非腫塊型及腫塊型乳腺癌與其分子生物學(xué)標(biāo)記物相關(guān)性研究

張文，石琴，卿強(qiáng)，付志明，朱純生，李鋒

(珠海市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，廣東 珠海 519000)

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤，發(fā)病率約42/10萬，居女性惡性腫瘤之首。研究表明，決定早期乳腺癌治療方案、提示療效與預(yù)后的并非病理組織學(xué)類型，而是腫瘤的不同分子生物學(xué)標(biāo)記物，主要包括癌細(xì)胞的雌激素受體(ER)、人表皮生長(zhǎng)因子受體-2(HER-2)、孕激素受體(PR)和Ki-67[1]。乳腺磁共振動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描是臨床診斷乳腺癌的常用影像學(xué)方法，可以從多角度反映病灶形態(tài)、性質(zhì)、血運(yùn)等特點(diǎn)[1]，在鑒別非腫塊型乳腺癌與腫塊型乳腺癌不同形態(tài)特征方面具有較高的臨床價(jià)值。然而，非腫塊型及腫塊型乳腺癌之間是否存在分子生物標(biāo)記物表達(dá)差異，仍未曾被證實(shí)[2-3]。本研究對(duì)比非腫塊型及腫塊型乳腺癌分子生物學(xué)標(biāo)記物的差異，旨在探討兩者生物學(xué)特性，為臨床早期有效干預(yù)與預(yù)后判斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月—2019年1月經(jīng)磁共振動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描及術(shù)后病理確診的31 例乳腺癌患者，其中非腫塊型乳腺癌15 例(非腫塊組)，腫塊型乳腺癌16 例(腫塊組)。兩組臨床基線資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(見表1)，有可比性。本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

表1 兩組臨床基線資料比較

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者術(shù)前均接受磁共振動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描明確病灶形態(tài)分型；經(jīng)免疫組織化學(xué)檢查測(cè)定ER，PR，HER-2及Ki-67的表達(dá)情況。排除標(biāo)準(zhǔn)：病灶內(nèi)合并其他乳腺良性病變；影像或組織學(xué)資料不全；術(shù)前經(jīng)新輔助治療。

1.3 研究方法

磁共振檢查：采用GE Signa HDxt 1.5T MRI設(shè)備，患者常規(guī)俯臥位，雙側(cè)乳房自然懸垂于乳腺線圈洞穴中，先行雙乳橫軸位T1WI，T2WI，DWI，STIR及斜矢狀位脂肪抑制T2WI掃描，而后應(yīng)用Vibrant 3D技術(shù)行橫軸位多期動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描。經(jīng)肘靜脈團(tuán)注0.1 mmol/kg的Gd-DTPA，速率為2.5 mL/s，再以同等速率注入20 mL生理鹽水。在注射對(duì)比劑前及注射后30 s，90 s，150 s，210 s，270 s，350 s，410 s，470 s分別進(jìn)行掃描，掃描時(shí)間62 s。收集圖像由兩名具有5年以上乳腺癌臨床診斷工作經(jīng)驗(yàn)的影像科醫(yī)師進(jìn)行。免疫組織化學(xué)檢查：對(duì)獲取的病理標(biāo)本進(jìn)行蘇木精—伊紅染色(HE)，測(cè)量癌細(xì)胞ER，PR，HER-2及Ki-67陽性率。將標(biāo)本放入10%的中性甲醛中浸泡，使用石蠟包埋，按照4 μm大小連續(xù)切片，脫蠟水化后用3%的H2O2滅活內(nèi)源性酶，分別滴加一抗、二抗和辣根過氧氫化物酶標(biāo)記的鏈霉素親和素復(fù)合物孵育。使用二氨基聯(lián)苯顯色，蘇木精復(fù)染色，封片后觀察。判定標(biāo)準(zhǔn)：ER，PR以陽性細(xì)胞百分比超過10%定性為陽性；HER-2(+++)直接判定為陽性，HER-2(++)需加做FISH進(jìn)行判定，判定結(jié)果為陽性，則定性為HER-2陽性；Ki-67以陽性細(xì)胞百分比超過14%判定為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

建立Excel數(shù)據(jù)庫(kù)，使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS23.0進(jìn)行分析，經(jīng)MRI掃描圖像歸類一致性使用Kappa檢驗(yàn)，兩組樣本的免疫組織化學(xué)指標(biāo)和基線特征對(duì)比采用χ2和t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組磁共振成像檢查結(jié)果對(duì)比

