miR-148a在急性胰腺炎患者中的表達(dá)水平及與預(yù)后的關(guān)系

急性胰腺炎是消化系統(tǒng)常見的臨床危重癥，近年來其發(fā)病率逐年升高[1-2]。急性胰腺炎起病急、進(jìn)展快、病死率較高，部分患者可在發(fā)病數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡，病死率為30%～50%[3]。因此，若能早期評估急性胰腺炎患者的預(yù)后情況，控制病情進(jìn)展，對于降低病死率具有重要意義。目前，臨床上應(yīng)用于評估急性胰腺炎患者預(yù)后的方法主要包括急性生理學(xué)及慢性健康狀況評分系統(tǒng)(APACHE Ⅱ)、Ranson評分、急性胰腺炎嚴(yán)重程度床邊指數(shù)等，但上述方法的計(jì)算過程較為繁瑣[4-6]。朱宗文等[7]應(yīng)用尿素氮及血肌酐預(yù)測急性胰腺炎患者的預(yù)后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者預(yù)測的敏感度均較低，臨床價(jià)值有限。因此，尋找一種簡便、準(zhǔn)確的生物學(xué)指標(biāo)預(yù)測急性胰腺炎患者的預(yù)后顯得十分重要。急性胰腺炎的發(fā)病機(jī)制尚未完全清楚，腺泡細(xì)胞內(nèi)胰蛋白酶原的激活目前被認(rèn)為是急性胰腺炎的始動因素[8]。有研究指出，自噬可通過自噬溶酶體內(nèi)的相關(guān)組織蛋白酶促進(jìn)胰蛋白酶原激活，進(jìn)而參與急性胰腺炎的疾病進(jìn)展[9]。miR-148a已被證實(shí)可通過Hedgehog信號通路調(diào)節(jié)自噬過程[10]，而自噬與急性胰腺炎的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，由此推測，miR-148a可能與急性胰腺炎存在聯(lián)系。目前關(guān)于miR-148a與急性胰腺炎患者預(yù)后關(guān)系的報(bào)道較少，本文對此展開研究，以期為臨床預(yù)測急性胰腺炎患者的預(yù)后提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年9月至2018年9月在首都醫(yī)科大學(xué)大興教學(xué)醫(yī)院、首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院、首都醫(yī)科大學(xué)附屬復(fù)興醫(yī)院接受治療的167例急性胰腺炎患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《急性胰腺炎診治指南(2014版)》[11]中急性胰腺炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)發(fā)病24 h內(nèi)入院；(3)入院前未接受鎮(zhèn)痛、抗菌等對癥治療；(4)患者及家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并免疫系統(tǒng)疾病；(2)合并惡性腫瘤；(3)輕癥急性胰腺炎；(4)妊娠期及哺乳期婦女；(5)隨訪失聯(lián)者。167例急性胰腺炎患者中男性79例，女性88例，年齡為38～67歲，平均年齡(47.97±9.72)歲。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 臨床資料收集

收集患者的年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、高血壓史、糖尿病史、高脂血癥史、吸煙史、飲酒史、發(fā)病至入院時(shí)間、病因、ICU住院天數(shù)、磁共振嚴(yán)重度指數(shù)(MRSI)等資料。根據(jù)患者的MRI表現(xiàn)進(jìn)行MRSI評分。炎性反應(yīng)程度：正常胰腺記0分，局限或彌漫性腫大記1分，胰腺或胰周脂肪內(nèi)條片狀異常信號記2分，界限不清的積液記3分，有2個(gè)及以上界限不清的積液或積氣記4分。壞死程度：無壞死記0分，壞死<30%記2分，30%～50%記4分，壞死>50%記6分。炎性反應(yīng)程度、壞死程度兩項(xiàng)評分相加為MRSI評分，0～3分為輕度，4～6分為中度，7～10分為重度。

采集患者入院24 h內(nèi)空腹外周靜脈血5 mL，4 ℃下4 000 r/min離心15 min，分離上層血清。采用免疫比濁法檢測血清C反應(yīng)蛋白(CRP)水平，試劑盒購自浙江世紀(jì)康大醫(yī)療科技股份有限公司。采用速率法檢測血清中脂肪酶、淀粉酶水平，試劑盒均購自上海銘博生物科技有限公司。采用復(fù)診及電話隨訪等方式了解患者確診后28 d內(nèi)的預(yù)后情況，隨訪終點(diǎn)為死亡。

1.3 miR-148a相對表達(dá)量測定

采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測血清miR-148a的相對表達(dá)量。抽取患者入組后空腹靜脈血10 mL，4 ℃下4 000 r/min離心15 min，分離上層血清，置于-20 ℃冰箱待測。采用TRIzol試劑法提取血清中的總RNA，將2 μg的總RNA添加至20 μL反應(yīng)液中，采用Prime Script逆轉(zhuǎn)錄酶反向轉(zhuǎn)錄合成cDNA，隨后PCR擴(kuò)增。反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性5 min；之后94 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s退火，72 ℃ 30 s，共45個(gè)循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt表示血清miR-148a的相對表達(dá)量。引物序列見表1。

表1 引物序列

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組基本資料的比較

167例急性胰腺炎患者的28 d生存率為78.44%(131/167)，病死率為21.56%(36/167)。死亡組(36例)與生存組(131例)在年齡、性別、BMI、高血壓、糖尿病、高脂血癥、吸煙、飲酒、病因、ICU住院天數(shù)方面比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。相較于生存組，死亡組的發(fā)病至入院時(shí)間較長，MRSI評分較高，CRP、淀粉酶、脂肪酶水平較高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。見表2。

