2型糖尿病患者血清EGR1水平與非酒精性脂肪性肝病的關系

張玉彩 劉哲慧 張小睿

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是除外乙醇等明確肝損傷病因的以肝臟脂肪變性為特征的臨床綜合征[1-2]。目前多認為NAFLD與生活習慣、2型糖尿病(T2DM)及高脂血癥等代謝性疾病有關[3]。有研究表明T2DM患者的NAFLD患病率逐年升高，并且NAFLD患者的T2DM發病率及并發癥發生率也升高了[4-5]。另有研究顯示胰島素抵抗和T2DM是NAFLD的獨立危險因素[6]。闡明T2DM與NAFLD相互促進的機制，并探究相關生物學標志物對兩者的預防和治療意義重大。有研究報道了早期生長反應因子1(EGR1)可通過增加胰島素抵抗促進T2DM的發病[7]，但關于EGR1與T2DM并發NAFLD及NAFLD嚴重程度的關系尚不明確。本研究檢測了T2DM患者和T2DM并發NAFLD患者的血清EGR1水平，并分析其與T2DM并發NAFLD及NAFLD嚴重程度的關系，以期為T2DM和NAFLD的防治及病情評估提供幫助。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年4月至2019年4月在聊城市人民醫院就診的158例T2DM患者作為研究對象，根據患者是否并發NAFLD將其分為NAFLD組(n=106)和T2DM組(n=52)，另擇50名同期健康體檢者作為對照組。T2DM診斷符合世界衛生組織(WHO)的診斷標準，NAFLD診斷符合《非酒精性脂肪性肝病診療指南(2010年1月修訂)》[8]，并根據肝臟超聲結果判定NAFLD嚴重程度。根據NAFLD嚴重程度將NAFLD組患者分為輕度組(n=54)、中度組(n=36)和重度組(n=16)。納入標準：(1)接受肝臟超聲檢查；(2)年齡30～70歲；(3)簽署知情同意書。排除標準：(1)T1DM或妊娠糖尿病；(2)嚴重周圍血管疾病、酮癥酸中毒或神經病變等；(3)冠心病；(4)合并嚴重肝、腎功能損傷；(5)合并酒精性肝損傷、自身免疫性肝炎、病毒性肝炎及藥物性肝損傷等；(6)惡性腫瘤。NAFLD組平均年齡(45.39±7.52)歲，男性70例，女性36例；T2DM組平均年齡(45.28±6.67)歲，男性34例，女性18例；對照組年齡(47.14±7.89)歲，男性26例，女性24例。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 資料收集 收集所有受試者的年齡、性別、身高、體質量、肝臟超聲結果及疾病史等信息，計算體質指數(BMI)，BMI=體重(kg)/身高(m)2。

1.2.2 血清指標檢測 抽取3組的晨起肘部空腹靜脈血10 mL，離心15 min(3 500 r/min)，提取上清液加入EP管中，置于-20 ℃冰箱內保存待驗。用8000型自動生化分析儀(瑞士Roche公司)檢測3組的血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、空腹血糖(FPG)和空腹胰島素(FINS)。計算胰島素抵抗指數(HOMA-IR)，HOMA-IR=FPG(mmol/L)×FINS(mIU/L)/22.5。

采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-qPCR)檢測3組的血清EGR1水平。取EP管中上清液，加入總RNA提取試劑盒(美國GENMED公司)中提取總RNA，并用紫外分光光度計(上海美譜達公司)檢測總RNA水平和純度。取總RNA，加入反轉錄試劑盒[賽默飛世爾科技(中國)有限公司]中進行反轉錄反應。將反轉錄反應產物加入PCR儀(杭州博日公司)中進行擴增反應，反應條件為95 ℃預變性2 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，95 ℃ 15 s，共40個循環。GAPDH為內參，用2-ΔΔCt表示受試者血清EGR1水平。引物序列見表1。

表1 引物序列

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 3組的一般資料比較

3組的年齡、性別相比較，差異均無統計學意義(P>0.05)；3組的BMI、TC、TG、LDL-C、HDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR相比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 3組的一般資料比較

2.2 3組的血清EGR1水平比較

3組的血清EGR1水平相比較，差異有統計學意義(F=260.760，P<0.001)。NAFLD組血清EGR1水平為0.68±0.15，低于T2DM組(0.87±0.17)和對照組(1.29±0.16)，差異均有統計學意義(q=10.060，P<0.05；q=32.334，P<0.05)。T2DM組血清EGR1水平低于對照組，差異有統計學意義(q=19.408，P<0.05)。

