新型冠狀病毒感染者T淋巴細(xì)胞亞群的改變及動(dòng)態(tài)觀察

蔣 奕，胡 騰，司 果，劉 冰

(四川綿陽(yáng)四○四醫(yī)院 a.感染科，b.心內(nèi)科，四川 綿陽(yáng) 621000)

2019年12月以來(lái)，湖北省武漢陸續(xù)出現(xiàn)多起不明原因肺炎患者，目前已明確為新型冠狀病毒感染導(dǎo)致的病毒性肺炎，部分病例出現(xiàn)急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，甚至進(jìn)展致多器官功能障礙，病情進(jìn)展快，病死率較高。2020年2月7日發(fā)表在JAMA上的臨床研究顯示，138例新型冠狀病毒性肺炎住院患者中有26%需入住ICU，病死率高達(dá)4.3%[1]。T淋巴細(xì)胞是人體細(xì)胞免疫中重要組成部分，在病毒感染的免疫應(yīng)答中有著極其重要的作用，目前發(fā)現(xiàn)諸多疾病的發(fā)生發(fā)展均與T淋巴細(xì)胞亞群的變化相關(guān)。為了解COVID-19患者外周血 T淋巴細(xì)胞亞群變化及其意義，本研究對(duì)18例確診COVID-19患者的外周血T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測(cè)及動(dòng)態(tài)觀察，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料本院2020年1月21日至2月17日確診的18例成年新型冠狀病毒肺炎患者，診斷和臨床分型符合《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第五版)[2]。其中重癥及危重癥3例，普通型13例，輕型2例。男10例，女6例。年齡19～75歲[(39±19)歲]。選擇同期6例健康體檢者作為正常對(duì)照組，男4例，女2例，年齡19～51歲[(31±12)歲]。體溫正常，臨床癥狀明顯好轉(zhuǎn)，肺部影像學(xué)有明顯吸收者為好轉(zhuǎn)期病例。

1.2 檢測(cè)方法入院采集外周靜脈血2 ml。EDTA抗凝，行全血細(xì)胞分析(血常規(guī)檢查)及淋巴細(xì)胞分析。全血細(xì)胞分析采用日本Sysmex XE-210血細(xì)胞分析儀及原裝配套試劑。外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)采用Beckman FC500流式細(xì)胞儀及其配套試劑完成。運(yùn)行MultiSET程序檢測(cè)T細(xì)胞，進(jìn)行CD3+、CD4+、CD8+絕對(duì)值計(jì)數(shù)。CD4+計(jì)數(shù)正常范圍550～1 440個(gè)/μl，CD8+計(jì)數(shù)正常范圍320～1250個(gè)/μl。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)或Manu-Whitney-U檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 外周血白細(xì)胞及淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)18例COVID-19患者外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)大于10×109/L 2例(11%)，小于4×109/L 3例(17%)，正常者13例(72%)；淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)小于1.1×109/L 4例(22%)，正常者14例(78%)，平均(1.42±0.62)×109/L。其中3例重癥及危重癥患者淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)均低于正常值。

2.2 各組T淋巴細(xì)胞亞群、淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果比較COVID-19重型及危重型患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞、淋巴細(xì)胞與對(duì)照組比較明顯降低(P<0.05)，輕型和普通型患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。CD4+/CD8+比值三組之間比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組T淋巴細(xì)胞亞群、淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果比較

2.3 COVID-19重型及危重型患者急性期與好轉(zhuǎn)期T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果比較由表2可見(jiàn)，COVID-19重型及危重型患者在發(fā)病急性期，CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值相對(duì)于對(duì)照組減低(P<0.05)；好轉(zhuǎn)期與急性期各項(xiàng)指標(biāo)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 COVID-19重癥患者急性期與好轉(zhuǎn)期T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)結(jié)果比較 (%)

