骨髓間充質干細胞穴位移植對癡呆大鼠內源性神經干細胞增殖分化的影響

李容念 ，趙文博 ，趙平 ，朱偉 ，郭建軍 ，席家祥 ，趙瑞成

(1.湖南中醫藥大學，長沙 410208;2.湖南省中醫藥研究院，長沙 410006;3.河北省尚義縣醫院，張家口 076750)

內源性神經干細胞(neural stem cells， NSCs)在成人腦組織中主要分布于側腦室下層(SVZ)和海馬齒狀回兩處[1]，具有干細胞多分化潛能的生物學特性，可通過定向誘導增殖分化為某種特異神經元以替代損傷神經元，有效治療中樞神經系統退行性疾病[2-3]，故促進內源性 NSC增殖與分化有望成為阿爾茨海默病(Alzheimer's disease， AD)治療的新途徑。本研究擬通過外周少量骨髓間充質干細胞(bone marrow mesenchymal stem cells， BMSC)，利用腧穴激發作用和經絡的循經作用，誘導癡呆大鼠腦內內源性NSC增殖、分化，探討治療AD的新技術與方法。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

8周齡SPF級SD大鼠50只，體質量(210±20)g，由廣州永諾生物技術有限公司提供，許可證號 SCXK(粵)2013-0034。實驗大鼠在自由飲食、溫度 21℃～27℃、正常環境下飼養 1周后開始實驗，實驗過程遵循湖南中醫藥大學實驗動物倫理規范。

1.2 主要試劑和儀器

Aβ1-42(A118755，阿 拉 丁 );Nestin 抗 體(SC- 23927，Santa cruz);β-Tubulin-Ⅲ(BM3880，博士德生物科技有限公司);MS二抗IgG(Ab150106，Abcam);Rb二抗IgG(AB150074， Abcam);Hoechst 33258(H1399， Invitrogen);SD 大鼠骨髓BMSC細胞(SCSP-402，上海細胞庫);雙臂腦立體定位儀(SA-Ⅱ，廣州必特生物科技有限公司);高速顱骨鉆(JC100A，Saeshin);水迷宮(廣州必特生物科技有限公司);全自動正立熒光顯微鏡(德國CARL ZEISS)。

1.3 模型制備

從50只大鼠中按照隨機數字表法抽取10只大鼠作為對照組，剩余 40只大鼠采用Aβ1-42寡聚體側腦室灌注建立大鼠AD模型[4]。以4%水合氯醛按8 μL/g的劑量腹腔麻醉，動物麻醉后固定于腦立體定位儀上。參考Paxinos和Watson大鼠腦立體定位圖譜，以前囟平面為參考平面，按……