2.3 血清EGR1水平與T2DM患者糖脂代謝相關指標的關系

通過Pearson相關性分析探討血清EGR1水平與T2DM患者(含T2DM并發NAFLD患者，n=158)的BMI、TC、TG、LDL-C、HDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR的關系，結果顯示EGR1與BMI、LDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR呈負相關關系(r=-0.234，P=0.003；r=-0.346，P<0.001；r=-0.362，P<0.001；r=-0.244，P=0.002；r=-0.369，P<0.001)，而EGR1與TC、TG和HDL-C無相關性(r=-0.043，P=0.591；r=-0.022，P=0.786；r=0.015，P=0.823)。

2.4 T2DM并發NAFLD的相關因素分析

將BMI(>26.17 kg/m2=1，≤26.17 kg/m2=0)、TC(>5.36 mmol/L=1，≤5.36 mmol/L=0)、TG(>3.14 mmol/L=1，≤3.14 mmol/L=0)、LDL-C(>3.05 mmol/L=1，≤3.05 mmol/L=0)、HDL-C(>1.14 mmol/L=1，≤1.14 mmol/L=0)、FPG(>11.40 mmol/L=1，≤11.40 mmol/L=0)、FINS(>14.53 mIU/L=1，≤14.53 mIU/L=0)、HOMA-IR(>7.57=1，≤7.57=0)和EGR1(>0.74=1，≤0.74=0)作為自變量，將T2DM是否并發NAFLD(是=1，否=0)作為因變量，納入多因素Logistic回歸分析，結果顯示BMI、TC、LDL-C、FPG、FINS、HOMA-IR和EGR1與T2DM并發NAFLD密切相關。詳見表3。

表3 影響T2DM并發NAFLD的多因素Logistic回歸分析

2.5 不同嚴重程度的NAFLD患者的血清EGR1水平比較

根據NAFLD嚴重程度將NAFLD組患者分為輕度組(n=54)、中度組(n=36)和重度組(n=16)。3組的血清EGR1水平比較，差異有統計學意義(F=76.424，P<0.001)。輕度組的血清EGR1水平為0.78±0.10，高于中度組(0.62±0.07)和重度組(0.48±0.10)，差異均有統計學意義(q=11.440，P<0.05；q=16.096，P<0.05)。中度組血清EGR1水平高于重度組，差異有統計學意義(q=7.056，P<0.05)。

3 討論

T2DM與NAFLD關系密切，可促進NAFLD發病[9]。有研究表明，絕大部分肥胖的T2DM患者都患有不同嚴重程度的NAFLD[10]。探究T2DM并發NAFLD的生物學標志物對于了解疾病情況及研發治療藥物的意義重大。EGR1是即刻早期基因家族的一員，可編碼鋅指蛋白，在細胞的增殖、分化及凋亡等方面發揮著重要作用[11-13]。有研究發現EGR1參與了乙醇誘導的大鼠肝損傷及肝纖維化等[14-15]。目前關于EGR1與NAFLD嚴重程度及T2DM并發NAFLD的關系尚未闡明。

本研究通過檢測3組的血清EGR1水平，發現NAFLD組的血清EGR1水平低于T2DM組和對照組，且2DM組的血清EGR1水平低于對照組，表明EGR1可能不僅參與了T2DM的發病，也參與了T2DM繼發NAFLD的發病，但具體的病理生理機制還需進一步研究探索。本研究進一步分析了T2DM組和NAFLD組的血清生物化學指標、BMI及HOMA-IR，結果顯示NAFLD組的BMI、TC、TG、LDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR更高。通過Pearson相關性分析探討T2DM患者的血清EGR1水平與BMI、TC、TG、LDL-C、HDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR的關系，結果顯示EGR1與BMI、LDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR呈負相關關系。上述結果表明EGR1可能通過調控LDL-C、FPG和FINS，進而促使T2DM并發NAFLD。通過多因素Logistic回歸法分析影響T2DM并發NAFLD的相關因素，結果顯示BMI、TC、LDL-C、FPG、FINS、HOMA-IR和EGR1與T2DM并發NAFLD密切相關。筆者認為EGR1可能通過調控LDL-C、FPG和FINS來增加機體脂質堆積及胰島素抵抗情況，進而促使T2DM并發NAFLD，但其具體機制仍需基礎研究探索。本研究進一步比較了不同嚴重程度的NAFLD患者的血清EGR1水平，發現輕度組的血清EGR1水平高于中度組和重度組，且中度組的血清EGR1水平高于重度組，表明EGR1不僅可促使T2DM并發NAFLD，還可促進NAFLD的進展。

綜上所述，EGR1與T2DM并發NAFLD密切相關，檢測血清EGR1可輔助判斷NAFLD嚴重程度。本研究存在不足之處：(1)為單中心研究，樣本量偏小；(2)樣本均為聊城地區患者，結果可能存在一定偏倚；(3)根據肝臟超聲結果判定NAFLD嚴重程度可能對結果造成一定的偏倚。今后將擴大樣本量，進行多中心、跨地域臨床研究，同時開展基礎研究，以闡明EGR1與T2DM和NAFLD發病及病情進展的關系。