘發(fā)炎癥反應(yīng)、胰島素抵抗、肺損傷等的主要致病成分[2，4-5]，對哺乳類動物有顯著的致熱性[6]。內(nèi)毒素的檢測常用家兔熱源法和鱟試劑法[7]，其中，鱟試劑法是目前最常用的方法，已被列入《中華人民共和國藥典》[8]。

由于試驗?zāi)康牟煌|(zhì)粒DNA的質(zhì)量也有不同的要求，尤其是在細(xì)胞轉(zhuǎn)染的過程中，質(zhì)粒中的內(nèi)毒素水平會明顯影響細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，所以對質(zhì)粒的質(zhì)量要求更為苛刻。而面對市售的種類繁多的質(zhì)粒DNA提取試劑盒，正確的選擇會成為試驗成功的關(guān)鍵。……