組織懸液HER-2陽性標本在免疫組化室內質控中作為陽性對照的作用和價值

羅勝 宋彥錕

【摘要】 目的：探討免疫組化室內質控中應用組織懸液作為HER-2（人表皮生長因子受體-2）陽性對照的效果，為建立更好的HER-2免疫組化室內質控提供參考。方法：擇取2018年1月-2019年12月筆者所在醫院的37例HER-2（3+）的胃癌根治標本，包埋成石蠟塊連續切片，行免疫組化染色，另取切片攪碎后制成組織懸液，分別進行免疫組化染色和常規HE染色，于試驗后4、12周時，復行免疫組化染色，比較觀察染色定位及強度情況。結果：組織懸液標本HE染色鏡下觀察均可見異形癌細胞，多數平鋪，輪廓清晰。免疫組化染色的胃癌組織懸液標本，HER-2表達均見于細胞膜，染色強度均為強陽性（3+），同石蠟切片定性定位與染色均相符。試驗后4、12周復行免疫組化，HER-2染色定位與強度同前無明顯改變。結論：組織懸液癌細胞HER-2陽性定位明確，染色強度準確，質量穩定易判讀，能夠保障染色過程可靠，可以作為免疫組化室內質控，為HER-2染色提供陽性參考。

【關鍵詞】免疫組化 室內質控 組織懸液 HER-2 陽性對照

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2020.19.023 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2020）19-00-03

Role and Value of HER-2 Positive Specimens in Tissue Suspensions as Positive Controls in the Quality Control of Immunohistochemical Laboratory/LUO Sheng， SONG Yankun. //Chinese and Foreign Medical Research， 2020， 18（19）： -61

[Abstract] Objective： To investigate the effect of using tissue suspension as a positive control of HER-2 （human epidermal growth factor receptor-2） in the quality control of indoor immunohistochemistry， and provide a reference for establishing a better quality control of HER-2 immunohistochemistry indoor. Method： From January 2018 to December 2019， 37 radical specimens of HER-2 （3+） gastric cancer in our hospital were selected and embedded into paraffin sections for immunohistochemical staining， and then the sections were broken to make tissue suspension. Immunohistochemical staining and routine HE staining were carried out respectively. At 4 and 12 weeks after the test， immunohistochemical staining was carried out again to observe the location and intensity of staining. Result： The heteromorphic cancer cells were observed under HE staining microscope， most of them were flat and clear. The expression of HER-2 was found in the cell membrane of gastric cancer tissue with immunohistochemical staining， and the staining intensity was strong positive （3+）， which was consistent with the qualitative localization and staining of paraffin section. After 4 and 12 weeks of the experiment， immunohistochemistry was carried out again， and the location and intensity of HER-2 staining were the same as before. Conclusion： HER-2 positive localization of cancer cells in tissue suspension is clear， the staining intensity is accurate， the quality is stable and easy to read， which can guarantee the reliable staining process， and can be used as the indoor quality control of immunohistochemistry， providing positive reference for HER-2 staining.

[Key words] Immunohistochemistry Indoor quality control Tissue suspension HER-2 Positive control

First-authors address： The First Affiliated Hospital of Fujian Medical University， Fuzhou 350005， China

人表皮生長因子受體-2（HER-2），表皮生長因子受體（FEFR）家族成員，是一種原癌基因，于細胞表面表達，可以通過參與信號通道通路活動影響細胞增殖與分化[1]。其癌基因及蛋白產物P185在乳腺癌、胃癌、直腸癌、卵巢癌等多種腫瘤中存在過度表達和擴增，是誘導細胞惡性轉化的促發因素，與惡性腫瘤發生進展密切相關，是臨床治療監測的重要預后指標，近年隨著分子生物學研究的深入及靶向治療的突破進展，也成為靶向治療藥物選擇的重要靶點。有統計數據顯示，約30%的乳腺癌患者HER-2擴增/過度表達，其腫瘤侵襲性強，患者預后相對較差[2]。對于HER-2蛋白表達的檢測，免疫組化是公認可靠且常用的方法，但受機械故障、人為誤差、抗體商品種類繁多等因素影響，檢測仍存在假陰性風險，影響結果準確性，不利于臨床治療，因此，檢測有必要設立陰性與陽性對照，加強免疫組化質量控制，保證質量監測持續性[3]。為探究更為簡便可靠的質控方法，文章現擇取胃癌根治標本展開調研，擬采用組織懸液作為HER-2陽性對照，探究可行性，以期為建立更好的HER-2免疫組化室內質控提供參考，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

