海南17個辣椒品種對疫病抗性的鑒定

周洋 藍國兵 佘小漫 周冬梅 金寶紅 何自福

摘要：辣椒疫病是辣椒生產上主要病害之一，種植抗病品種是防治該病害最經濟有效和綠色的措施。采用孢子懸浮液苗期灌根接種法，對海南生產上推廣應用的17個辣椒品種進行鑒定與評價。結果表明，不同辣椒品種對疫病的抗病性差異較大，金艷、泰麗、長艷3個品種表現免疫，紅妃、熱辣4號2個品種表現為高抗，金驕紅玉、湘辣十七號、金驕M6、權御天下4個品種表現為抗病，金驕3.0表現為中抗，而熱甜3號、熱甜5號、湘研珍麗、熱辣3號、湘研6A、金驕神龍和熱辣2號7個品種表現為高感。可見，朝天椒類對疫病的抗性優于其他辣椒，線椒次之，而牛角椒和甜椒抗性較差。

關鍵詞：海南;辣椒;疫病;抗病性;孢子懸浮液苗期灌根法;病情指數

中圖分類號： S436.418? 文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2020）14-0138-04

辣椒（Capsicum annuum L.）是茄科辣椒屬的1年生或多年生作物，起源于中南美洲熱帶地區，明末清初時傳入我國[1]。近年來，我國辣椒種植面積在 150萬～200萬 hm2/年，占全國蔬菜總面積的 8%～10%，居于各種蔬菜首位[2]。辣椒因富含豐富的維生素并有芬芳的辛辣味而廣受消費者歡迎，世界有近3/4的消費者經常食用辣椒或辣椒制品[3-5]。辣椒是海南省冬種主要作物之一，自1987年起海南就開始栽培辣椒，種植面積達3 000 hm2/年，且逐年增加，2017年海南省辣椒播種面積達 45 489 hm2，占蔬菜種植面積的17.29%，居于各種蔬菜種植面積之首[6]。

辣椒疫病是由辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici L.）侵染引起的土傳病害，是辣椒生產上一種毀滅性病害[7-8]。1918年，首次在美國新墨西哥州發現辣椒疫病，其后陸續在歐洲、亞洲及拉丁美洲等國家和地區發生[9]。辣椒疫病也是海南省辣椒生產上主要病害之一，一般田塊發病率20%～30%，嚴重時可達70%以上，嚴重影響了海南省辣椒的生產發展[10]。目前，生產上對辣椒疫病的防治主要依靠農藥，但長期大量施用農藥，一方面極易導致疫霉菌對使用過的藥劑產生抗藥性，防效不斷下降;另一方面會造成辣椒果實農藥殘留和污染環境。辣椒品種對疫病抗性存在明顯差異，種植抗病品種不僅可以控制疫病的發生與流行，而且可以避免藥劑防治帶來的負面影響。因此，種植抗病品種是防治辣椒疫病最經濟、有效的措施[11-12]。

關于辣椒對疫病的抗性鑒定方法有如下報道。馬輝剛等報道，采用離體葉片接種法和孢子灌根接種法進行辣椒疫病的抗性鑒定，其中離體葉片接種法因不能進行量化而難以分級，只適合用于初步鑒定[13]。孢子灌根接種法模擬田間疫病發生過程中能較準確地反映出品種的抗性[13-14]。本研究采用孢子灌根接種法對海南主栽的17個辣椒品種抗性進行鑒定，以期為辣椒品種推廣種植及抗病育種提供依據。

1 材料與方法

1.1 待鑒定辣椒品種

供試的17個辣椒品種均來自海南市場，具體見表1，這些品種在海南生產均有推廣應用。

1.2 鑒定用菌株

辣椒疫病菌株為15BLLY1和15TSLY1，由廣東省農業科學院植物保護研究所提供。

1.3 供試材料育苗

各品種種子先用10%磷酸三鈉溶液浸泡 20 min，清水沖洗 3 次;30 ℃恒溫催芽 3 d;然后播種于事先裝有經消毒過的基質（草炭 ∶蛭石=3 ∶1）的4×8育苗穴盤中，每穴播2粒，培養至6～7葉時用于接種。接種前間苗，每穴1株。

