痰液及血清中單核細胞趨化因子蛋白、白介素-35表達在肺結核患者檢測中的臨床意義

謝 巍，涂 宏

(四川省遂寧市中心醫院，a.感染性疾病科；b.心血管三病區，四川 遂寧 629000)

肺結核(pulmonary tuberculosis，PT)系指由結核分枝桿菌所致的慢性傳染病，人群普遍易感，病程長且病情較為復雜，病機與細胞因子或免疫調節等密切相關，目前PT在全球范圍內廣泛流行，成為危害人類生命健康的常見疾病之一[1]，近年來隨著PT患者耐藥現象的普遍，全球結核病疫情進一步加重，使得PT早期預測和早期防治成為臨床關注的重點。研究發現[2]，結核病的病情發展不僅取決于結核分枝桿菌致病力的大小，且與機體細胞免疫反應減弱密切相關，此外文獻報道結核分枝桿菌感染至肺部會導致單核細胞和巨噬細胞在感染部位聚集，引發肺部炎癥、纖維化以及肉芽腫等的形成[3]，因而通過檢測PT患者血清或痰液中相關因子水平或對疾病預測有積極作用。白介素-35(IL-35)在調節性T細胞功能以及抗炎癥反應等過程中起到重要的作用[4]，單核細胞趨化因子蛋白(MCP-1)屬于一種重要的單核細胞趨化及激活因子[5]。目前關于兩者在PT患者痰液細胞和血清中表達水平及其臨床意義的研究依然較少。本文探討PT患者痰液細胞和血清中MCP-1及IL-35水平變化及意義，旨在為PT病情預測提供理論依據，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料2016年7月至2019年7月本院收治的106例PT患者(疾病組)。納入標準：①符合《肺結核診斷和治療指南》[6]有關PT診斷標準，經痰涂片檢查、結核菌素試驗以及X射線檢查確診；②臨床資料完善；③未合并其他類型傳染病或肺部疾病；④健康體檢者要求身體健康、既往無肺部疾病史、不存在免疫性疾病或炎性疾病。排除標準：①存在肝、腎、心等重要臟器功能障礙；②存在免疫系統疾病；③合并惡性腫瘤。疾病組依據隨訪資料分為疾病活動組(活動性肺結核，n=63)、疾病穩定組(穩定期肺結核，n=43)，同期收治的35例肺疾病患者(排除存在器質性病變者)為對照組。疾病活動組男41例，女22例，年齡11～60歲[(31.06±3.95)歲]；疾病穩定組男29例，女14例，年齡10～59歲[(30.99±4.02)歲]；對照組男22例，女13例，年齡21～59歲[(41.23±4.01)歲]。三組性別、年齡比較，差異無統計學意義(P> 0.05)。

1.2 方法①分組方法：結核桿菌不復制或復制量很少，肺結核病灶無活動、空洞閉合，痰菌連續陰性(每月至少檢查一次)均>大于6個月為肺結核穩定期；存在發熱、咳嗽、咳痰、咯血或呼吸困難等癥狀且痰中查及結核菌，血沉增快，CT檢查提示兩上肺片狀滲出影或有空洞為肺結核活動期。②標本采集：采集晨起痰液并放置在無菌螺旋蓋痰瓶中，1500 r/min離心15 min后，上清液放置在低溫處保存待測，林格液沖洗沉淀物1次后進行細胞涂片，吉姆薩染色法對涂片進行染色，計算痰液中單核巨噬細胞總數，確保三組痰液回收量無明顯差異；痰液采集當日收集所有對象的晨起空腹外周肘靜脈血5 ml，常規離心分離血清留存待測。③痰液細胞和血清中MCP-1及IL-35水平檢測：酶聯免疫吸附法(試劑盒及儀器由上海西唐生物科技有限公司提供，其中MCP-1試劑盒型號為DCP00，IL-35試劑盒型號為BMS2017)測定三組痰液細胞和血清中MCP-1及IL-35水平。

1.3 統計學方法采用SPSS 20.0統計學軟件分析數據。計量資料兩組間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析及SNK-q檢驗；相關性分析采用pearson相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 疾病組、對照組痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平比較疾病組痰液細胞、血清中MCP-1表達水平高于對照組，IL-35表達水平低于對照組 (P<0.05)，且疾病組痰液細胞中MCP-1及IL-35表達水平高于血清中的水平(t=37.894、295.632，P<0.001)，見表1。

表1 疾病組、對照組痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達情況比較

2.2 不同年齡、性別的PT患者痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平比較不同年齡、性別的PT患者痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平比較，差異無統計學意義(P> 0.05)，見表2。

表2 不同年齡、性別的PT患者痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平比較

2.3 不同病情程度PT患者痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平比較疾病活動組痰液細胞、血清中MCP-1水平明顯高于疾病穩定組，而痰液細胞、血清中IL-35表達水平明顯低于疾病穩定組(P<0.05)；相關性分析顯示PT患者病情程度與痰液細胞、血清中MCP-1水平呈明顯的正相關(r=0.521、0.741，P<0.05)，但與痰液細胞、血清中IL-35水平呈明顯的負相關(r=-0.851、-0.980，P<0.05)。見表3和圖1，圖2。