擇取筆者所在醫院病理科2018年1月-2019年12月的37例胃癌標本為研究對象。納入標準：胃癌根治術切除樣本，以10%中性緩沖福爾馬林固定;免疫組化檢測樣本腫瘤組織，HER-2強陽性表達（3+）;病理樣本對應患者對本研究知情同意。排除標準：HER-2表達明顯異質性。檢測試劑與儀器：DAKO公司Envision檢測系統及配套試劑兔抗人HER-2單克隆抗體。

1.2 方法

選擇腫瘤組織豐富區域的標本，制成10 mm×5 mm×5 mm組織塊，酒精梯度脫水，浸蠟包埋后備用。切片機設6 μm層厚，連續切片50張，置于離心管中，另滴加二甲苯溶液6 ml，以玻璃攪拌棒輕攪至切片粉碎，石蠟溶解，上機離心2 min，離心速率4 000 r/min，半徑10 cm，取底部沉淀，同法加入二甲苯溶液，攪拌后離心，重復過程3次。然后加無水乙醇溶液6 ml，同法重復離心3次取底部沉淀，以充分洗脫二甲苯。最后按1∶30的配比向底部沉淀中滴加無水乙醇制成懸液，置于4 ℃低溫保存備用，組織懸液制備完成。取兩張防脫載玻片，吸取預先搖勻的懸液，分別各滴2 μl，60 ℃烘烤2 min后，其中一份樣本常規HE染色，一份免疫組化染色。另取石蠟塊切片染色，比較觀察兩種樣本的染色定位及強度情況。于試驗后4、12周時，復行組織懸液HER-2免疫組化染色，對比之前的陽性定位及強度情況。

2 結果

鏡下觀察HE染色的37份胃癌組織懸液標本，均可見異形癌細胞。其中，35例癌細胞多數平鋪，輪廓清晰，2例樣本發現細胞重疊較多，適當加大組織保存液比例，復行HE染色，鏡下觀察細胞顯像良好，見圖1。行免疫組化染色的37份胃癌組織懸液標本，HER-2表達均見于細胞膜，同胃癌石蠟切片標本染色定位一致，染色強度均為強陽性（3+），同石蠟切片標本也相符，見圖2。試驗后4、12周復行免疫組化，HER-2染色定位與強度同前無明顯改變，見圖3。

3 討論

臨床對于HER-2基因的研究既往主要集中在乳腺癌，病理作用也較為明確，被視為判斷乳腺癌預后的獨立指標[4]。但近年研究發現，HER-2在胃癌、卵巢癌、膀胱癌、食管癌、腸癌等惡性腫瘤中也存在陽性表達，除了能夠反映病程進展及預后，也提示多耐藥可能，對臨床用藥具有指導意義[5]。有研究顯示，胃癌患者HER-2過表達占比10%～45%，陽性表達者對術后輔助化療的敏感性欠佳，遠期生存情況不及陰性患者理想，因此，準確檢測胃癌患者HER-2狀態，對指導臨床治療及預后評估具有重要意義[6]。

免疫組化是利用抗原抗體反應，通過化學反應顯色標記抗體來定位、定量、定性組織細胞內抗原的檢測技術，是臨床公認的檢測HER-2的有效手段[7]。但為了確保HER-2免疫組化檢測結果準確可靠，加強質量控制、盡可能避免誤差仍十分必要。根據相關檢測指南與專家共識，HER-2免疫組化染色必須設立對照，陽性對照推薦不同染色強度組織芯片，陰性對照推薦癌旁正常上皮組織[8]。為獲得精準染色對照，提高檢測結果準確性，國外臨床多使用組織芯片，或采用羊膜卷對照，也有關于手工制作多組織“香腸”塊的報道[9]。不過，多組織芯片制作技術要求高，工藝煩瑣，而商品化質控品價格較高，以此替代耗材成本大，又難于普及，臨床應用存在局限[10]。

