流式細胞術檢測急性白血病(AL)患者外周血T淋巴細胞亞群的表達及其意義

饒婷 石大鵬

【摘要】目的：采用流式細胞術對急性白血病（AL）患者外周血T淋巴細胞亞群的表達水平進行檢測，分析外周血T淋巴細胞亞群表達的臨床意義。方法：選取我院接診AL患者72例作為觀察組，其中急性髓細胞白血病（AML）45例、急性淋巴細胞白血病（ALL）27例，另選取健康體檢自愿者30例作為對照組，對兩組患者外周靜脈血進行采集，運用流式細胞術行T淋巴細胞亞群檢測，運用血凝儀行血漿凝血指標檢測，并行相關性和ROC曲線分析。結果：亞組ALL組、AML-M2組、AML-M3組、AML-M5組、B淋巴細胞、NK淋巴細胞表達明顯下降，明顯升高（P<0.05），同時凝血指標D-D、FIB、PT、APTT、TT均表現為明顯升高，AT III表現為明顯下降（P<0.05）;AML-M3組治療后、B淋巴細胞、NK淋巴細胞、D-D、FIB、PT、APTT、TT均有明顯好轉（P<0.05）。相關性分析，根據相關性分析結果顯示，外周血T淋巴細胞與凝血指標表現出不同的相關性，但、B淋巴細胞與各凝血指標相關性均無統計學意義（P>0.05）。ROC曲線分析，外周血T淋巴細胞在AL診斷中，其AUC計算結果為0.821，靈敏度為73.8%，特異度為83.9%。結論：采用流式細胞術對AL患者外周血T淋巴細胞亞群進行測定，其表現與凝血指標呈現出較高的一致性，可用于AL臨床診斷、治療的評估。

【關鍵詞】急性白血病;流式細胞術;T淋巴細胞亞群;凝血指標

急性白血病（acute leukemia，AL）是一種非常多見的造血干細胞引起的惡性克隆性疾病，在發病的過程中骨髓會表現出異常的幼稚細胞以及原始細胞迅速增加，并大量蓄積在骨髓嚴重影響正常的造血功能變化，可致使脾臟、肝臟、淋巴結等各種髓外臟器受累。患者普遍表現為出血、貧血、浸潤、感染等征象，對其日常生活帶來了極大的影響。有研究者表示，AL的發生發展與其免疫紊亂密切相關，其中T淋巴細胞亞群發揮著非常關鍵的作用[1]。本研究選取AL患者，運用流式細胞術對其外周血T淋巴細胞亞群的表達水平進行測定，明確其變化規律，以便為臨床診斷、病情監測提供客觀依據。

1資料與方法

1.1一般資料

本研究病例均來自我院2019年1月-2020年4月接診的AL患者，所有患者均根據《血液病診斷及療效標準第四版》（2018年）[2]中相關標準進行確診，且自愿參與本研究，并簽訂知情同意書。選取AL患者72例作為觀察組，其中女性31例，男性41例，年齡為（40.35±10.38）歲，病程為（1.64±0.83）年;根據免疫表型、細胞形態學、細胞遺傳學以及分子生物學進行分型，其中急性髓細胞白血病（AML）患者45例，急性淋巴細胞白血病（ALL）患者27例。AML組又可分為AML-M2組（n=15）、AML-M3組（n=15）、AML-M5組（n=15）。另從同期健康體檢中心抽取健康志愿者30例作為對照組，其中女性13例，男性17例，年齡為（40.18±10.82）歲。各組患者一般資料比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1治療方法：根據《中國成人急性髓系白血病（非急性早幼粒細胞白血病）診療指南》（2017年版）中相關指導要求為患者提供化療治療[3]。

1.2.2檢測方法：所有患者在入院當日以及持續接受2個周期化療之后，分別取3mL空腹靜脈血，將其置于3.85%乙二胺四乙酸抗凝管內，取血清保存。取血樣50ul于試管中，加入CD3-FITC/CD4-PE/CD45-PerCP熒光單克隆抗體試劑10ul（流式細胞儀法，邁瑞mindray-BricyteE6），輕輕震蕩混勻，室溫避光孵育15min，向管內加入1mL溶血素，輕輕震蕩混勻后避光靜置10min，然后以1500r/min離心5min，棄去上清液，加入PBS液1ml，輕輕震蕩混勻，以1500r/min離心5min，再次棄去上清液，加入300ulPBS液，輕輕震蕩混勻后，使用流式細胞儀檢驗。運用流式細胞儀（邁瑞，mindray-BricyteE6），通過直接熒光標記法，對不同的熒光標記單克隆抗體加入到樣本內，并將樣本放入帶有微球的樣品管中上機實施檢測。將縱坐標設置為測向角散射光，將橫向坐標設計為前向角散射光，這就能夠確保淋巴細胞均能夠列入到測定范圍，同時在對細胞進行吸獲之后，再配合流式細胞儀系統軟件對測定結果實施分析，最終獲得T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞（CD3-CD19+）、NK淋巴細胞（CE3-CD16+CD56+）的絕對計數，同時基于該結果對比值進行計算。另運用血凝儀（積水SEKISUI，coapresra2000）及其配套試劑對患者的血漿水平進行測定，包括血漿D-二聚體（D-D）、血漿纖維蛋白原（FIB）、凝血酶原時間（PT）、抗凝血酶（AT III）、活化部分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶時間（TT）。

