甲狀腺癌超聲彈性成像參數(shù)分析及與其生物學(xué)行為的關(guān)聯(lián)性

阮偉麗，柴真真，柴振基，韓芳芳，石延輝

隨著診療技術(shù)的飛速發(fā)展，甲狀腺腫瘤檢出率呈逐年上升趨勢(shì)，而不同性質(zhì)甲狀腺腫瘤治療以及預(yù)后有差異性，早發(fā)現(xiàn)、早診斷對(duì)于治療方案制定極具意義［1］。超聲檢查具有經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)小、輻射小、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)勢(shì)，屬于篩查甲狀腺癌的主要方式，而彈性成像技術(shù)（ultrasonic elastography，UE）可有效評(píng)價(jià)腫瘤組織硬度或者彈性，為臨床鑒別腫瘤提供更多有效診斷信息［2］。UE相關(guān)參數(shù)例如應(yīng)變率比值（Steain ratio，SR）和彈性評(píng)分對(duì)于甲狀腺腫瘤的良惡性鑒別具有較高價(jià)值，但關(guān)于其與甲狀腺癌相關(guān)生物學(xué)行為的關(guān)聯(lián)性研究較少。選取筆者所在醫(yī)院甲狀腺腫瘤患者94例作為研究對(duì)象，分析UE技術(shù)檢查的相關(guān)參數(shù)及與其相關(guān)生物學(xué)行為的關(guān)聯(lián)性?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料選取筆者所在醫(yī)院2018年1月—2019年12月收治的甲狀腺腫瘤患者94例，均行UE檢查，并經(jīng)組織活檢或者病理證實(shí)。其中男34例，女 60 例；年齡 34~65 歲，平均（49.53±7.72）歲。腫瘤直徑為 4~15 mm，平均（9.48±2.72）mm，甲狀腺癌48例，良性腫瘤46例。

1.2選取標(biāo)準(zhǔn)（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)組織活檢首次確診為甲狀腺腫瘤者；②有臨床完整資料者；③知情研究?jī)?nèi)容并簽署知情同意書者。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他類型甲狀腺疾病者；②合并嚴(yán)重精神以及認(rèn)知障礙者；③合并其他部位的惡性腫瘤者；④伴有全身性感染性疾病者；⑤伴有免疫功能嚴(yán)重異常者。

1.3方法

1.3.1 UE檢查 （1）利用意大利西門子型號(hào)為Acson S2000的超聲診斷設(shè)備，并具有彈性成像技術(shù)和定量分析軟件，將探頭頻率設(shè)置為4~15 MHz；患者取平躺頭后仰，頸部暴露，利用斜向、縱向、橫向等多平面結(jié)合方式予以二維灰階和彩色多普勒檢查，囑咐患者屏氣約3～5 s，開啟SWE的掃查模式，等圖像穩(wěn)定后予以凍結(jié)，取感興趣區(qū)域（region of interest，ROI），將 ROI區(qū)域調(diào)整至約為病灶區(qū)域1~3倍，手持探頭于病灶位置施加壓力，壓力指標(biāo)于控制儀器上顯示3~4為最佳；利用雙幅實(shí)時(shí)顯示的功能對(duì)二維圖、彈性圖予以觀察，期間確保探頭穩(wěn)定來(lái)獲取穩(wěn)定彈性圖并進(jìn)行保存；利用彈性成像模式參照病灶以及周圍組織的藍(lán)綠分布特征對(duì)其硬度進(jìn)行判斷，并將儀器帶有的自帶彈性應(yīng)變率比值的測(cè)量?jī)x，取病灶和周圍同一深度、大小且形狀較為相似的甲狀腺正常組織作為ROI，對(duì)兩者SR值進(jìn)行計(jì)算。

1.3.2 相關(guān)增殖基因 （1）提取RNA：取組織100 mg加入1 ml TRIzl試劑，并勻漿處理組織標(biāo)本，室溫放置約5 min，等核酸蛋白復(fù)合物已經(jīng)完全分離后，于2~8℃ 10000×g 離心 10 min，取血清，加 0.2 ml氯仿持續(xù)震蕩約15 s，于室溫內(nèi)放置約 3 min，2~8℃10000×g離心15 min，將無(wú)色水相層取出，將異丙醇沉淀于水相中 RNA，2~8℃ 10000×g 離心 10 min，將沉淀物取出，利用濃度為75%乙醇對(duì)RNA沉淀予以洗滌，2~8℃7500×g離心5 min，將上清棄之，于室溫內(nèi)將RNA沉淀物放置至干燥，利用紫外分光光度法對(duì)RNA純度、完整性予以鑒定。（2）RNS反轉(zhuǎn)錄反應(yīng) （RT-PCR）：利用Reverse Transcription Kit將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，經(jīng)實(shí)時(shí)定量的PCR系統(tǒng)實(shí)施 RT-PCR， 其條件為 95℃ 30 s、95℃ 15 s、72℃15 s，40個(gè)循環(huán)，而引物設(shè)計(jì)軟件屬于Primer Premier 5.0；實(shí)施瓊脂糖凝膠電泳，將β-actin充當(dāng)mRNA內(nèi)參為對(duì)照，在紫外燈下對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察，通過(guò)PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)叉頭盒蛋白A1（FOXA1）、Yes相關(guān)蛋白 （YAP）、程序性細(xì)胞死亡基因 4（PDCD4）、表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（EGCG）、TPX2的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行計(jì)算。