3 討論

2019年12月中國(guó)武漢出現(xiàn)的新型冠狀病毒性肺炎流行在國(guó)際上引起了廣泛關(guān)注，世界衛(wèi)生組織已證實(shí)其病原是一種新型冠狀病毒COVID-19，但目前致病機(jī)理尚不明確。部分患者發(fā)病后病情快速進(jìn)展，預(yù)后極為不良。通過(guò)對(duì)2003年的嚴(yán)重急性呼吸道綜合征(SARS)及之后多次流感疫情的研究，可以推測(cè)，宿主的免疫狀態(tài)可能是COVID-19感染臨床預(yù)后結(jié)局的決定因素。T淋巴細(xì)胞是免疫系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞免疫和免疫調(diào)節(jié)的主要工具，其發(fā)揮免疫應(yīng)答的過(guò)程中有賴(lài)于多種細(xì)胞因子的參與。《柳葉刀》在線發(fā)表一項(xiàng)研究顯示，在COVID-19感染患者中，多數(shù)存在淋巴細(xì)胞絕對(duì)值降低，尤其是T淋巴細(xì)胞降低，部分患者在體內(nèi)發(fā)生細(xì)胞因子風(fēng)暴，導(dǎo)致ARDS和多臟器功能衰竭[3]，所以T淋巴細(xì)胞的變化趨勢(shì)對(duì)病情的預(yù)后可能有重要的提示作用，T細(xì)胞各亞群的變化也許能敏感地反映新型冠狀病毒感染的狀態(tài)與程度。

本研究觀察了18例COVID-19確診患者，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，發(fā)病初期經(jīng)外周全血細(xì)胞分析，淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)下降的比例比白細(xì)胞總數(shù)下降的比例高，在重型及危重型患者中尤為明顯，表明這種新型冠狀病毒同2003年的SARS病毒(SARS-CoV)相似，對(duì)人體免疫系統(tǒng)的破壞具有嗜淋巴細(xì)胞的特性，其損傷機(jī)制可能與病毒對(duì)淋巴細(xì)胞的直接損傷、誘導(dǎo)凋亡、細(xì)胞因子介導(dǎo)免疫損傷、淋巴細(xì)胞分化障礙有關(guān)[4]。

從本研究結(jié)果看，COVID-19重型及危重型患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞與正常人比較均明顯降低，而輕型和普通型外周血CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞相比較對(duì)照組變化不大。說(shuō)明患者感染新型冠狀病毒后，其T細(xì)胞亞群的變化對(duì)病情輕重和預(yù)后的判斷可能有重要的參考價(jià)值。同時(shí)，CD4+/CD8+比值三組之間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明病毒對(duì)T淋巴細(xì)胞亞群的損傷沒(méi)有選擇性。

重癥及危重癥患者CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞絕對(duì)值在發(fā)病初期即有大幅度減低，說(shuō)明此類(lèi)患者在發(fā)病早期(一周內(nèi))細(xì)胞免疫功能急劇下降，下降的時(shí)間窗急，甚至先于癥狀和影像的出現(xiàn)，提示其在發(fā)病的早期即有顯著的甚至是非常嚴(yán)重的免疫抑制或破壞，這可能是加速其病情進(jìn)展的主要原因之一。

處于好轉(zhuǎn)期的重癥及危重癥患者，雖然體溫正常，臨床癥狀和肺部影像學(xué)均有改善，但外周血CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞與急性期相比較并沒(méi)有明顯變化。說(shuō)明雖然患者病情緩解，但其細(xì)胞免疫功能并沒(méi)有恢復(fù)。而SARS患者在感染2周后，其CD4+、CD8+細(xì)胞計(jì)數(shù)則開(kāi)始明顯回升，這可能是因?yàn)镾ARS-CoV感染機(jī)體后，T淋巴細(xì)胞在組織和外周血之間的分布發(fā)生可逆性的改變，導(dǎo)致外周血T淋巴細(xì)胞數(shù)量減少，隨著病毒的逐漸清除，T淋巴細(xì)胞重新從組織中釋放出來(lái)，回到外周血中，使得短時(shí)間內(nèi)外周血中T淋巴細(xì)胞數(shù)量能夠回升或恢復(fù)[5]。COVID-19患者外周血T淋巴細(xì)胞減少的機(jī)制尚不明確。其重癥患者持續(xù)細(xì)胞免疫功能低下，易導(dǎo)致繼發(fā)細(xì)菌、真菌感染，預(yù)后不良。但由于此組患者樣本量太小，其統(tǒng)計(jì)結(jié)果暫時(shí)是不確定的，須待大樣本試驗(yàn)進(jìn)一步明確。

本研究的意義在于，揭示了T淋巴細(xì)胞的變化對(duì)病情預(yù)警有重要的參考價(jià)值，同時(shí)在對(duì)COVID-19患者臨床救治中，給予免疫調(diào)節(jié)治療可能會(huì)減少“炎癥風(fēng)暴”發(fā)生的概率，這對(duì)于降低重型及危重型的死亡率具有重大意義。