類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者血清中IL-35、VitD、IL-33及其受體ST2表達水平及臨床意義

郭燕妳　劉小君　許海濤

【摘要】 目的：了解類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）患者血清中白細胞介素-35（IL-35）、25-羥基維生素D3[25-（OH）VitD3]、IL-33及其受體ST2（ST2）表達水平，并探討其臨床意義，為RA的診斷提供參考依據(jù)。方法：選擇2017年3月-2019年4月來醫(yī)院風(fēng)濕科門診或住院部就診并確診為RA患者129例為RA組，同期來醫(yī)院體檢的健康人群100名為HC組，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測血清中IL-35、IL-33及ST2水平，采用化學(xué)反光分析儀檢測25-（OH）VitD3水平，并對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析。結(jié)果：RA組患者IL-35和25-（OH）VitD3水平分別為（23.80±10.97）pg/ml和（34.68±6.63）nmol/L，明顯低于HC組的（91.54±22.52）pg/ml和（62.91±13.75）nmol/L，而IL-33和ST2水平分別為（29.56±3.83）pg/ml和（18.32±3.49）ng/ml，明顯高于HC組的（6.37±0.91）pg/ml和（7.05±0.74）ng/ml，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）;IL-35和25-（OH）VitD3水平隨著RA患者病情嚴(yán)重程度的加重而降低，而IL-33和ST2水平隨著RA患者病情嚴(yán)重程度的加重而升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）;RA男性患者25-（OH）VitD3水平為（45.79±8.36）nmol/L，明顯高于女性患者的（31.01±6.27）nmol/L，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），而IL-35、IL-33及ST2水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;經(jīng)Pearson相關(guān)分析，IL-35與25-（OH）VitD3水平呈明顯正相關(guān)（P<0.05），與IL-33和ST2水平呈明顯負相關(guān)（P<0.05），而IL-33與ST2水平呈明顯正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論：RA患者IL-35和25-（OH）VitD3水平明顯降低，而IL-33和ST2水平明顯升高，且與病情密切相關(guān)。因此，加強IL-35、25-（OH）VitD3、IL-33及ST2水平監(jiān)測，對RA患者的診斷及病情判斷具有一定的參考價值。

【關(guān)鍵詞】 白細胞介素-35 25-羥基維生素D3 白細胞介素-33 可溶性生長刺激表達基因2 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.21.002 文獻標(biāo)識碼 A 文章編號 1674-6805（2020）21-000-04

Expression Levels of IL-35， VitD， IL-33 and Its Receptor ST2 in Serum of Rheumatoid Arthritis Patients and Their Clinical Significance/GUO Yanni， LIU Xiaojun， XU Haitao. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（21）： -7

[Abstract] Objective： To investigate the expression levels of interleukin-35 （IL-35）， 25-hydroxyvitamin D3[25-（OH） VitD3]， IL-33 and its receptor ST2 （ST2） in serum of patients with rheumatoid arthritis （RA）， and to explore its clinical significance， so as to provide reference for the diagnosis of RA. Method： From March 2017 to April 2019， 129 patients who visited the outpatient department or inpatient department of the rheumatology department of the hospital and were diagnosed as RA patients were selected as RA group， at the same time 100 healthy people for physical examination were selected as HC group， by using enzyme-linked immunosorbent （ELISA） to detect the serum level of IL-35， IL-33 and ST2， using chemical reflective analyzer test 25-（OH） VitD3 level， and the testing results were analyzed. Result： The levels of IL-35 and 25-（OH） VitD3 in the RA group were （23.80±10.97） pg/ml and （34.68±6.63） nmol/L， respectively， which were significantly lower than （91.54±22.52） pg/ml and （62.91±13.75） nmol/L in the HC group， while the levels of IL-33 and ST2 were （29.56±3.83） pg/ml and （18.32±3.49） ng/ml， respectively， which were significantly higher than （6.37±0.91） pg/ml and （7.05±0.74） ng/ml in the HC group， the differences were statistically significant （P<0.05）. The levels of IL-35 and 25-（OH） VitD3 decreased with the aggravation of disease severity in RA patients， while the levels of IL-33 and ST2 increased with the aggravation of disease severity in RA patients， the differences were statistically significant （P<0.001）. The level of 25-（OH） VitD3 in male patients with RA was （45.79±8.36） nmol/L， significantly higher than （31.01±6.27） nmol/L in female patients， the differences were statistically significant（P<0.05）， but the difference of IL-35， IL-33 and ST2 levels was not statistically significant （P>0.05）. Pearson correlation analysis showed that IL-35 was positively correlated with 25-（OH） VitD3 （P<0.05）， negatively correlated with IL-33 and ST2 （P<0.05）， and positively correlated with il-33 and ST2 （P<0.05）. Conclusion： In patients with RA， the levels of IL-35 and 25-（OH） VitD3 were significantly decreased， while the levels of IL33 and ST2 were significantly increased， which were closely related to the disease. Therefore， strengthening the monitoring of IL-35， 25-（OH） VitD3， IL-33 and ST2 levels has certain reference value for the diagnosis and condition judgment of RA patients.

