單硝酸異山梨酯擇時微孔滲透泵片的制備及含量測定

鄒 青 全海燕 李 平

湖南環境生物職業技術學院，湖南衡陽 421000

單硝酸異山梨酯（isosorbide mononitrate） 化學名 1，4：3，6-二脫水-D-山梨醇-5-硝酸酯，為新一代硝酸酯類抗心絞痛用藥，特別適用于冠心病、心絞痛患者的防治，是目前硝酸酯類藥物中較有前途的品種之一[1-3]。最新的研究結果顯示[4]：心腦血管疾病的高死亡率在一定程度上是因為人們沒有意識到疾病背后隱藏的時辰節律性[5]。研究發現，凌晨6 ～ 13點之間心血管疾病的發病率比其他時段高30% ～ 40%[6]。目前單硝酸異山梨酯的制劑主要為口服制劑和透皮吸收制劑，開發研究的重點集中在緩控釋制劑上[7]。單硝酸異山梨酯普通片劑目前在國內外應用較廣，但在實際使用中由于存在著服藥間隔和服藥劑量掌握不嚴格兩個主要問題致使60%以上的患者由于產生耐受性而未得到最佳療效。而單硝酸異山梨酯緩釋片明顯改善了藥物濃度波動大的問題，降低了藥物的耐受性。但該制劑僅改善了普通制劑波動較大的現狀，并沒有考慮到心絞痛疾病的時辰節律性[8]，并不能提供心血管疾病所需要的脈沖釋藥曲線。本研究根據藥物的性質、心絞痛疾病的發病特點及時辰藥理學的指導，擬采用單層滲透泵技術，在片芯外分別包HPMC隔離衣膜和控釋衣膜（含致孔劑，無需打孔）制備一種具有4h時滯的新型單硝酸異山梨酯擇時釋放微孔滲透泵控釋片[9-10]——可防治晨發性心絞痛，并采用高效液相色譜法建立了該制劑的含量測定方法[11]，為該新劑型的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器

LC-10AP高效液相色譜儀（日本島津分析儀器公司）；N-2000雙通道色譜工作站（浙江大學智能信息工程研究所）；SPD-10Avp紫外檢測器（日本島津分析儀器公司）；BS110S型電子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；KQ3200B型超聲清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；BY300A小型包衣鍋（上海黃海藥檢儀器廠）；TDP型單沖壓片機（上海天祥、健臺制藥機械有限公司）；RCZ-8A智能溶出實驗儀（天津大學無線電廠）。

1.2 試藥

單硝酸異山梨酯對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100705-200902）；單硝酸異山梨酯（山東方明藥業有限公司，批號：20120916）；可壓性淀粉（上海卡樂康包衣技術有限公司）；葡萄糖（中國惠興生化試劑有限公司）；Opadry CA（上海卡樂康包衣技術有限公司）；PVPK30（上海卡樂康包衣技術有限公司）；PEG-400（廣東汕頭市西隴化工廠）；HPMC（上海卡樂康包衣技術有限公司）；丙酮（南京化學試劑有限公司）；甲醇（色譜純，南京化學試劑有限公司）；乙醇（分析純，南京化學試劑有限公司）；單硝酸異山梨酯擇時微孔滲透泵片（自制，批號：20191020，20191025，20191031，規格 40mg），其他試劑均為分析純。

1.3 方法[12-13]

1.3.1 片芯的制備 將單硝酸異山梨酯與適量葡萄糖（滲透壓促進劑）、適量可壓性淀粉混勻，以5%PVPK30乙醇溶液為粘合劑制成軟材，用20目篩制粒，40℃恒溫箱充分干燥后，用18目篩整粒，然后加入適量滑石粉，混合均勻后壓片，制成片芯。硬度應控制在60 ～ 80N。

1.3.2 隔離衣包衣液配制 稱取HPMC適量，在攪拌過程中緩慢加入到90%的乙醇溶液中，使分散均勻。

1.3.3 控釋衣包衣液配制 稱取Opadry CA適量，在攪拌過程中加入到90∶10（v/v）的丙酮水溶液中，按比例稱取適量PEG400緩慢溶解到上述丙酮水溶液中，使混合均勻。

1.3.4 包衣工藝 片芯在40～50℃（片床溫度）下包隔離衣，流速5mL/min，至片芯達到預定增重后，40℃下烘干6 ～ 8h，經檢驗合格后在40～50℃（片床溫度）下包控釋衣，流速4mL/min，至控釋衣膜增重達到預定要求后40℃下烘干6～8h。

2 含量測定結果[14]

2.1 色譜條件

色譜柱：Beckman ODS （ 4.6mm×25cm，5μm）；流動相：甲醇∶水=40∶60（v/v）；流速：1mL/min；柱溫：35℃；檢測波長：219nm；進樣量：20μL。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取單硝酸異山梨酯40mg，置于100mL容量瓶，加適量流動相振搖溶解后，稀釋并定容至刻度，搖勻，配制成濃度為0.4mg/mL的單硝酸異山梨酯對照品溶液1。精密量5mL對照品溶液1置于50mL容量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得到濃度為0.04mg/mL的單硝酸異山梨酯對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取單硝酸異山梨酯擇時微孔滲透泵片10片，精密稱定，除去包衣膜，精密稱定，研細，精密稱取粉末適量（約相當于單硝酸異山梨酯40mg的細粉），置于100mL容量瓶，加流動相適量，振搖使之溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾。精密量取續濾液5mL，置于50mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得單硝酸異山梨酯供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液的制備

