蛻膜組織自然殺傷細胞亞群比例與早期流產的相關性分析

彭婧，張敏，甘維梅

(南昌市洪都中醫院，江西 南昌330000)

孕婦妊娠期間自然流產(SA)的發生率約為15%，其中絕大多數為早期流產，即妊娠時間低于12 周，其常見原因為胚胎染色體異常、免疫功能異常、黃體功能不足、甲狀腺功能減退癥以及感染等[1]。盡管經過一系列檢查，還是有60%～70%的早期流產無法找到明確原因[2]。由于在孕早期蛻膜組織淋巴細胞中殺傷細胞(NK)占主要地位，推測蛻膜組織中NK細胞異常可能是孕早期自然流產的重要病因[3]。本研究通過流式細胞術分析早期自然流產孕婦與早期正常妊娠孕婦蛻膜組織中NK細胞亞群比例的差異，進一步探討其與早期流產的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月—2018年12月收治的早期自然流產孕婦20 例作為觀察組，年齡(28.43±2.12) 歲，體質量指數(BMI)(20.43±1.38) kg/m2，孕周(8.75±1.89) 周，流產次數(2.52±0.42) 次；經相關檢查排除染色體、自身免疫、感染、遺傳等因素引起的流產。選擇同期正常妊娠行早期人工流產的孕婦20 例作為對照組，年齡(27.23±2.08) 歲，BMI(20.78±1.48) kg/m2，孕周(8.01±1.22) 周，流產次數(2.01±0.23) 次；既往無不良妊娠史，自愿終止早期妊娠且B超顯示胎兒發育正常。兩組孕婦的年齡、孕周、BMI、流產次數等一般資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，且所有孕婦均已簽署知情同意書。

1.2 方法

所有孕婦在行無痛清宮術前均接無菌負壓吸引瓶，吸取其蛻膜組織置于預冷的磷酸鹽緩沖液(PBS)離心管中，迅速送至醫院中心實驗室進行蛻膜組織單細胞懸液的制備。然后用流式細胞儀(美國BeckmanCoulte公司)以CD45-FITC/CD(56+16)-RD1/CD3-PC5對蛻膜組織單細胞懸液進行染色，并以CD45設門篩選出總淋巴細胞，用CD3和CD(56+16)雙抗標記蛻膜NK細胞。同時所有孕婦在行清宮術當天早晨空腹抽取靜脈血3 mL，用于檢測外周血雌二醇(E2)、孕酮(P)水平，所有操作均嚴格按試劑盒說明書進行。

1.3 統計學方法

2 結 果

2.1 兩組孕婦蛻膜組織NK細胞亞群表型特征比較

所有孕婦蛻膜組織淋巴細胞中NK細胞總量(即CD3-CD56+細胞)占70%左右，兩組孕婦蛻膜組織內NK細胞總量比較，差異無統計學意義(P>0.05)。觀察組孕婦蛻膜組織內CD3-CD56+CD16-NK細胞比例明顯低于對照組，CD3-CD56+CD16+NK細胞比例明顯高于對照組，差異均具有統計學意義(P<0.05)(見表1)。

表1 兩組孕婦蛻膜組織NK細胞亞群表型特征比較

2.2 兩組孕婦外周血E2和P水平比較

觀察組孕婦外周血E2和P水平均明顯低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)(見表2)。

表2 兩組孕婦外周血E2和P水平比較

2.3 蛻膜組織NK細胞亞群比例與E2和P的關系

Pearson相關分析結果顯示，所有孕婦外周血E2和P水平與蛻膜組織內CD3+CD56+CD16+NK細胞比例均呈負相關(r值分別為-0.463和-0.502)，與CD3-CD56+CD16-NK細胞比例均呈正相關(r值分別為0.455和0.476)。

3 討 論

早期流產主要是孕婦在妊娠12 周以前發生腹痛、陰道流血的現象。早期流產時，絨毛與子宮底蛻膜的聯系尚不牢固，常先有陰道流血，然后伴有陣發性下腹疼痛。NK細胞是不同于T和B淋巴細胞的第三類淋巴細胞，不表達特異性抗原識別受體，妊娠時蛻膜組織內NK細胞含量非常豐富，約占蛻膜組織內淋巴細胞的70%～80%，由于其直接識別胎兒抗原，推測蛻膜組織NK細胞在母胎界面免疫耐受中發揮著重要作用[4-5]。

根據NK細胞表面抗原標志，NK細胞亞群主要可以分為CD3-CD56+CD16+NK細胞和CD3-CD56+CD16-NK細胞，蛻膜組織內NK細胞則以CD3-CD56+CD16-亞群為主(約占90%)，而外周血以CD3-CD56+CD16+亞群為主(約占95%)[6]。與外周血NK細胞相比，蛻膜組織NK細胞有著不同的作用，由于CD16的低水平表達，蛻膜組織NK細胞表現出對表達主要組織相容性復合物Ⅰ類(MHC-Ⅰ)分子的滋養層細胞殺傷能力的下降，說明蛻膜組織中CD16的低表達水平可能有利于維持妊娠過程中滋養細胞功能[7-8]。

本研究結果顯示，所有孕婦蛻膜組織淋巴細胞中NK細胞總量(即CD3-CD56+細胞)占70%左右，其中正常早期妊娠孕婦蛻膜組織NK細胞亞群主要為CD3-CD56+CD16-NK細胞，約占(82.13±9.74)%，而早期自然流產孕婦CD3-CD56+CD16-NK細胞比例均值為(73.86±9.95)%，明顯低于正常早孕組，而CD3-CD56+CD16+NK細胞比例為(16.32±3.35)%，明顯高于正常早孕孕婦。CD16又稱為Leu11抗原，是NK細胞表面一種低親和力IgG Fc受體(FcγRⅢ)，主要介導NK細胞的自然殺傷和抗體依賴的細胞介導的細胞毒效應(ADCC)作用，當蛻膜組織內CD3-CD56+CD16+NK細胞比例升高、而CD3-CD56+CD16-NK細胞比例降低時不利于胚胎發育及妊娠的維持，導致孕婦妊娠早期發生流產[9-10]。E2主要由孕婦的黃體以及胎盤分泌，可以反映孕婦胎盤的生理狀態與發育狀態。正常早期妊娠孕婦黃體以及胎盤分泌良好，E2水平較高，若黃體和胎盤受到外界影響，E2水平降低可影響胚胎發育，最終導致流產[11]。而P是妊娠早期重要的監測指標，可用于反映早孕期胚胎的發育情況，其血中P水平降低可能導致子宮平滑肌纖維收縮，血供不足，影響胚胎發育而出現流產[12]。本研究結果顯示，早期自然流產的孕婦外周血E2和P水平均明顯低于正常早期妊娠的孕婦，且與蛻膜組織內CD3-CD56+CD16+NK細胞比例均呈負相關，與CD3-CD56+CD16-NK細胞比例均呈正相關，說明蛻膜組織內NK細胞比例失調可通過損傷胎盤等組織影響孕婦E2和P的表達。

綜上所述，早期自然流產孕婦較正常早期妊娠孕婦蛻膜組織中CD3-CD56+CD16-NK細胞比例降低，而CD3-CD56+CD16+NK細胞比例升高，早孕期蛻膜組織NK細胞亞群比例失衡可影響E2和P的分泌，可能是導致早期流產的重要原因。