IL-23在念珠菌性陰道炎發(fā)病中的作用分析

孫昌潔 高愛莉 代歆悅 王煥麗

臨床RVVC患者最常見的致病菌有白念珠菌,RVVC的主要發(fā)病機制是宿主的防御和毒力因素［1］。研究發(fā)現(xiàn),RVVC的發(fā)病因素有Nrf2信號通路參與。亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子家族的成員之一是Nrf2,在與上游抗氧化順式轉(zhuǎn)錄調(diào)控元件(ARE)相結(jié)合后從而誘導抗氧化酶的基因轉(zhuǎn)錄及F游的Ⅱ相解毒酶。通過多機制,Nrf2信號通路可啟動機體的適應(yīng)性免疫和固有免疫,以對念珠菌抑制,防止其感染。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2016年12月～2018年12月來本所門診就診的105例性活躍期婦女VVC患者作為觀察組,選取同期60例體檢健康者作為對照組。對其年齡、婚育狀況等一般資料進行登記,年齡均為18～50歲。觀察組患者均行婦科檢查,根據(jù)病史及癥狀嚴重程度、陰道分泌物涂片真菌鏡檢及真菌培養(yǎng),參照文獻SW對其臨床癥狀體征進行評分。按單純型和復(fù)雜型(復(fù)發(fā)性、重度、非白色念珠菌所致)VVC進行觀察；微生物學檢測結(jié)果為真菌涂片陽性患者63.81%(67/105),真菌培養(yǎng)陽性率80.00%(84/105)。排除標準：患有細菌性陰道炎、滴蟲性陰道炎、性傳播疾病、糖尿病、高血壓、惡性腫瘤及自身免疫性疾病等影響抗氧化因子水平檢測及免疫指標的一些疾病。

1.2 方法

1.2.1 收集、檢測陰道分泌物樣品 對兩組陰道分泌物進行提取,對其所用的樣品都用棉拭子搜集兩份,并對其進行相應(yīng)的有關(guān)檢測。對其中一份棉拭子的滴蟲細菌及念珠菌等微生物進行檢查。備1 ml無菌磷酸鹽緩沖液(PBS)的離心管,將另一份棉拭子放入其中,并在-80℃的環(huán)境中儲存?zhèn)溆茫?］。

微生物學檢測：取載波片,將陰道分泌物置于其上,加入1～2滴的10%的KOH,在高倍鏡下選取10個及以上視野并對其檢查,看是否存在芽生砲子或菌絲。在沙氏培養(yǎng)基上對分泌物進行接種,溫度：35℃,對其進行培養(yǎng),觀察 24～48 h,鑒定并行菌株。對于沙氏培養(yǎng)基中生長直徑＞1 mm的菌落挑選出來并對其進行革蘭染色,利用顯微鏡對其進行觀察,分析是霉菌或者酵母菌。如果其為酵母菌,對于純培養(yǎng)基所生長的菌落用無菌接種環(huán)對其輕輕挑取,并將其接種到念珠菌顯色培養(yǎng)基上,溫箱溫度為37℃,持續(xù)培養(yǎng)48 h。綠色或翠綠色為白色念珠菌菌落顏色；熱帶念珠菌為藍色；光滑念珠菌為紫色；克柔假絲念珠菌粉紅色；其他念珠菌為白色。

Nrf2信號通路下游抗氧化因子主要包括過氧化氫酶(CAT)、SOD、脂質(zhì)過氧化物丙二醛(MDA)以及GSH-Px等。檢測時可采用ELISA法。

1.2.2 采集、檢測靜脈血 對兩組受試者靜脈血各抽取 3 ml,留取血清,保存 -80℃環(huán)境下備用。釆用ELISA法檢測氧化應(yīng)激標記物AGE、AOPPS；釆用ELISA法檢測炎癥細胞因子IL-17、IL-23水平［3］。

1.3 觀察指標 比較兩組Nrf2信號通路下游抗氧化因子表達水平,觀察組不同程度VVC患者的陰道分泌物中IL-23水平以及氧化應(yīng)激標記物AOPPS、AGE水平。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標準差(±s)表示,采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Nrf2信號通路下游抗氧化因子表達水平比較 所有VVC患者中,其中輕中度VVC患者51例,重度VVC患者21例,RVVC患者33例。治療前,觀察組患者Nrf2信號通路下游抗氧化因子GSH-Px、SOD、IL-17水平均高于對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表 1。

表1 兩組Nrf2信號通路下游抗氧化因子表達水平比較 (±s)

表1 兩組Nrf2信號通路下游抗氧化因子表達水平比較 (±s)

注 ：兩組比較,P＜0.05

組別 例數(shù) 抗氧化酶GSH-Px(U/ml)SOD(U/ml)IL-17(ng/L)對照組 60 0.52±0.18 0.55±0.221.03±0.28觀察組 輕中度VVC 51 0.71±0.22 0.66±0.271.26±0.33重度VVC 21 1.17±0.16 1.26±0.272.36±0.24 RVVC 33 1.12±0.27 0.67±0.351.36±0.08