取處方量輔料，按“1.3”項下的方法制備不含單硝酸異山梨酯的空白擇時微孔滲透泵片，并按“2.3”項下的步驟同法制備，即制得陰性樣品溶液。

2.5 系統適用性試驗

取上述對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液，按照“2.1”色譜條件，分別取20μL進樣測定，色譜圖見圖1，結果表明，在上述色譜條件下，其他成分不干擾單硝酸異山梨酯的HPLC測定。

圖1 HPLC色譜圖

2.6 線性關系試驗

精密稱取單硝酸異山梨酯對照品50mg置100mL容量瓶中，加適量流動相溶解，稀釋至刻度，作為儲備液（500μg/mL）。精密量取儲備液5、3、1.5、1、0.5mL，置 50mL 容量瓶中，加流動相稀釋至刻度得到 50、30、15、10、5μg/mL 的單硝酸異山梨酯對照品溶液。按照“2.1”色譜條件，取20μL進樣測定，用濃度與峰面積進行線性回歸。結果表明，單硝酸異山梨酯濃度（C）與其峰面積（A）在5.0～50μg/mL范圍內線性關系良好，回歸方程為A=4930C-606.18（r=0.9999，n=5）。

2.7 精密度試驗

取“2.2”項下的對照品溶液，按照“2.1”色譜條件，連續進樣5次，測定峰面積，計算單硝酸異山梨酯峰面積的RSD為0.92%（n=5）。

2.8 溶液穩定性試驗

取“2.2”項下的對照品溶液及“2.3”項下的供試品溶液，放置 0、2、4、6、8、12h 后，按照“2.1”色譜條件，測定單硝酸異山梨酯面積，以峰面積考察穩定性。結果表明，對照品溶液和供試品溶液中單硝酸異山梨酯峰面積的RSD分別為0.78%，0.96%（n=5）。表明單硝酸異山梨酯對照品溶液和供試品溶液在12h內穩定性良好。

2.9 重復性試驗

取單硝酸異山梨酯擇時微孔滲透泵片樣品，除去包衣膜，精密稱定，研細，分別精密稱取6份粉末適量（約相當于單硝酸異山梨酯40mg的細粉），按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.1”色譜條件，取20μL進樣，測定峰面積；另取“2.2”項下對照品溶液，同法測定，按外標法計算。樣品中單硝酸異山梨酯的平均標示量為98.8%，RSD為0.91%（n=6）。

2.10 回收率試驗

精密稱取單硝酸異山梨酯對照品32，40，48mg（80%、100%、120%）各三份，置于50mL容量瓶中，按處方比例加入輔料，加入流動相適量，振搖溶解，稀釋至刻度，搖勻。用0.45μm微孔濾膜過濾，取續濾液稀釋至適當濃度并進樣，另取“2.2”項下單硝酸異山梨酯對照品溶液作為對照，計算回收率，得到平均回收率為99.19%，RSD為0.41%（n=9）。

2.11 樣品含量測定

取單硝酸異山梨酯擇時微孔滲透泵片樣品3批，按“2.3”項進行制備，按照“2.1”項下條件進樣，記錄數據。另取“2.2”項下單硝酸異山梨酯對照品溶液，以峰面積計算單硝酸異山梨酯的含量。結果見表1，3個批號的樣品含量均符合規定。

表1 單硝酸異山梨酯擇時微孔滲透泵片的含量測定結果（%，n=3）

2.12 單硝酸異山梨酯擇時微孔滲透泵片的體外釋放曲線

取上述3批自制單硝酸異山梨酯擇時微孔滲透泵片，按照《中國藥典》2015年版四部通則0931溶出度與釋放度測定法[15]，采用轉籃法，以pH6.8的磷酸鹽緩沖液為釋放介質，轉籃轉速為100r/min，溫度為（37.0±0.5）℃，比較三個批次的釋放度差異，結果見圖2。

圖2 單硝酸異山梨酯擇時微孔滲透泵片的體外釋放曲線

由圖2結果可知，三批單硝酸異山梨酯擇時微孔滲透泵片體外釋放曲線批間重復性良好。三批樣品在前4h幾乎不釋放，4～16h內基本達到零級釋放，釋藥持續12h。本制劑日服一次，不僅可減少患者服藥次數，且通過緩慢恒速釋放藥物，使血藥濃度保持平穩，且具有約4h時滯，與心絞痛發作的生物節律相符合，適于心絞痛的時辰給藥治療。

3 討論

本研究制備的單硝酸異山梨酯擇時微孔滲透泵片與現有制劑相比不僅具有血藥濃度波動小，給藥次數少，藥效持久，還具有符合心腦血管疾病的時辰節律性的特點。自制片通過隔離衣和控釋衣的共同溶蝕控制藥物釋放的時滯，待隔離衣緩慢溶蝕后，基本通過控釋衣控制藥物的釋放，并達到零級釋放，從而具有擇時和控釋的雙重效果。其還具有傳統滲透泵制劑藥物的釋放行為，不受環境pH值、食物以及胃腸蠕動等因素的影響[16-17]。

目前在美國上市的鹽酸維拉帕米滲透泵片（商品名為Covera-HS），是首個上市的脈沖制劑[18]。它是依據滲透泵技術制備的擇時釋藥制劑，含有雙層膜結構，內層為羥丙甲纖維素（HPMC）隔離衣膜，外層為醋酸纖維素控釋衣膜，在靠近藥物層的控釋衣膜上有釋藥小孔。其為雙層片芯外包雙層膜的制劑，需要激光打孔，而本研究制備的單硝酸異山梨酯擇時釋時微孔滲透泵片為單層片，控釋衣膜的釋藥孔由致孔劑遇水形成的大量微孔組成[19-20]。因此，相比已經上市的擇時釋藥制劑，本研究的擇時釋藥制劑不僅制備簡單，且無需激光打孔，降低了生產成本。