液相色譜法測定芝麻醬中乙二胺四乙酸二鈉的方法驗(yàn)證

常景琿

摘要：本研究參照GB 5009.278-2016建立的液相色譜法測定食品中的乙二胺四乙酸二鈉的方法，標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)為0.99993，線性良好，檢出限與定量限分別為0.003g/kg、0.0065g/kg，加標(biāo)回收率為91.0%～105.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.65%，可以滿足食品中中乙二胺四乙酸二鈉檢測的需求。

關(guān)鍵詞：液相色譜法;芝麻醬;乙二胺四乙酸二鈉

引言

乙二胺四乙酸二鈉是一種食品添加劑，其通過與食品中金屬離子螯合成穩(wěn)定的絡(luò)合物，從而達(dá)到保持食品性狀穩(wěn)定，延長食品保存時間的目的，在食品加工中主要用做防腐劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑、凝固劑等。然而，由于乙二胺四乙酸可與鈣、鎂等人體所必需的微量金屬形成螯合物，長期過量攝入會在一定程度上導(dǎo)致人體中微量元素流失，對人體健康造成損害，因此，世界各國對用作食品添加劑的乙二胺四乙酸二鈉均有嚴(yán)格的限量規(guī)定。我國食品安全標(biāo)準(zhǔn)GB 2760-2014 規(guī)定了乙二胺四乙酸二鈉在不同產(chǎn)品中最大使用量范圍為0.03～0.25g/kg。本研究結(jié)合本中心實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有設(shè)備條件，參照GB 5009.278-2016建立和驗(yàn)證液相色譜法測定食品中的乙二胺四乙酸二鈉，以拓展中心液相色譜檢驗(yàn)領(lǐng)域。

一、材料與方法

（一）材料與設(shè)備

芝麻醬樣品購自某超市。

乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)品由壇墨質(zhì)檢提供。

甲醇、甲酸均為色譜純;鹽酸、磷酸、四丁基溴酸銨、乙酸鈉、三氯化鐵均為分析純;實(shí)驗(yàn)用水為一級水。

液相色譜儀，配紫外檢測器;電子天平;渦旋振蕩器;超聲波清洗機(jī);pH計(jì);混合陰離子（PXA）固相萃取柱;0.45μm微孔濾膜。

（二）實(shí)驗(yàn)方法

1.試樣前處理過程

稱取試樣5g（精確到0.001g），置于50mL比色管中，加入25mL水，渦旋混勻，超聲20min，5000r/min離心5min，取上清液置于50mL比色管中。剩余殘?jiān)貜?fù)提取一次，離心后合并上清液，加水定容至50mL。

分別取上述提取液5mL于離心管中，加入0.5mL三氯化鐵溶液，渦旋混勻1min，超聲20min，5000r/min離心5min，待凈化。

依次用5mL甲醇、5mL水活化PXA（混合陰離子固相萃取柱），將待凈化液全部上樣過柱，依次用5mL水、5mL甲醇淋洗，吹干，用5mL5%甲酸甲醇水溶液洗脫，吹干，收集洗脫液并定容至5mL，過膜供液相色譜儀測定。

2.標(biāo)準(zhǔn)系列溶液配制

參照GB 5009.278-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中乙二胺四乙酸鹽的測定》中標(biāo)準(zhǔn)溶液配制步驟。

3.高效液相色譜條件

色譜柱：Plus-C18柱，柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5.0μm;檢測器：二極管陣列檢測器;流動相：甲醇/四丁基溴化銨-乙酸鈉混合溶液（pH4.0）=15：85;流速：0.8mL/min;柱溫：35℃;波長：254nm;進(jìn)樣量：10μL。

二、結(jié)果與分析

（一）線性關(guān)系及檢出限

將配制的乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)工作系列按照上述液相色譜條件測試，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Area=13.63402*Amt-4.6902801，相關(guān)系數(shù)為0.99993。以3倍信噪比對應(yīng)的乙二胺四乙酸二鈉含量為檢出限，上機(jī)濃度為1μg/mL時，信噪比為10.2，當(dāng)信噪比為3時，所得濃度為0.3μg/mL，計(jì)算得出乙二胺四乙酸二鈉檢出限為0.003g/kg;以10倍信噪比對應(yīng)的脫氫乙酸含量為定量限，上機(jī)濃度為3μg/mL時，信噪比為46.3，當(dāng)信噪比為10時，所得濃度為0.65μg/mL，計(jì)算得出乙二胺四乙酸二鈉定量限為0.0065g/kg。

（二）加標(biāo)回收率與精密度

在芝麻醬試樣中，添加低（30 mg/kg）、中（60 mg/kg）、高（150 mg/kg）三個濃度水平的乙二胺四乙酸二鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述前處理過程操作、液相色譜條件測試，考察其加標(biāo)回收率。選取某一含有乙二胺四乙酸二鈉的芝麻醬樣品進(jìn)行6次平行測定，計(jì)算RSD，考察其精密度。經(jīng)測試，該方法的加標(biāo)回收率為91.0%～105.6%，RSD為0.65%，滿足GB/T 27404-2008的要求。

（三）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部比對試驗(yàn)

為確認(rèn)本實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性，將用本法測得乙二胺四乙酸二鈉含量為30.5mg/kg的某芝麻醬，在期間精密度條件下由另一位檢驗(yàn)員再次測定，測得其中乙二胺四乙酸二鈉含量為31.1μg/kg，兩次測定絕對差值/算術(shù)平均值為0.2%，符合GB 5009.278-2016的規(guī)定。

三、結(jié)論

本方法參照國標(biāo)方法建立的液相色譜法測定芝麻醬中乙二胺四乙酸二鈉的檢測方法，準(zhǔn)確度高、精密度、靈敏度高、重現(xiàn)性好，且操作較為簡單，干擾少，所用試劑毒害性低，可為基層食品安全監(jiān)管提供檢測方法和技術(shù)支撐， 對強(qiáng)化食品添加劑監(jiān)管，保障食品安全具有實(shí)際意義。

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