從國內來看，單組織蠟塊對照仍是目前臨床最主要使用的對照方法，但是此法需要消耗大量組織樣本，而且在HER-2檢測需求增加背景下，頻繁為待檢樣本切取對照不僅耗時耗力，亦難于質量控制[11]。為簡化質控流程，提高可操作性，國內曾有學者嘗試在HER-2免疫組化中應用勻漿液[12]，本次臨床研究亦基于此目的展開組織懸液制備研究，結果顯示胃癌組織懸液標本HE染色鏡下觀察均可見異形癌細胞，清晰度理想，免疫組化染色均可于細胞膜見HER-2陽性表達，染色定位及染色強度同胃癌石蠟切片標本一致，數周后復檢，HER-2染色定位與強度同前無明顯改變，保存時間長久，提示染色定位與強度準確且質量穩定。另外，組織懸液的制備方法相對簡單，滴加對照快捷，可以節省對照所用時間和人力，同時滿足多組織于一張玻片進行對照檢測的需要，更易于強化對切片的質控效果，而且制作一次組織懸液可以滿足較長時間的檢測需求，所用樣本量少，不會過度損耗存檔樣本。

不過值得注意的是，組織懸液HER-2免疫組化后，有時鏡下可見染色陽性減弱甚至呈陰性，可能與染色過程中的某些因素有關，為保證結果準確性，需重新檢測并另加陽性石蠟組織對照。實際操作中，防脫載玻片滴加懸液組織后，通過酒精揮發與烘烤，可以獲得牢固的黏附效果，亦不會污染待檢樣本。而為了盡可能避免組織污染，考慮儀器染色沖洗自玻片頭端向末，對照添加于玻片末端右下，可以防止對樣本的干擾。

綜上，組織懸液制備簡單，滴加對照易操作，癌細胞HER-2陽性定位明確，染色強度準確，質量穩定易判讀，能夠保障染色過程可靠，可以作為免疫組化室內質控，加以推廣使用，為HER-2染色提供陽性參考。

參考文獻

[1]陳敏，劉鍵平，龍曉雨，等.全自動免疫組化和熒光原位雜交方法檢測胃癌HER2狀態[J].西部醫學，2017，29（7）：902-907.

[2]董志成，劉凌翔.血清AFP陽性胃癌中HER2和RRM1的表達及其意義[J].東南大學學報：醫學版，2019，38（5）：799-805.

[3]鄒治銘，張柳，龔平，等.PDCA循環在Her-2免疫組化室間質控中的應用[J].診斷病理學雜志，2018，25（3）：231-232.

[4]李萌，于傳飛，王文波，等.抗體偶聯藥物抗HER2單抗-MCC-DM1質控方法的建立[J].藥物分析雜志，2016，36（1）：22-30.

[5]吳景，何杰.組織懸液HER2陽性標本在免疫組化室內質控中作為陽性對照的作用和價值[J].中山大學學報：醫學科學版，2019，40（5）：683-688.

[6]王文義，王桂芝，張明智.熒光原位分子雜交技術檢測乳腺癌組織中HER-2基因的表達[J].醫藥論壇雜志，2011，32（13）：60-62.

[7]詹琦，周晟，婁麗萍.EGFR，HER2和HER3在膽管癌中的表達及預后價值[J].實用腫瘤學雜志，2019，33（6）：491-496.

[8]郭寶琴，劉蓉，吳黨潔.超順磁氧化鐵納米微粒在HER-2陽性乳腺癌模型MRI和熒光成像中的應用[J].臨床和實驗醫學雜志，2019，18（22）：2359-2362.

[9]張宇帆，劉建井，李小鳳，等.18F-FDG PET傳統參數與影像組學特征在免疫組織化學難以明確HER2表達乳腺癌中的價值[J].中華核醫學與分子影像雜志，2019，39（11）：641-646.

[10]張丹丹，華佳，莊治國，等.MRI參數聯合免疫組化對HER-2陽性乳腺癌新輔助化療療效的評估價值[J].實用放射學雜志，2019，35（11）：1754-1758.

[11]蔣依娜，王博，周燦，等.568例HER2不確定乳腺癌原位雜交結果分析[J].腫瘤防治研究，2019，46（7）：605-609.

[12]武莎斐，劉媛媛，劉笑玎，等.HER2免疫組織化學1+浸潤性乳腺癌的基因擴增狀態和mRNA表達分析[J].中華病理學雜志，2018，47（7）：522-526.

（收稿日期：2020-02-24） （本文編輯：馬竹君）