表2 兩組基本資料的比較

2.2 兩組患者血清miR-148a的相對表達(dá)量比較

死亡組患者血清miR-148a的相對表達(dá)量為0.72±0.17，低于生存組(1.03±0.24)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.258，P<0.001)。

2.3 影響急性胰腺炎患者預(yù)后的相關(guān)因素

將發(fā)病至入院時(shí)間、MRSI評分、CRP、淀粉酶、脂肪酶、miR-148a作為自變量，α入=0.05，α出=0.10，將急性胰腺炎患者的預(yù)后(生存=0，死亡=1)作為因變量納入多因素Logistic回歸模型，結(jié)果顯示發(fā)病至入院時(shí)間、MRSI評分及miR-148a與急性胰腺炎患者的預(yù)后密切相關(guān)。見表3。

表3 影響急性胰腺炎患者預(yù)后因素的Logistic回歸分析

2.4 miR-148a、模型A及模型B預(yù)測急性胰腺炎患者預(yù)后的效能

采用二元Logistic回歸分析構(gòu)建由發(fā)病至入院時(shí)間、MRSI評分組成的預(yù)測急性胰腺炎患者預(yù)后的模型(模型A)：F=-14.230+0.171×發(fā)病至入院時(shí)間+1.214×MRSI評分；構(gòu)建由發(fā)病至入院時(shí)間、MRSI評分、miR-148a組成的預(yù)測急性胰腺炎患者預(yù)后的模型(模型B)：F=-18.685+0.161×發(fā)病至入院時(shí)間+1.360×MRSI評分+2.639×miR-148a。miR-148a與模型A預(yù)測急性胰腺炎患者預(yù)后的ROC曲線下面積(AUC)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=1.587，P=0.113)，而模型B預(yù)測急性胰腺炎患者預(yù)后的AUC高于miR-148a及模型A(Z=3.690，P<0.001；Z=4.122，P<0.001)。見表4、圖1。

表4 miR-148a、模型A及模型B預(yù)測急性胰腺炎患者預(yù)后的效能

圖1 miR-148a、模型A及模型B預(yù)測急性胰腺炎患者預(yù)后的ROC曲線

3 討論

miR-148a是miR-148/152家族成員之一，位于人染色體7p15.2，其在細(xì)胞增殖、分化及腫瘤發(fā)生過程中發(fā)揮著重要作用[12]。有研究表明，miR-148a在機(jī)體發(fā)育過程中可參與調(diào)節(jié)心肌細(xì)胞分化[13]。翟文君等[14]研究顯示，miR-148a可通過抑制蛋白激酶B(AKT)信號通路，從而抑制小鼠胰腺祖細(xì)胞的分化、增殖過程。另有報(bào)道指出，miR-148a可通過調(diào)節(jié)白細(xì)胞介素-6/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白3信號通路，參與急性胰腺炎的發(fā)生、發(fā)展過程[15]。但目前關(guān)于miR-148a與急性胰腺炎患者預(yù)后關(guān)系的報(bào)道較少。

張東等[16]對63例急性胰腺炎患者進(jìn)行隨訪觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)患者28 d的病死率為20.6%。本研究結(jié)果顯示，患者28 d的病死率為21.56%，與既往報(bào)道相近。本研究發(fā)現(xiàn)，死亡組患者血清miR-148a的相對表達(dá)量低于生存組，提示miR-148a可能與急性胰腺炎患者的預(yù)后存在聯(lián)系。為進(jìn)一步明確兩者之間的關(guān)系，本研究采用多因素Logistic回歸方法進(jìn)行分析，結(jié)果顯示發(fā)病至入院時(shí)間、MRSI評分及miR-148a與急性胰腺炎患者的預(yù)后密切相關(guān)。有研究表明，自噬與急性胰腺炎的病理生理過程密切相關(guān)[9]。正常情況下，自噬可通過抑制炎性小體的表達(dá)而抑制炎性反應(yīng)；在炎性疾病中，炎性小體能夠增加腺泡細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力引起高鈣血癥，通過誘導(dǎo)自噬促進(jìn)胰蛋白酶原激活，降低胰腺腺泡細(xì)胞活力，誘導(dǎo)急性胰腺炎的發(fā)生[17]。此外，自噬可激活核因子-κB(NF-κB)信號通路，促使機(jī)體釋放炎性趨化因子及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，而TNF-α可誘導(dǎo)胰蛋白酶原過早激活及腺泡細(xì)胞壞死，且激活的胰蛋白酶原可進(jìn)一步激活NF-κB信號通路，形成惡性循環(huán)，加重急性胰腺炎的病情[18]。由于miR-148a可促進(jìn)自噬發(fā)生[10]，推測miR-148a可能通過自噬過程參與了急性胰腺炎的疾病進(jìn)展。本研究中ROC曲線分析結(jié)果顯示，模型B預(yù)測急性胰腺炎患者預(yù)后的效能高于miR-148a及模型A，表明納入miR-148a指標(biāo)更有利于準(zhǔn)確評估患者的預(yù)后情況。

綜上所述，miR-148a與急性胰腺炎的預(yù)后關(guān)系密切，檢測miR-148a表達(dá)水平有助于評估患者的預(yù)后情況。本研究存在一定不足，比如未能動態(tài)監(jiān)測miR-148a的表達(dá)情況，之后將進(jìn)一步分析miR-148a影響急性胰腺炎患者預(yù)后的病理生理機(jī)制。