1.4 接種方法

1.4.1 孢子囊誘導 產孢囊培養基為20%貝奇野菜培養液，貝奇野菜汁200 mL，去離子水800 mL，配制后121 ℃高壓蒸汽滅菌20 min，備用。

將辣椒疫霉菌株接種于20%的貝奇野菜培養液中，將菌絲塊盡可能分散開，在25 ℃黑暗條件下培養3～5 d;當菌絲長滿培養皿后，將其取出，用無菌水將菌絲清洗干凈，重新放入培養皿，加入無菌水，使其剛沒過菌絲，放入25 ℃培養箱中繼續培養;2 d后，鏡檢可見菌絲表面產生大量孢子囊。

1.4.2 游動孢子懸浮液的制備 將產生大量孢子囊的培養皿種加入適量的無菌水，使其淹沒菌絲，放入4 ℃冰箱中30 min，然后取出，用玻璃棒在菌絲表面輕輕來回刮動，使游動孢子充分釋放到水中。2個菌株的孢子懸浮液等體積、等濃度混合，將孢子懸浮液轉移至三角瓶中，用血球計數板測定孢子懸浮液濃度，稀釋至103 CFU/mL后立即用于接種[15]。

1.4.3 人工接種 采用游動孢子囊灌根法接種 6～7 葉期辣椒苗。接種前1 d苗盤淋足水，保證土壤處于接近飽和狀態。接種前，用玻璃棒在距辣椒苗根部2～3 cm處基質上扎1個約5 cm深的孔，將接種液注入孔中，接種量為4 mL/株;每個品種重復3次，每個重復30株苗，以不接菌的作為空白對照。接種處理的辣椒苗放置于玻璃溫室中培養，室內溫度25 ℃左右。

1.5 病情調查

當接種處理出現病株時開始調查，每2 d調查1次，進行逐株調查，記錄病株數和病級，計算各處理病株率和病情指數[16]。待各處理充分發病且病情較穩定時，統計最終各處理病株率和病情指數。

辣椒疫病個體病株病情分級標準[17]：

0級，無病癥;

1級，幼苗根莖部輕微變黑，葉片不萎蔫或可恢復性萎蔫;

2級，幼苗根莖部變黑達1～2 cm，葉片不可恢復性萎蔫，下部葉片偶有脫落;

3級，幼苗根莖部變黑超過2 cm，葉片明顯萎蔫或落葉明顯;

4級，幼苗根莖部變黑縊縮，除生長點外全部落葉或植株萎蔫;

5級，植株枯死;

病情指數=∑（各級病株數×相對級數）/（調查總株數×最高病情級別的代表數值）× 100。

辣椒品種對疫病抗性水平評價標準：

免疫（I），病情指數為0;

高抗（HR），0<病情指數≤10;

抗病（R），10<病情指數≤30;

中抗（MR），30<病情指數≤50;

感病（S），50<病情指數≤70;

高感（HS），70<病情指數

2 結果與分析

接種后第2天開始調查，每2 d調查1次。接種后第6天，出現發病植株，接種后第20 d，各處理辣椒苗病情趨于穩定，以此時的調查結果進行品種抗性評價，用DPS 7.05版對調查結果進行統計分析（表2）。調查結果表明，供試的17個辣椒品種發病率和病情指數存在明顯差異，其中長艷、泰麗和金艷3個品種的病情指數最低，均為0;熱甜3號、熱甜5號和湘研珍麗3個品種的病情指數最高，均為100。方差分析結果顯示，表現為高感的7個辣椒品種，除熱甜3號、熱甜5號和香研珍麗外，其余4個品種之間差異顯著;熱辣2號與金驕3.0存在顯著性差異;表現抗病的4個品種權御天下、金驕M6及湘辣十七號之間差異顯著，湘辣十七號與金驕紅玉差異不顯著;表現高抗的熱辣4號與紅妃之間差異不顯著;表現免疫的品種病情指數均為0，無顯著性差異。

