不同藥物處理及不同開口餌料對金波子魚受精卵孵化和稚魚存活的影響

黃毅 洪宇航 王尤潘 彭海

摘要：以金波子魚（Papiliochromj ramLrezL）為對象，研究3種藥物制劑（復方五倍子煎劑、慶大霉素、呋喃西林）對金波子魚受精卵孵化率的影響以及3種開口餌料（蛋黃粉、草履蟲和人工超微粉料）對金波子稚苗存活率的影響。結果表明，添加復方五倍子組孵化率最高，達到了（ 81.22+6.52）%，顯著高于其余兩組（P<0.05），且未發現畸形稚苗。因此，在金波子受精卵孵化時添加復方五倍子可顯著提高孵化率。使用人工超微粉料作開口餌料的小組稚苗7 d存活率最高，達到（91.33+3.06）%，顯著高于其余兩組（P<0.05）。因此，人工超微粉料較適合作為金波子稚苗的開口餌料。

關鍵詞：金波子魚（Papiliochromis ramirezi;藥物;孵化率;開口餌料;存活率

中圖分類號：S948

文獻標識碼：A

文章編號：0439-8114（ 2020）12-0117-04

D01：10.1408 8/j .cnki.issn043 9- 8114.2020.12.026

開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

熱帶觀賞魚作為一種世界性的觀賞魚，隨著人民生活水平的不斷提高，飼養熱帶觀賞魚的人群越來越大，消費市場極其廣闊。金波子魚（Papiliochromisramirezi），屬于麗魚科（Cichlidae）彩蝶鯛屬（Papilio-chromis），原產于南美洲委內瑞拉、哥倫比亞境內[1]。其是荷蘭鳳凰經人工選育培育出的人工新品種，是最受歡迎的短鯛之一。金波子成魚體長6-9 cm，雄魚體狹長，體色較深;雌魚腹部膨大，體色較淡。該品種飼養水質pH 6.5-7.0，水溫25-28℃。在水溫合適、水質良好、餌料充足的環境中，7d可繁殖1次，每次產卵400枚，體質較強者產卵可達500枚，孵化時間3-4 d。金波子經濟價值較高，目前市場價值成魚每尾十幾元至幾十元不等，可與其他品種的觀賞魚混養。中國金波子市場，以東部沿海城市居多，而在廣闊的內地市場仍屬于新興產業，市場潛力巨大。

雖然金波子魚成魚飼養相對容易，但其受精卵孵化則相對困難，生產中常出現孵化率較低、初孵稚魚存活率低下等問題。在自然狀態下，受精卵在孵化的過程中易受到水體中水霉菌、細菌等病原微生物的感染，影響孵化率甚至導致孵化失敗。常用的抗生素類，如慶大霉素、呋喃西林、孔雀石綠等藥物殺菌作用雖然較強，但具有高殘留性及強致癌、致畸等缺點，目前已在食用魚生產中禁止使用。在觀賞魚產業中，由于沒有明文規定，因此仍在繼續使用，但其強毒性及致畸效應仍對受精卵孵化及稚魚健康生長產生一定影響[2]。由于中草藥抗藥性和殘留性低的特點，近年來，已越來越多應用到水產養殖行業中。其中，五倍子、黃芩、黃柏、大黃等中草藥由于其具有對水產動物常見致病菌，如嗜水氣單胞菌、溶藻弧菌及遲鈍愛德華氏菌等的強抑制作用以及較好的抗炎消毒效果，已被廣泛應用于養殖生產中[3]。但目前中草藥制劑在水產行業的應用主要集中于食用魚、觀賞魚方面則鮮有報道。在綠色環保、健康高效水產的理念下，抗生素類的藥物不被提倡使用或被禁用。因此如何在養殖過程中選取最經濟有效且環保的藥物預防以水霉為主的各類病原微生物感染，提高孵化率，將成為觀賞魚繁殖的一項重要工作[4]。

在金波子魚繁殖過程中，魚苗出膜后體質較弱，卵黃囊消失后如果得不到合適的餌料作為營養補充，將造成魚苗的大量死亡，大大降低成活率。由于目前金波子魚開口餌料的研究較少，無法為科學育苗提供餌料方面的指導，各大養殖場普遍存在稚魚存活率較低的情況，使得整個行業魚苗供不應求。因此，開口餌料開發程度較低已成為制約金波子魚產業發展的重要因素。傳統的開口餌料如豆漿、蛋黃[5]等雖然價格低廉容易獲得，然而容易引起水質惡化，造成稚魚的死亡，直接影響育苗的成敗。而生物餌料如草履蟲[6]、輪蟲[7]等由于具有營養成分全面、規格多樣、可獲得性佳且不容易敗壞水質等特點，在整個養殖過程中可以保持水質穩定，減少因水質惡化而引起的幼苗死亡情況的發生。此外，目前各大水產公司應對開口餌料問題，均推出超微顆粒飼料，其在初孵幼苗的存活方面也起到較好的效果。