2.2 觀察組不同程度VVC患者陰道分泌物中IL-23水平比較 輕中度VVC、重度VVC、RVVC患者陰道分泌物中IL-23水平分別為(1.25±0.29)、(1.12±0.33)、(0.91±0.31)pg/ml,三類患者比較差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

2.3 觀察組不同程度VVC患者氧化應(yīng)激標記物AOPPS、AGE水平比較 觀察組不同程度VVC患者AOPPS、AGE水平比較,差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 觀察組不同程度VVC患者氧化應(yīng)激標記物AOPPS、AGE 水平比較 (±s)

表2 觀察組不同程度VVC患者氧化應(yīng)激標記物AOPPS、AGE 水平比較 (±s)

注：不同程度VVC患者比較,P＜0.05

類型 例數(shù) AOPPS(μmol/L) AGE(μg/ml)輕中度VVC患者 51 24.33±2.16 3.14±0.54重度VVC患者 21 31.67±5.84 2.66±2.51 RVVC患者 33 25.22±6.91 3.52±1.74

3 討論

臨床中常見的皮膚疾病中VVC是的一種由念珠菌感染引起的黏膜疾病,難愈、頑固、易復(fù)發(fā)是該病的主要特征,婦女群體中75%的人曾患此病,當中約8%最后轉(zhuǎn)化為了RVVC。該病給婦女身心、工作和生活等帶來諸多影響［4］。目前尚未明確VVC的具體發(fā)病原因,但大量的試驗和數(shù)據(jù)說明VVC的發(fā)病過程炎癥和氧化應(yīng)激參與了反應(yīng)。根據(jù)國內(nèi)外研究結(jié)果以及前期研究結(jié)果可以推測在VVC發(fā)生發(fā)展中Nr12通路有較好的調(diào)節(jié)作用［5］。本研究通過對VVC患者中GSH-Px等抗氧化酶表達水平、IL-17等表達水平及氧化應(yīng)激指標AOPPS和AGE水平的系統(tǒng)性分析,梳理炎癥因子與Nr12通路直接的聯(lián)系和相互作用,并闡明在外陰陰道念珠菌病發(fā)病中宿主Nr12通路對其的調(diào)控機制,對于有效防治VVC提供了新的方案和理論研究依據(jù)。

氧化應(yīng)激與炎癥參與了VVC的發(fā)生發(fā)展,Thl7和IL-17在念珠菌性陰道炎的發(fā)病過程中具有保護性免疫作用,而Nrf2通路是最重要的抗氧化通路,該通路不但可以啟動內(nèi)源性和外源性應(yīng)激監(jiān)測途徑,且Nrf2尚可誘導IL-17表達,已有研究證實NH2誘導IL-17D在介導腫瘤及病毒監(jiān)測方面具有重要作用,而1L-17在多種病原微生物尤其是細胞外病原體和真菌所致的感染性疾病中起著重要的抗感染作用,且IL-17對外陰陰道念珠菌病具有免疫保護作用。IL-23是新近發(fā)現(xiàn)的一種異二聚體新型蛋白質(zhì)分子,由IL-23p19和IL-12p40兩個亞單位通過二硫鍵組成的細胞因子,系IL-12家族成員,它主要由活化的樹突狀細胞和巨噬細胞分泌,IL-12R 1和IL-23R為其受體IL-23在天然免疫中和獲得性免疫中都發(fā)揮著重要的生物學功能。在天然免疫方面,IL-23可以激活機體未致敏T淋巴細胞,特異性的誘導INF-γ和IL-17的分泌,同時,樹突狀細胞和巨噬細胞產(chǎn)生的IL-23反過來還會作用于樹突狀細胞,促進IL-12和γ-INF的產(chǎn)生,盡而發(fā)揮對機體的保護功能,以抵御病原微生物的感染。在獲得性免疫方面,IL-23可以發(fā)動另外一條T細胞發(fā)育途徑,對記憶性T細胞的反應(yīng)良好,在這一過程中扮演著非常重要的角色,促使T細胞亞單位分泌致炎性因子IL-17,再次激活巨噬細胞,在自身免疫反應(yīng)中有著重要作用。這些研究的發(fā)現(xiàn),說明IL-23是連接機體天然免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng)之間的一條重要的紐帶,具有十分復(fù)雜的生物學功能,在抗感染免疫、抗腫瘤免疫及自身免疫性疾病方面有著非常重要的作用。

由于陰道感染,破壞了抗氧化物和氧化因子之間的平衡,氧化應(yīng)激促進了陰道炎的發(fā)生發(fā)展。AGE和AOPPS是通過大分子的轉(zhuǎn)化而形成的化合物,是氧化應(yīng)激的新型標志物,也是較好的炎癥介質(zhì),能更好地顯示急性氧化應(yīng)激過程,在多種疾病中可作為氧化應(yīng)激和炎癥標志物的蛋白質(zhì)。

綜上所述,Nrf2通路既可以保護宿主免受氧化應(yīng)激反應(yīng)所致的損傷及感染引發(fā)的炎癥,又增強了宿主免疫對念珠菌的清除能力,以降低RVVC的發(fā)生。