在供試的17個辣椒品種中，金艷、泰麗、長艷3個品種表現免疫，占供試材料的17.65%;紅妃、熱辣4號2個品種表現為高抗，占11.76%;金驕紅玉、湘辣十七號、金驕M6、權御天下4個品種表現為抗病，占 23.53%;金驕3.0表現為中抗，占5.88%;熱甜3號、熱甜5號、湘研珍麗、熱辣3號、湘研6A、金驕神龍、熱辣2號等7個品種表現為高感，占41.18%。

不同類型的辣椒對疫病抗性存在一定差異。7個朝天椒品種中，金艷、泰麗、長艷3個品種表現為免疫，紅妃表現為高抗，金驕M6和權御天下表現為抗病，金驕3.0表現為中抗;3個線椒品種中，熱辣4號表現為高抗，湘辣十七號表現為抗病，而金驕神龍表現為高感;3個牛角椒品種熱辣3號、湘研6A、湘研珍麗均表現高感。可見，朝天椒對疫病的抗性普遍較好，線椒次之，而牛角椒和甜椒抗性較差。至于黃燈籠、美人椒，因為在本研究中僅1個品種，所以其抗性表現難以定論。

3 結論與討論

采用孢子懸浮液灌根法鑒定來自海南生產上的17個辣椒品種對疫病的抗性，金艷、泰麗、長艷3個品種表現免疫，紅妃、熱辣4號2個品種表現為高抗，金驕紅玉、湘辣十七號、金驕M6、權御天下4個品種表現為抗病，金驕3.0表現為中抗，而熱甜3號、熱甜5號、湘研珍麗、熱辣3號、湘研6A、金驕神龍和熱辣2號7個品種表現為高感，朝天椒類對疫病的抗性優于其他辣椒，線椒次之，而牛角椒和甜椒抗性較差。

關于辣椒對疫病的抗病性鑒定，目前尚未有統一的方法，許多因素如接種方法、接種濃度、植株生育期及疫霉菌的致病力等對鑒定結果都有不同程度的影響[18-19]。孢子懸浮液灌根接種方法操作簡便、結果穩定，應用較普遍[20]。本研究選用來源于不同地區的2株致病力中等的辣椒疫霉菌菌株，于辣椒6～7葉苗期進行灌根接種，對海南的辣椒品種進行評價，取得較好的結果。

戚仁德等研究發現，辣椒品種對疫病的抗性與疫霉菌株的致病力相關，不同來源的辣椒疫霉菌株對辣椒品種的致病力不同，同樣一個辣椒品種對不同辣椒疫霉菌株的抵抗力不同[21]。這說明用1個致病菌株鑒定出來的辣椒品種抗性，其抗性結果是有局限的。因此，本研究選用來源于不同地區的2株致病力中等的辣椒疫霉菌菌株進行等量混合接種，以彌補單一菌株的致病力不同導致的鑒定結果偏差。一個品種在田間的抗性表現，與品種自身的抗病基因、病原菌種群的致病力變異、溫濕度、降雨、種植時期以及栽培管理等因素密切相關。因此，建議辣椒育種部門在廣泛收集辣椒種質資源的同時，積極與植物病理學家合作，在品種抗性水平和抗性機制上進行深入研究，培育出具有不同抗性基因的辣椒品種，以供生產上需要。農戶在種植抗病品種的同時，應加強栽培管理，合理施肥，創造一個有利于辣椒生長，不利于病原菌生長繁殖的環境條件，從而減少病原菌數量，達到控制病害的目的[22]。

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收稿日期：2019-08-21[HJ1.5mm]

基金項目：國家重點研發計劃（編號：2018YFD0201200）;廣東省果菜產業技術體系創新團隊項目（編號：2019KJ110）。

作者簡介：周 洋（1984—），男，山東聊城人，碩士，農藝師，主要從事農作物病蟲害防控等技術推廣。Tel：（0898）25510439;E-mail：279489688@qq.com。

通信作者：何自福，博士，研究員，主要從事植物病理學研究，Tel：（020）87597476，E-mail：hezf@gdppri.com;金寶紅，高級農藝師，主要從事農業技術推廣，Tel：（0898）25510439，E-mail：dfjbhong@sina.com。