因此，在本次試驗中比較了3種不同藥劑（復方五倍子煎劑、慶大霉素和呋喃西林）和3種不同餌料（蛋黃粉、草履蟲和人工超微粉料）分別對金波子魚受精卵孵化及初孵稚魚存活的影響，以期篩選最有效的藥物和餌料組合以提高孵化率和稚魚成活率，為規模化養殖提供一定的理論指導，促進金波子魚的產業化發展，提高經濟效益。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

金波子魚種魚購自廣州市花地灣觀賞魚市場。試驗于2018年3-5月在西昌學院動物科學學院進行。試驗前種魚在125 cmx60 cmx60 cm循環水族缸中暫養2周以上，水溫28℃，pH 6.5-7.0，溶氧量>6mg/L，氨氮<0.5 mg/L，亞硝酸鹽<0.15 mg/L。按雌雄比例1：1放人孵化網中暫養，為保證試驗順利進行，共準備50對親本備用，種魚投喂經消毒處理的水蚯蚓，每天3次，時間分別為9：00、15：00、19：00。挑選體型健壯、無病無傷、無畸形、成熟度較好的金波子魚為試驗對象。

開口餌料中，蛋黃粉通過購買當地新鮮雞蛋，煮熟后按照每個蛋黃加入50 mL去離子水制成蛋黃粉懸液;草履蟲通過稻草液自行培養;人工超微粉料選擇廣州利洋公司生產“利餌多”（主要成分為活性生物蛋白、有益微生物，酵母細胞數≥1X10⁶個/g）。

復方五倍子煎劑制備：五倍子20 g、大黃15 g、黃柏15 g、黃岑15 g、土茯苓15g、炒白術15 g，將所有中草藥加入2L去離子水先浸泡2h，大火煮沸，在微火下熬制30 min，紗布過濾后備用。

1.2不同藥物對金波子魚受精卵孵化的影響

將發情親魚放人規格為25 cmx15 cmx20 cm水族缸中，每個缸中放置2個洗凈并經消毒的貝殼作為產卵場。待親魚自然交配后，將同一批受精卵隨機分為4組放人預先準備好曝氣水的水族缸中，其中A組加入復方五倍子煎劑，B組加入慶大霉素，C組加入呋喃西林，D組為空白對照組，不添加任何藥物。每小組設3個平行。參照預試驗結果及相關資料，最終確定的藥物濃度分別為復方五倍子煎劑20mg/L[8]，慶大霉素25 mg/L，呋喃西林25mg/L。各水族缸保持與暫養時相同水質條件。觀察并記錄各組受精卵孵化情況，并計算孵化率。孵化率=出膜魚苗數/受精卵總數×100%

1.3 不同開口餌料對金波子魚稚魚存活的影響

將孵化率最高組的初孵稚魚用于開口餌料試驗，待卵黃囊消失后開始投餌。試驗分為3個小組，每組3個平行，每個平行缸放置50尾稚苗，試驗周期為7d。其中A組投喂蛋黃粉，B組投喂人工超微粉料，C組投喂草履蟲。蛋黃組每個平行缸投喂0.1 g/次，蛋黃水懸液用60目紗網過濾，取上清液投喂;人工超微粉料組每個平行缸投喂0.1 g/次;濃度為40個/mL的草履蟲培養液投喂10 mL/次[6]，各組每天均投喂3次，投喂時間分別為9：00、15：00和19：00。喂食完畢及時吸出殘餌并換水，每次換水1/4，溫差不超過±1℃。觀察并記錄各組稚魚存活情況，發現死魚及時撈出避免污染水質。存活率=成活魚尾數，放養魚尾數×100%。

1.4 數據分析

試驗數據以平均值±標準差（Mean+SD）表示，用SPSS V20.0統計軟件對數據進行統計分析，用Levene法進行方差齊性檢驗，不滿足齊性方差時對數據進行反正弦或者平方根處理，采用ANOVA對試驗結果進行方差分析，采用Duncan法進行多重比較，取P<0.05為差異顯著。

2 結果與分析

2.1 不同藥物對金波子魚受精卵孵化的影響

如表1所示，添加五倍子復方煎劑組孵化率顯著高于其余各組（P<0.05），平均孵化率達到（81.22+6.52）%;慶大霉素組孵化率其次，達到（43.47+8.52）%，顯著高于呋喃西林組及空白組（P<0.05）;呋喃西林組平均孵化率為（ 27.07+4.54）%，顯著高于空白組（P<0.05）。而未添加任何藥物的空白組孵化率很低，僅為（1.32±2.28）%。其中，空白組從孵化開始24 h內受精卵死亡數量超過25%;36 h受精卵死亡數量超過50%;至50h幾乎全部死亡。

2.2不同開口餌料對金波子魚稚魚存活的影響

經過7d培育后，投喂人工超微粉料（利餌多）組金波子魚稚魚存活率最高，達到了（91.33+3.06）%，顯著高于其余各組（P<0.05）。投喂草履蟲組存活率其次，為（83.33+3.06）%。而投喂蛋黃組的金波子魚稚魚存活率相對較低，顯著低于其余兩組（P<0.05）（表2）。