[Key words] Interleukin-35 25-hydroxyvitamin D3 Interleukin-33 Soluble growth stimulation expression gene 2 Rheumatoid arthritis

First-authors address： Shenzhen Hospital （guangming）， University of Chinese Academy of Sciences， Shenzhen 518106， China

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是以關(guān)節(jié)滑膜炎為主要特征、臨床上常見的一種自身免疫性關(guān)節(jié)性疾病，其發(fā)病機制目前尚未完全明確[1-2]。有研究表明，RA發(fā)病可能與成纖維樣滑膜細胞異常增生及多種炎性細胞因子浸潤導(dǎo)致軟骨和骨質(zhì)破壞有關(guān)[3]。其中IL-35是調(diào)節(jié)性T細胞發(fā)揮最大抑制效應(yīng)的一種抑炎因子，參與多種免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展[4-5]。維生素D（VitD）主要功能是維持體內(nèi)鈣、磷平衡，但最近研究發(fā)現(xiàn)，其在調(diào)節(jié)機體免疫、抑制炎癥反應(yīng)方面也起著重要作用[6-7]。IL-33是一種前炎性因子，當(dāng)機體受到刺激時，IL-33與及其受體ST2結(jié)合，募集下游炎性因子，通過相應(yīng)免疫通路參與炎癥、自身免疫性及心血管疾病發(fā)生和發(fā)展[8-10]。為此，本研究旨在通過對RA患者和健康人群IL-35、25-（OH）VitD3、IL-33及ST2水平進行對比分析，了解其在RA患者中的變化情況，并探討其臨床意義，為RA早發(fā)現(xiàn)、早診斷及病情嚴(yán)重程度的判斷提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年3月-2019年4月來中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院（光明）風(fēng)濕科門診或住院部就診并確診為RA患者129例。（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均符合2010年美國風(fēng)濕學(xué)會聯(lián)合歐洲抗風(fēng)濕聯(lián)盟修訂的RA分類標(biāo)準(zhǔn)，并根據(jù)RA疾病活動度評分DSA28對患者的病情嚴(yán)重程度進行分期[11]，其中輕度活動組47例（DSA28<3.2），中度活動組52例（3.25.1）;②心、肝及腎功能等重要臟器功能均正常。（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①自身免疫性疾病;②骨與關(guān)節(jié)相關(guān)性疾病;③精神病及嚴(yán)重器質(zhì)性疾病;④懷孕及哺乳期婦女;⑤風(fēng)濕、類風(fēng)濕家族史;⑥冠心病、高血壓、腦血管及糖尿病。其中男32例，女97例，年齡33～79歲，平均（52.26±12.08）歲。同期來醫(yī)院體檢的健康者100例，其中男26例，女74例，年齡31～76歲，平均（51.02±11.63）歲。確保兩組的性別、年齡等一般性資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。所有研究均知情并簽訂知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 所有研究對象均于清晨采用一次性采血針抽取空腹靜脈血3～5 ml 2份，室溫靜置30 min后離心10 min（2 000 r/min）分離血清，于當(dāng)日內(nèi)完成所有項目檢測，不能及時檢測的血清標(biāo)本置于-20 ℃保存，檢測時取出復(fù)溶后于室溫靜置30 min混勻后才進行檢測。

1.2.2 IL-35、25-（OH）VitD3、IL-33及ST2水平檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附雙抗體夾心法（ELISA）對IL-35、IL-33及ST2水平進行檢測，檢測前對相關(guān)儀器進行保養(yǎng)和校正，并于試驗中設(shè)有空白、陰性、陽性及質(zhì)控孔，待上述所有孔的OD值均在范圍內(nèi)才對研究對象結(jié)果進行判讀，否則要重新進行試驗;同時采用化學(xué)發(fā)光分析儀對25-（OH）VitD3水平進行檢測。所有所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒、儀器說明書及科室SOP操作規(guī)程進行，由相同的專業(yè)人員進行成批檢測，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可比性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

采用GraphPad Prism 5統(tǒng)計軟件對所測數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料以（x±s）表示，采用t檢驗，多組間計量資料比較采用單因素方差分析，計數(shù)資料以率（%）表示，采用字2檢驗，采用Pearson 相關(guān)分析分析相關(guān)性，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組IL-35、25-（OH）VitD3、IL-33及ST2水平比較