1.4觀察指標(biāo)（1）對(duì)比良性甲狀腺腫瘤與甲狀腺癌的彈性評(píng)分和SR值。（2）對(duì)比良性甲狀腺腫瘤與甲狀腺癌的增殖基因表達(dá)，即 FOXA1、YAP、PDCD4、EGCG、TPX2。 （3）UE 技術(shù)檢查的相關(guān)參數(shù)和相關(guān)生物學(xué)行為的關(guān)聯(lián)性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以（±s）表示、組間比較行t檢驗(yàn)，利用Pearson分析相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩組彈性評(píng)分、SR值比較甲狀腺癌SR值、彈性評(píng)分高于良性腫瘤（P＜0.05），見表1。

表1 良惡性甲狀腺腫瘤彈性評(píng)分、SR值比較（±s）

表1 良惡性甲狀腺腫瘤彈性評(píng)分、SR值比較（±s）

組別 n SR值 彈性評(píng)分（分）甲狀腺癌組 48 4.86±1.94 3.36±0.24良性腫瘤組 46 1.52±0.37 2.00±0.21 t值 - 11.476 28.188 P 值 - ＜0.001 ＜0.001

2.2兩組增殖基因表達(dá)比較甲狀腺癌TPX2、YAP、FOXA1 大于良性腫瘤，PDCD4、EGCG 小于良性腫瘤（P＜0.05），見表 2。

表2 良惡性甲狀腺腫瘤增殖基因表達(dá)比較（±s）

表2 良惡性甲狀腺腫瘤增殖基因表達(dá)比較（±s）

組別 n TPX2 YAP PDCD4 EGCG FOXA1甲狀腺癌組 48 98.35±11.40 128.36±12.46 81.92±8.23 60.51±7.32 130.25±15.04良性腫瘤組 46 70.21±7.84 92.23±8.33 103.27±13.56 84.37±9.20 91.20±6.31 t值 - 13.887 16.454 9.272 13.944 16.287 P 值 - ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.3關(guān)聯(lián)性經(jīng)Pearson分析，SR值與PDCD4、EGCG（r1=-0.483；r2=-0.537）、彈性評(píng)分與 PDCD4、EGCG（r1=-0.646；r2=-0.453）呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），SR值 與 YAP、FOXA1、TPX2 （r1=0.659；r2=0.473；r3=0.589）、彈性評(píng)分與 YAP、FOXA1、TPX2（r1=0.660；r2=0.620；r3=0.521）呈正相關(guān)（P＜0.05）。

3 討論

甲狀腺位置較為表淺，在超聲檢查的過(guò)程中可直接予以壓力來(lái)獲得彈性圖像。UE可利用不同組織彈性系統(tǒng)差異和對(duì)外力作用的應(yīng)變差異，對(duì)病灶組織的應(yīng)變分布組成彈性圖，利用分析彈性圖像對(duì)病灶軟硬程度進(jìn)行判斷，繼而對(duì)良惡性腫瘤進(jìn)行鑒別、診斷，該方法在前列腺癌、乳腺癌診斷中已廣泛應(yīng)用［3］，但其對(duì)于甲狀腺癌的鑒別診斷價(jià)值如何仍需進(jìn)一步研究。

該研究結(jié)果顯示，甲狀腺癌SR值、彈性評(píng)分高于良性腫瘤，分析其原因?yàn)?，良性腫瘤由腺體增生以及炎性所致，而甲狀腺癌是基于以上兩者發(fā)生病變所致，從而導(dǎo)致甲狀腺癌硬度較大。目前甲狀腺腫瘤良惡性病理特征和超聲表現(xiàn)有較多研究，但關(guān)于UE相關(guān)參數(shù)與其關(guān)聯(lián)性研究較少，此外彈性評(píng)分、SR值對(duì)于臨床診斷具有較高實(shí)用性和推廣性，加之惡性腫瘤特征為無(wú)限增殖，故該研究就彈性評(píng)分、SR值與其增殖基因進(jìn)行了關(guān)聯(lián)性研究。結(jié)果顯示，良惡性甲狀腺腫瘤之間相關(guān)生物學(xué)行為存在顯著差異，且UE技術(shù)相關(guān)參數(shù)彈性評(píng)分、SR值與PDCD4、EGCG 成反比，與 YAP、FOXA1、TPX2 成正比。FOXA1可參與至細(xì)胞周期調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子，能抑制G1期細(xì)胞和提升S期細(xì)胞，加快細(xì)胞增殖［4］。EGCG屬于抗凋亡基因，能在甲狀腺癌組織中特異性表達(dá)，對(duì)Survivin蛋白表達(dá)產(chǎn)生抑制效果，繼而減少K1細(xì)胞增殖，進(jìn)而誘導(dǎo)凋亡，有明顯抗癌效果，其水平增多可加速誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，緩解病情［5］。PDCD4屬于腫瘤抑制蛋白，對(duì)甲狀腺癌SW579細(xì)胞的G1期增殖產(chǎn)生抑制效果，參加癌細(xì)胞的凋亡［6］。YAP與甲狀腺癌的表達(dá)水平與TNM分期以及腫瘤體積成正比［7］。TPX2屬于微管相關(guān)蛋白質(zhì)，異常表達(dá)時(shí)可誘發(fā)細(xì)胞中心體的異常擴(kuò)增以及惡性轉(zhuǎn)化，并加快細(xì)胞增殖，有極強(qiáng)促癌效果，在甲狀腺癌中為高表達(dá)，抑制表達(dá)后可降低甲狀腺癌的增殖能力，增加凋亡率［8］。

綜上所述，UE相關(guān)參數(shù)彈性評(píng)分、SR值以及相關(guān)生物學(xué)行為在良惡性甲狀腺腫瘤中具有顯著差異，且彈性評(píng)分、SR值與PDCD4、EGCG成反比，與YAP、FOXA1、TPX2成正比，具有較高應(yīng)用價(jià)值，可為臨床診斷提供可靠依據(jù)。