表3 不同病情程度PT患者痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平比較

圖1 PT病情程度與MCP-1水平的關系 a.痰液細胞中；b.血清中

圖2 PT病情程度與IL-35水平的關系 a.痰液細胞中；b.血清中

2.4 痰液及血清中MCP-1、IL-35表達在PT病情診斷中的價值分析痰液及血清中MCP-1、IL-35聯合檢測診斷PT病情程度的靈敏度和準確度各為97.67%、94.34%，較痰液、血清MCP-1、IL-35各自檢測診斷的靈敏度(81.40%、72.09%)、準確度(84.91%、79.25%)明顯高，見表4。

3 討論

PT為呼吸道常見傳染病，我國為結核病流行最為嚴重的國家之一，年發病人數約為130萬，占全球總發病率的14.3%，近年來隨著國內對肺結核患者管理的松懈，導致耐藥PT患者日益增多，使得PT患者的臨床治療面臨著較大挑戰，PT早期診治成為臨床研究的重點[7]。近年來有研究[8]指出結核病發生、發展和轉歸與機體免疫功能降低有關，其中IL-35作為新發現的炎性抑制因子，其可抑制效應性T細胞并擴增調節性T細胞，負向調節機體的自身免疫反應以及慢性炎癥性反應，文獻[9]報道IL-35可對自身免疫性糖尿病進行長效防護，體外動物實驗同樣證實IL-35可有效增加機體的IL-10因子的分泌，明顯抑制IFN-γ的產生，有效改善機體炎性癥狀[10]，而對其在PT疾病進展中是否發揮重要調節作用尚未可知；MCP-1為趨化因子亞家族，其可吸引白細胞亞型至機體的炎性部位，在免疫反應中有重要調節作用，有研究[11]指出炎性部位的單核或巨噬細胞等，在結核分枝桿菌和其毒素作用下分泌MCP-1，并促進機體產生炎性反應，加劇病情進展。一直以來臨床上主要通過檢測PT患者血清中相關因子水平以評估疾病，而飛沫作為PT疾病傳播的主要途徑，考慮PT患者痰液中相關因子表達水平在PT病情預測中也有一定價值。

表4 痰液及血清中MCP-1、IL-35表達在PT病情診斷中的價值分析

本次分析結果顯示，疾病組痰液細胞、血清中MCP-1表達水平較對照組明顯高，IL-35表達水平明顯低于對照組，且疾病組痰液細胞中MCP-1及IL-35表達水平均明顯高于血清中的水平，PT發病過程中因感染結核分枝桿菌會引發機體局部損傷，導致機體內的單核巨噬細胞以及淋巴細胞等被過度激活，導致大量的炎性因子被釋放，因而痰液細胞和血清中MCP-1水平明顯升高[12]，此外PT病理過程中機體免疫功能受損，因而痰液細胞和血清中IL-35水平明顯降低，此外本分析結果發現痰液細胞中MCP-1、IL-35水平明顯高于血清，提示痰液細胞中MCP-1、IL-35水平異常表達較血清中更為靈敏。本分析結果還顯示，不同年齡、性別的PT患者痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平無明顯差異，提示PT患者的性別、年齡等對痰液細胞、血清中MCP-1及IL-35表達水平以及病情進展的影響不大；進一步分析結果顯示，疾病活動組痰液細胞、血清中MCP-1水平明顯高于疾病穩定組，痰液細胞、血清中IL-35表達水平明顯低于疾病穩定組，且相關性分析顯示PT患者病情程度與痰液細胞、血清中MCP-1水平呈明顯的正相關，但與痰液細胞、血清中IL-35水平呈明顯的負相關，由此說明痰液細胞、血清中MCP-1、IL-35表達水平與PT患者病情嚴重程度密切相關，兩者均可反映PT的病情程度；研究[13]發現，IL-35為白介素12的家族成員，可表達于多種細胞中，與Treg關系緊密，能夠抑制人效應性T細胞功能，此外在調節Th1、Th17等輔助性T細胞中有顯著作用，而隨著PT患者病情嚴重程度加重，機體免疫功能受損更為明顯，因此IL-35水平隨之顯著降低；在PT疾病活動期會出現急性炎性反應，機體內單核/巨噬細胞總數隨之明顯增高，由之分泌的MCP-1水平也顯著增高[14]，相較于穩定期明顯高，因此痰液細胞、血清中MCP-1水平可有效預測PT病情的嚴重程度，而具體機制尚需進一步研究證實。另外，本結果顯示痰液及血清中MCP-1、IL-35聯合檢測診斷PT病情程度的靈敏度和準確度各為97.67%、94.34%，較痰液、血清MCP-1、IL-35各自檢測診斷的靈敏度(81.40%、72.09%)、準確度(84.91%、79.25%)明顯高，說明痰液及血清中MCP-1、IL-35聯合檢測有望提高PT病情程度診斷價值。

基于以上分析，PT患者病情嚴重程度與痰液細胞、血清中MCP-1、IL-35表達水平密切相關，為PT早期病情監測提供理論依據。但本研究為回顧性分析且樣本量較少，研究結果或存在一定偏倚，未來進一步開展大樣本量、多中心前瞻性研究。