RA組患者血清中IL-35和25-（OH）VitD3水平明顯低于HC組，而IL-33和ST2水平明顯高于HC組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 不同病情嚴(yán)重程度RA患者IL-35、25-（OH）VitD3、IL-33及ST2水平比較

IL-35和25-（OH）VitD3水平隨著RA患者病情嚴(yán)重程度的加重而降低，而IL-33和ST2水平隨著RA患者病情嚴(yán)重程度的加重而升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001），見表2。

2.3 不同性別RA患者IL-35、25-（OH）VitD3、IL-33及ST2水平比較

男性RA患者血清中25-（OH）VitD3水平明顯高于女性患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），而IL-35、IL-33及ST2水平之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表3。

2.4 相關(guān)性分析

經(jīng)Pearson相關(guān)分析，血清中IL-35與25-（OH）VitD3水平呈明顯正相關(guān)（r=0.701 2，P<0.05），與IL-33和ST2水平呈明顯負相關(guān)（r=-0.718 3，-0.627 6，P<0.05），而IL-33和ST2水平呈明顯正相關(guān)（r=0.812 4，P<0.05）。

3 討論

RA是一種以慢性、侵蝕性關(guān)節(jié)炎為主要特征的全身性自身免疫性疾病，是臨床上較為常見的一種關(guān)節(jié)性疾病，全球發(fā)病率為0.5%～1.0%，我國約為0.42%，近年來有呈上升趨勢[12-13]。其主要病理改變?yōu)槁曰ぱ住⒀荇栊纬杉瓣P(guān)節(jié)軟骨和骨破壞，導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形，甚至功能喪失，致殘率較高，是導(dǎo)致勞動力喪失和致殘的主要原因之一，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量[14-15]。因此，RA早期診斷尤為關(guān)鍵，但RA臨床癥狀不典型，表現(xiàn)多元化，且病因尚未完全明確，給診斷工作造成極大困難。為此，尋找新的診斷指村或多項指標(biāo)優(yōu)化聯(lián)合檢測，對RA早期診斷、治療及病情嚴(yán)重程度判斷具有重要的意義。

[11]中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病學(xué)分會.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷及治療指南[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2010，14（4）：265.

[12]常曉天，鄭亞冰.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎瓜氨酸化反應(yīng)研究的最新進展[J].中國免疫學(xué)雜志，2016，32（2）：279-283.

[13] Smolen J S，Aletaha D，Mclnnes I B.Rheumatoid arthritis[J].Lancet，2016，388（10055）：2023-2038.

[14]代巧妹，梁慧，云雨，等.中藥單體抗實驗性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜血管生成作用研究進展[J].中醫(yī)藥學(xué)報，2016，44（5）：87-89.

[15]李智偉，田永芳，盧佩佩，等.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者淋巴細胞和Treg/Th17平衡的檢測及意義[J].國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2019，40（16）：2026-2028.

[16]梁小芳，楊名，和義敏，等.IL-35的生物學(xué)特性及其在自身免疫性疾病治療中的新進展[J].華中科技大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2019，48（4）：477-481.

[17]孟博，謝而付，周春剛.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清IL-35的水平及其與疾病活動度的關(guān)系[J].臨床檢驗雜志，2016，34（4）：277-280.

[18] Gheita T A，Sayed S，Gheita H A，et al.Vitamin D status in rheumatoid arthritis patients：relation to clinical manifestations，disease activity，quality of life and fibromyalgia syndrome[J].Int J Rheum Dis，2016，19（3）：294-299.

[19]潘冠和，馬勝，廖雁玲，等.25-羥維生素D水平變化與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)性研究[J].吉林醫(yī)學(xué)，2018，39（1）：89-91.

[20] Quintana-Duque M A，Caminos J E，Varela-Narino A，et al.The role of 25-Hydroxyvitamin D as a predictor of clinical and radio-logieal outcomes in early onset rheumatoid arthritis[J].J Clin Rheumatol，2017，23（1）：33-39.

[21]侯西華，包宇實.白細胞介素-33及其受體ST2L通路與疾病相關(guān)性研究進展[J].中華實用診斷與治療雜志，2017，31（6）：616-618.

[22]盧靜，趙立峰，凌海瑞，等.白介素-33及其受體ST2在肝病領(lǐng)域中的研究進展[J].右江醫(yī)學(xué)，2019，47（9）：714-717.

[23]徐輝，陳永平.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者RANK、RANKL、caspase-1、IL-18、IL-33及BAFF-R水平表達情況[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)版，2017，14（2）：100-103.

（收稿日期：2020-03-10） （本文編輯：張亮亮）