3 小結與討論

魚類受精卵在孵化過程中易受到水霉、弧菌等病原微生物感染而引起受精卵死亡，導致孵化失敗，因此，在孵化過程中會添加各種抑菌藥物以提高孵化效率。近年來，中草藥在食用魚養殖中的使用比較廣泛[9-11]，但在觀賞魚養殖中應用較少，且鮮有文獻報道。金波子魚作為近年來國內觀賞魚產業中的熱門品種而被廣泛關注。但由于缺乏相關繁殖生物學研究報道，其較低的受精卵孵化率及稚魚存活率成為養殖產業的主要制約因素。本研究中以五倍子、黃芩、大黃等中草藥為主的復方煎劑處理后，其受精卵孵化率顯著高于其余兩種藥物及空白對照組，表明復方五倍子中草藥煎劑在受精卵孵化過程中的抗菌效果優于其他兩種藥物。該結果與盛竹梅等L81關于以五倍子為主的中草藥對虹鱒發眼卵霉菌感染的影響的結果一致。五倍子主要有效成分為鞣質和沒食子酸，對多種細菌、真菌具有明顯的抑制能力，且沒食子酸能夠與蛋白質結合生成鞣酸蛋白，對細菌有直接殺滅作用[1 2]。復方制劑中黃芩和大黃等藥物主要通過其活性成分黃芩苷和蒽醌類衍生物對金黃色葡萄球菌等水體致病菌產生強抑菌作用而發揮作用[13，14]。此外，有研究表明，飼料中添加五倍子可以促進羅非魚生長，增強免疫水平[15];而復方五倍子制劑同樣可提高鯽魚免疫力及抗應激水平[16]，即五倍子復方制劑可顯著抑制水體中病原菌，提高金波子魚的受精卵孵化率。

本研究過程中發現慶大霉素組和呋喃西林組稚魚均出現有少量歪尾等畸形苗的存在，而中草藥組并無發現。呋喃西林具有抗菌譜廣、抗菌活性強的特點，雖然被包括中國在內的多個國家禁止在食用魚養殖中使用，但目前在觀賞魚行業中仍有使用，并大量應用于水霉病等多發性感染的治療中[17]。此外，慶大霉素對各類魚具有較高毒性也多有報道[18.19]。因此，由于抗生素類藥物具有藥物殘留時間長、抗藥強、致畸率高等缺點，對孵化過程中的胚胎和剛孵出的稚魚影響比較大，用量把握不好可能會造成受精卵死亡和稚魚畸形，建議在觀賞魚中少用。本試驗結果也表明，使用五倍子復方制劑促進金波子魚受精卵孵化的效果要明顯優于上述兩種抗生素，且短期內無致畸作用。

蛋黃含有豐富的營養物質，如磷脂、礦物質、維生素等，且粒徑較小適合稚魚攝食，因此蛋黃可以基本滿足多數稚魚的需要[5]。但由于在狹小的孵化缸內蛋黃極易造成水質敗壞，引起魚苗死亡，到了投喂后期，稚苗死亡量明顯增加[20]，因此在日常投喂中為保持水質清新，降低稚魚死亡率，需要及時吸出殘餌糞便，并且適當注入新水。草履蟲經常被用作魚苗的開口餌料。雖然草履蟲的營養價值沒有其他人工餌料豐富，而且草履蟲一直處于運動狀態，對于稚苗攝食有一定的困難，但其作為一種活餌，含有優質蛋白質、氨基酸、脂肪等營養物質，可基本滿足稚魚的營養需求。只要養殖水體水質較好，一般不會引起水質的急劇惡化。所以在魚苗培育過程中，稚魚的存活率相對較高[21]。本試驗使用蛋黃和草履蟲作為開口餌料，金波子魚稚魚7d存活率均為50%以上，其中草履蟲組達80%以上，效果較好。但由于生物餌料來源安全性及穩定性等問題，在大規模生產中存在一定的制約。超微粒粉料作為人工配合飼料，其使用安全性及營養全面性有著一定的保障。本試驗所用利餌多在淡水魚苗水花、蝦苗、蟹苗的培育過程中使用較廣，其培育稚苗的存活率可達90%以上。但目前在觀賞魚魚苗培育過程中尚未廣泛使用。由于其成分含有大量生物活性蛋白及酵母菌等有益微生物，在培育稚苗時可以滿足稚苗攝食需求和營養需求，而且對養殖水環境具有一定調節作用，不會因為水質的急劇惡化引起稚苗大量死亡。

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基金項目：四川省教育廳一般科研項目（18ZB0554）

作者簡介：黃毅（1986-），女，重慶人，助教，碩士，主要從事水生觀賞動物養殖方面的研究，（電話）0834-2580034（電子信箱）lemonhuangyi@126.com。