熒光染色法與KOH 濕片法在皮膚淺部真菌感染檢查中的效果比較

于 波

（中國科學院大學深圳醫院（光明）東院區，廣東 深圳 518017）

皮膚淺部真菌感染為臨床上發生率較高的皮膚疾病，及早明確診斷、鑒別診斷為后續治療提供有效參考[1]至關重要。直接鏡檢法及培養法為臨床常用的真菌檢查方法，由于培養法所需時間較長，故而限制了其應用范圍。熒光染色法與KOH 濕片法為目前應用廣泛的兩種直接鏡檢法，兩者在淺部真菌感染檢測中均可發揮一定的積極作用，但對于兩種檢測方式的對比則相對較少[2、3]。本研究就兩種直接鏡檢法在皮膚淺部真菌感染檢查中的應用價值進行比較分析。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2018 年6 月～2019 年4 月期間在我院皮膚科就診的疑診真菌感染患者皮損標本110 例進行研究；患者年齡最小42 天，最大72 歲，平均（65.3±0.4）歲，其中皮屑標本90 例，甲屑標本15 例，毛發標本5 例，所有標本均一式兩份。

1.2 器材 KOH 溶液：取用我院檢驗科配置5%的KOH 溶液。熒光染液：試劑由氫氧化鉀、熒光增白劑、依文思藍、純化水組成，由珠海豐炎科技有限公司提供。顯微鏡：選用奧林巴斯CX31 型顯微鏡，增設熒光模塊。

1.3 方法 取材：用蘸有75%乙醇的無菌棉簽對皮損部位消毒、濕潤，皮屑標本選取活動性皮損邊緣部位皮屑；甲屑標本選取增厚混黃伴鱗屑、空變病甲碎屑；毛發選取皮損內病發及毛根鱗屑；標本均一式兩份，分別進行熒光染色法及KOH 濕片法檢測。染色：熒光染色法，在標本上滴加熒光染色液，蓋上蓋玻片，染色數秒，吸去多余染液，于顯微鏡熒光模塊下檢測；KOH 濕片法，在標本上滴加KOH 溶液，蓋上蓋玻片，酒精燈適當加熱，于顯微鏡普通光鏡下檢測。

1.4 觀察指標 對兩種檢測方法的陽性檢出率進行比較，并對兩組檢測方法的鏡檢特征進行分析。

1.5 統計學分析 以SPSS 20.0 處理數據資料，計量與計數資料分別以t與χ2檢驗，P＜0.05 為有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種檢測方式的陽性檢出率比較 熒光染色法對疑診皮膚淺部真菌感染患者檢測陽性率明顯高于KOH 濕片法（P＜0.05）。見表1。

2.2 兩種檢測方法的鏡檢結果分析 熒光染色法：標本可見暗色背景中亮藍白色菌絲或孢子，且菌絲橫隔結構及孢子出芽狀態均清晰可見，背景反差明顯，真菌陽性檢出率高，漏檢率低。KOH 濕片法：KOH 溶解標本后未進行染色，菌絲或孢子結構與背景無明顯反差，分辨難度較大，同樣的標本陽性檢出率相對較低；菌絲或孢子量少的標本極易出現漏檢。

表1 兩種檢測方法在患者不同部位標本中的檢測結果比較（n，%）

3 討論

淺部皮膚真菌感染屬于真菌性疾病中的一種，多因人體皮膚、指（趾）甲、毛發等遭受真菌侵犯所致，主要包括體股癬、手足癬、甲癬、頭癬、難辨認癬、花斑糠疹、皮膚黏膜念珠菌病等，皮膚癬菌、馬拉色菌、念珠菌等是引發該病常見的真菌[4]。淺部皮膚真菌感染具有較強的傳染性，易交叉感染，且極易復發，對患者健康及生活質量的影響極大。流行病學顯示，淺部皮膚真菌感染遍布世界各地流行較廣，我國亦是該病的高發地域。有數據顯示[5]，該類皮膚病的發生率占皮膚科門診患者總數的第2 或第3 位，在部分地區或季節甚至占據首位，其發生率之高不容小覷。及早明確診斷可為后續治療提供有效參考。

既往，臨床上多采用培養法進行真菌檢測，但其耗時較長，故而限制了其臨床應用范圍。近年來，臨床上通常將直接鏡檢法作為檢測皮膚淺部真菌的常用方法，其中以KOH 濕片法與熒光染色法最為常用。其中KOH 濕片法因操作簡單、成本低廉、無需特殊儀器等多種優點在臨床上應用廣泛[6]。然而，該檢測方法也有很大的不足之處，如主觀性強、影響因素多等，鏡下觀察時標本背景通常較為雜亂，難以有效突出真菌結構，極易影響結果判讀，對伴有脂滴、菌絲或孢子量少等情況下亦極易造成漏檢[7]，對檢驗人員的經驗及操作水平均有較高的要求。

熒光染色法則由特異性的熒光標記物共價結合方式，即熒光染色液內含的熒光素及抑制背景熒光著色復染劑，與真菌或其他生物體細胞壁上的幾丁質和纖維素等表現出高親和力，使用顯微鏡熒光模塊可觀察到特定激發光下產生的熒光，從而使菌絲或孢子結構清晰可見。通常特定激發光波段下，菌絲或孢子呈現出明亮的亮藍白色熒光，能夠與暗背景形成明顯反差與對比，從而顯著提高檢測結果的陽性率，且該熒光劑與真菌的親和力較高，通常只需數十秒便可完成反應，進而可顯著提高真菌檢測效率及靈敏度[8]。相對于KOH 濕片法，熒光染色法更能夠顯著提高真菌的陽性檢出率。

本次研究結果顯示患者經熒光染色法檢測陽性率為90.0%明顯高于KOH 濕片法的75.0%（P＜0.05），與上述理論相符。且本次研究還就熒光染色法與KOH 濕片法對不同部位標本的檢測結果進行比較，包括皮屑、甲屑、毛發，結果顯示相對于KOH濕片法，熒光染色法對各部位標本的陽性檢出率均有所提高，提示熒光染色法在皮膚淺部真菌感染檢測中的應用價值更高。經熒光染色后能夠更加清晰地對真菌結構、形態進行觀察，便于和其他雜質區別，故而可有效提高檢出陽性率，減少誤診、漏診現象發生。但需要注意的是，熒光染色法同樣可對植物纖維素進行標記，而標本及玻片上通常存在少量纖維，鏡下亦可發出類似熒光影響檢測結果，但纖維形態多刻板均一，與真菌結構相比，纖維的大小、粗細、熒光亮度等均存在明顯差異。因此，操作人員通過肉眼觀察通常可輕易辨別。

綜上所述，熒光染色法與KOH 濕片法兩種方法在皮膚淺部真菌感染的檢測中均具有一定積極作用，且兩種檢測方法均有操作簡單等特點；但熒光染色法對該類患者的陽性檢出率更高，在皮膚淺部真菌感染檢測中的應用價值更高，故而可在臨床上廣泛推廣應用。