牙齦間充質干細胞治療慢性移植物抗宿主病的機制分析

李紅瑛 XI DANG

（1 古巴哈瓦那醫(yī)科大學 古巴 哈瓦那 999075）

（2 羅西奧大學 西班牙 塞維利亞 999023）

器官移植是目前很多疾病治療的重要方法，能夠代替衰竭器官維持正常功能。慢性移植物抗宿主病是器官移植術后常見并發(fā)癥，常規(guī)免疫抑制藥物在該病治療中的效果不夠理想，甚至增加了患者身體的負擔[1]。慢性移植物抗宿主病的發(fā)病時間常見于術后3 個月之后，除了T 細胞激活外，還伴隨B 細胞以及體液免疫激活[2]。間充質干細胞能夠分泌多種生長因子以及免疫保護細胞因子，對于促進組織修復、抑制免疫細胞活化具有較好的效果，隨著臨床研究的深入，發(fā)現其在細胞移植、器官移植等領域有著較高的應用價值[3]。文章主要針對牙齦間充質干細胞治療慢性移植物抗宿主病的機制展開分析，報道如下。

1. 資料與方法

1.1 材料與試劑

本次研究實驗小鼠由醫(yī)院實驗室提供，相關試劑為美國Gibco 公司進口。

1.2 方法

從人牙齦組織中采集牙齦間充質干細胞，通過建立慢性移植物抗宿主病小鼠樣本，并分為觀察組與對照組，然后將牙齦間充質干細胞注入觀察組慢性移植物抗宿主病小鼠模型。

牙齦間充質干細胞采集方法：牙齦組織剪碎并使用PBS 緩沖液沖洗，然后放在0.4% 分散酶的PBS 緩沖液中，置于37℃孵育箱中30min，剝離牙齦上皮組織并加入I 型膠原酶靜置50min，然后使用70mm 濾網過濾并加入培養(yǎng)液，使用DMEM 培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。使用顯微鏡進行單細胞采集并轉移至生長培養(yǎng)基。

慢性移植物抗宿主病小鼠樣本建立方法：第1 天從小鼠尾靜脈注射60mg/kg 環(huán)磷酰胺，第2 天全身照射200cGy 放射線，觀察組小鼠第3 天尾靜脈注射間充質干細胞（2×106）,。

1.3 觀察指標

觀察兩組小鼠模型的病情變化，從而分析其治療機制。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS16.0 統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料采用t值檢驗，P＜0.05 時為差異有統(tǒng)計學意義。

2. 結果

觀察組小鼠IL-4、IL-6、IFN-γ 以及TNF-α 水平明顯低于對照組小鼠（P＜0.05），見表1。

表1 兩組小鼠炎癥因子指標差異（±s）

表1 兩組小鼠炎癥因子指標差異（±s）

組別 IL-4（pg/ml） IL-6（pg/ml） IFN-γ（ml/U） TNF-α（pg/ml）觀察組 122.5±23.6 88.6±14.8 65.8±11.5 74.6±11.5對照組 145.6±36.5 110.6±25.6 86.9±16.4 94.2±17.8 t 5.485 5.201 5.124 5.220 P 0.044 0.042 0.041 0.042

3. 討論

目前臨床研究證實了牙齦間充質干細胞在多種免疫性疾病臨床治療中具有較好的應用效果，本次研究主要針對其在慢性移植物抗宿主病中的治療機制展開分析。目前牙齦間充質干細胞主要是通過口腔組織獲取，創(chuàng)口較小且采集難度低，具有較好的擴增能力，在保持一定數量的前提下具有較好的免疫調節(jié)效果，能夠通過控制細胞數量來減小成瘤風險[4]。隨著現代醫(yī)學研究的深入，發(fā)現牙齦間充質干細胞能夠有效抑制B 細胞分泌免疫球蛋白，從而減少自體免疫性疾病的發(fā)生風險，例如IgG可引起慢性免疫相關炎癥，IgM 可引起風濕性關節(jié)炎等，因此通過抑制B 細胞的表達能力能夠減輕自體免疫疾病的發(fā)生率。B 細胞主要在機體中起到介導體液免疫的作用，成熟的B 細胞能夠分化增殖為漿細胞，合成抗體，從而達到免疫的效果。

白細胞介素（IL）是多種細胞產生的一類細胞因子，功能復雜，在免疫細胞成熟、活化、增殖以及免疫調節(jié)中起到了重要的作用，同時參與人體多種生理與病理反應。IL-4 能夠促使B 細胞分裂防止，增強B 細胞的抗原遞呈能力，還能夠促使B 細胞分泌IgE。IL-6 能夠促使B 細胞繁殖，參與炎癥反應，作用靶細胞較多，包括巨噬細胞、B 細胞以及漿細胞等[5]。TNF 是由巨噬細胞分泌的一種小分子蛋白，TNF-α 主要是由單核巨噬細胞分泌，能夠刺激IL-1 的表達，其與感染性休克、病毒復制以及惡液質的發(fā)生有密切的相關性，健康人血清TNF 水平較低，但在風濕性關節(jié)炎、腎移植以及硬化癥患者中可檢測到TNF 水平升高，且與患者的病情水平呈正相關性，由此可見TNF 水平升高與患者病情發(fā)展有密切的相關性。本次研究中觀察組小鼠IL-4、IL-6、IFN-γ 以及TNF-α 水平明顯低于對照組小鼠（P＜0.05），這說明通過注射牙齦間充質干細胞能夠有效降低小鼠炎癥因子水平，通過抑炎效果來治療慢性移植物抗宿主病。牙齦間充質干細胞具有采集方法簡單、創(chuàng)口小、數量穩(wěn)定的特點，因此在牙齦間充質干細胞中具有較好的應用價值，能夠有效改善患者的炎癥因子水平，從而改善患者的臨床癥狀。

綜上所述，牙齦間充質干細胞能夠通過抑制炎癥因子表達從而達到治療慢性移植物抗宿主病的效果。