1.3統計學方法

運用統計學軟件SPSS22.0行數據的分析處理，以均數±標準差（±s）表示計量資料，以t值檢驗。以Person相關性分析判定AL患者外周血T淋巴細胞亞群與凝血指標之間的關系。繪制ROC曲線，判定血外周血T淋巴細胞亞群對AL的診斷價值。若P<0.05即表示差異有統計學意義。

2結果

2.1各組患者外周血T淋巴細胞亞群及凝血指標表達水平比較

ALL組、AML-M2組、AML-M3組、AML-M5組外周血T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞、NK淋巴細胞表達水平、凝血指標D-D、FIB、PT、AT III、APTT、TT表達水平與對照組比較，差異有統計學意義（P<0.05）;ALL組、AML-M2組、AML-M3組、AML-M5組外周血T淋巴細胞亞群表達水平、凝血指標D-D、FIB、PT、AT III、APTT、TT表達水平與對照組比較，差異有統計學意義（P<0.05）;ALL組、AML-M2組、AML-M3組、AML-M5組外周血T淋巴細胞亞群表達水平、凝血指標D-D、FIB、PT、AT III、APTT、TT表達水平比較，差異有統計學意義（P<0.05）。

2.2 AL患者治療前后外周血T淋巴細胞亞群變化

ALL組患者治療后，外周血T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞、NK淋巴細胞表達水平、凝血指標D-D、FIB、PT、AT III、APTT、TT表達水平與治療前比較，差異有統計學意義（P<0.05）;AML-M2組、AML-M2組、AML-M5組治療后，外周血T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞、NK淋巴細胞表達水平、凝血指標D-D、FIB、PT、AT III、APTT、TT表達水平與治療前比較，出現不同程度的改變，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1

2.3外周血T淋巴細胞與凝血指標的相關性分析

根據相關性分析結果顯示，外周血T淋巴細胞與凝血指標表現出不同的相關性，其中/、B淋巴細胞與各凝血指標相關性均無統計學意義（P>0.05）。見表2。

2.4外周血T淋巴細胞亞群對AL的診斷價值分析

繪制ROC曲線，根據分析結果來看，外周血T淋巴細胞在AL診斷中，其AUC計算結果為0.821，靈敏度為73.8%，特異度為83.9%。

3討論

本研究以健康志愿者作為對照組，對比AL患者的T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞、NK淋巴細胞表達水平、凝血指標D-D、FIB、PT、AT III、APTT、TT表達水平，可以發現，ALL組、AML-M2組、AML-M3組、AML-M5組AT III、B淋巴細胞、NK淋巴細胞表達明顯下降，、D-D、FIB、PT、APTT、TT明顯升高（P<0.05）。

本研究通過對患者治療前后T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞、NK淋巴細胞表達水平、凝血指標D-D、FIB、PT、APTT、TT、AT III表達水平比較情況進行對比，結果發現，AML-M2組、AML-M3組、AML-M5組治療后，外周血T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞、NK淋巴細胞表達水平、凝血指標D-D、FIB、PT、AT III、APTT、TT表達水平與治療前比較，出現不同程度的改變，差異有統計學意義（P<0.05）。其中AML-M3組外周血T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞、NK淋巴細胞表達水平、凝血指標D-D、FIB、PT、APTT、TT、AT III表達水平異常改變更為顯著有關。本研究ALL組、AML組檢測結果顯示，ALL組的表達水平明顯更低，明顯更高，且與AML比較有顯著差異（P<0.05），證實了病情嚴重程度與T淋巴細胞亞群表達之間的相關性。

本研究首次探討了AL患者外周血T淋巴細胞與凝血指標之間的相關性，結合結果來看，AL患者外周血T淋巴細胞亞群與凝血指標D-D、FIB、PT、APTT、TT表現為正相關性，與AT III表現為負相關性，但其中/、B淋巴細胞與各凝血指標相關性均無統計學意義（P>0.05）。但該結果可證實外周血T淋巴細胞與凝血指標之間有著非常緊密的聯系。筆者推測可能是由于在炎性介質的刺激下，機體凝血功能受到影響發生相應改變所致。為了進一步了解外周血T淋巴細胞對AL的診斷價值，本研究進行了ROC曲線繪制，根據結果來看，外周血T淋巴細胞亞群在AL診斷中具有較高的靈敏度和特異度，這就表明在AL發生發展中，外周血T淋巴細胞亞群發揮了非常重要的意義，可用于疾病診斷和預后判斷。

綜上所述，通過流式細胞術檢測AL患者外周血T淋巴細胞亞群，可發現其表現為異常下降，表現為異常升高，而在對其實施治療后，患者的T淋巴細胞亞群均會發生的改變，故在AL患者診斷、治療中，外周血T淋巴細胞亞群能夠為其提供直接客觀的判斷依據，具有非常積極的臨床意義。

參考文獻

[1]劉冬梅，董明華，程娜娜.急性淋巴細胞白血病患兒外周血IL-2、IL-17、NK細胞水平變化及對免疫功能的影響[J].國際醫藥衛生導報，2018，24（23）：3573-3576.

[2]張之南，沈悌.血液病診斷及療效標準[M].4版.北京：科學出版社，2018：113-115.

[3]中華醫學會血液學分會白血病淋巴瘤學組.成人急性髓系白血病（非急性早幼粒細胞白血病）中國診療指南（2017年版）[J].中華血液學雜志，2017，38（3）：177-182.