依據(jù)增強(qiáng)磁共振的不同形態(tài)特征，乳腺癌分為腫塊型和非腫塊型。腫塊型呈圓形、類圓形、分葉狀、不規(guī)則型；非腫塊型指一個(gè)不具備腫塊特征的強(qiáng)化區(qū)域，多為節(jié)段型、導(dǎo)管型、區(qū)域性、多灶性、彌漫性、局灶型強(qiáng)化，其范圍或很小或很廣泛，其內(nèi)部強(qiáng)化特點(diǎn)是強(qiáng)化灶互不相連，被周圍正常乳腺組織所分隔。本研究非腫塊組病灶不均勻強(qiáng)化高于腫塊組，邊緣強(qiáng)化低于腫塊組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.162，P<0.05)(見表2)。兩名影像科醫(yī)師對(duì)腫瘤形態(tài)歸類一致性較高，一致性檢驗(yàn)Kappa值為0.935(P<0.001)。

表2 兩組病灶強(qiáng)化情況 例(%)

2.2 兩組分子生物學(xué)標(biāo)記物陽性率對(duì)比

兩組ER，PR，HER-2陽性率對(duì)比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；非腫塊型組Ki-67的陽性率低于腫塊型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見表3)。

表3 兩組分子生物學(xué)標(biāo)志物陽性率對(duì)比 例(%)

3 討 論

乳腺癌是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，早期診斷對(duì)于提高患者的生存率有重要作用[4]。MRI具有良好的軟組織分辨力，特別是動(dòng)態(tài)增強(qiáng)掃描，可以很好地顯示或反映病灶的形態(tài)學(xué)變化，且對(duì)乳腺病灶診斷敏感度與特異度高，效果優(yōu)于傳統(tǒng)X線攝影和乳腺彩超，是鑒別非腫塊型乳腺癌與腫塊型乳腺癌的有效方法[5]。腫瘤的組織學(xué)特點(diǎn)和生物學(xué)預(yù)后表達(dá)實(shí)際上是由腫瘤的生物學(xué)行為支配的。目前研究發(fā)現(xiàn)ER，HER-2，PR在乳腺癌疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。國(guó)內(nèi)外已經(jīng)將HER-2作為選擇乳腺癌治療方案和預(yù)后效果評(píng)估的參考指標(biāo)。Ki-67也是目前比較肯定的核增殖標(biāo)記物，與很多腫瘤的浸潤(rùn)、分化程度和轉(zhuǎn)移都存在相關(guān)性[6]。ER，PR能夠特異性地與雌激素、孕激素及其類似物相結(jié)合，其陽性表達(dá)說明腫瘤細(xì)胞保留有激素依賴生長(zhǎng)的特性，可以作為乳腺癌患者是否對(duì)內(nèi)分泌治療敏感的判斷指標(biāo)。HER-2是常見的乳腺癌分子標(biāo)記物，與乳腺癌發(fā)生的進(jìn)程和轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，大部分分化差和浸潤(rùn)性乳腺癌的HER-2表達(dá)也為陽性。研究證實(shí)，ER，PR，HER-2與乳腺癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移及預(yù)后存在相關(guān)性[7]。本研究表明非腫塊型乳腺癌和腫塊型乳腺癌ER，PR，HER-2陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示兩者分子生物學(xué)標(biāo)記物表達(dá)存在重疊。Ki-67由MKI-67基因編碼，是一種核蛋白質(zhì)，參與了核糖體RNA的轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞增殖，與乳腺癌惡性程度呈正相關(guān)，在腫瘤的發(fā)展與預(yù)后中發(fā)揮重要作用[8]。本研究結(jié)果顯示，非腫塊型與腫塊型乳腺癌患者Ki-67表達(dá)存在差異，后者陽性率更高，其原因考慮為腫塊型乳腺癌細(xì)胞增殖成團(tuán)，呈膨脹性生長(zhǎng)，單位面積內(nèi)腫瘤細(xì)胞密度大，Ki-67陽性率占比高，而非腫塊型乳腺癌結(jié)構(gòu)松散，腺體、脂肪、纖維等組織夾雜于腫瘤細(xì)胞間，單位面積內(nèi)腫瘤細(xì)胞面積小，故其表達(dá)水平低。Ki-67表達(dá)的差異性是否可以提示非腫塊型乳腺癌預(yù)后較好，這需要加大樣本量和隨訪進(jìn)行進(jìn)一步研究。

綜上所述，非腫塊型乳腺癌患者和腫塊型乳腺癌患者的ER，PR，HER-2表達(dá)存在重疊，但是Ki-67的表達(dá)存在不同，說明兩者的生物學(xué)特性存在差異性。