草魚中硝基呋喃類代謝物AOZ 殘留量的測定

一、試驗部分

（一）儀器與試劑

1.儀器。液相色譜-質譜聯用儀（島津LCMS-8030）;超純水系統（WP-UP-YJ-20，沃特浦）；分析天平（Quintix 2102-1 cN，賽多利斯公司）；旋渦混合器（VORTEX 3，IKA 公司）；恒溫水浴振蕩器（江蘇安普SHA-C）；離心機（湖南湘儀H-2050R）。

2.試劑。甲醇（色譜純，默克股份兩合公司）；醋酸銨（分析純，天津市致遠化學試劑有限公司）；2-硝基苯甲醛（色譜純，天津市百世化工有限公司）；二甲基亞砜（分析純，天津市百世化工有限公司）；磷酸氫二鉀（分析純，天津市百世化工有限公司）；乙酸乙酯（分析純，天津市泰興試劑廠）；農藥標準物質均來自農業農村部環境保護科研監測所（天津）；試驗用水為經沃特浦超純水系統處理后的超純水。

（二）樣品處理

1.樣品水解與衍生化。準確稱取樣品2.0 g（精確至 0.01 g）到50 mL 離心管中，加入0.05 mL 的100 ng/mL 混合內標（AOZ-），旋渦混合50 s，再加入5 mL鹽酸溶液（0.2 mol/L）和0.15 mL 的2-硝基苯甲醛溶液（0.05 mol/L），渦旋振蕩50 s 后，置于恒溫水浴振蕩器中37 ℃避光震蕩16 h。

2.樣品的提取凈化。取出離心管冷卻至室溫，加入3～5 mL 磷酸氫二鉀溶液（1.0 mol/L），調節pH 值7.0～7.5，加入4 mL 乙酸乙酯，渦旋振蕩50 s，4000 r/min 離心5 min，取上層清液轉移至10 mL 玻璃離心管中；再加入4 mL 乙酸乙酯重復上述操作，合并上清液于40 ℃下氮氣吹干。加入1.0 mL 甲醇溶液〔甲醇：水為5：95（V：V）〕渦旋振蕩溶解殘留物，過0.45um 濾膜，待測。

3.溶液配制。分別取上述標準品（100.0 ug/mL 溶液），用甲醇稀釋成 10 ng/mL 和100 ng/mL 的標準儲備液。

分別吸取上述標準品10ng/mL 的標準儲備液0.010 mL、0.025 mL、0.050 mL、0.10 mL 和100 ng/mL 的標準儲備液0.025 mL、0.05 mL、0.10 mL 于7 個50 mL 離心管中，不加樣品，按照樣品水解與衍生化和樣品的提取凈化步驟操作，按照色譜-質譜條件測定。

（三）色譜-質譜條件

1.色譜條件。色譜柱：C18 柱（100 mm×2.1 mm，5μm ）；柱溫為40 ℃；進樣量為20μL。流動相A：0.002 mol/L 的醋酸銨溶液；流動相B：甲醇。色譜洗脫條件見表1。

表1 高效液相色譜梯度洗脫條件

2.質譜條件。離子源：電噴霧離子源ESI；掃描模式為正離子掃描；霧化氣流量3L/min；干燥氣流量15L/min；加熱塊溫度250 ℃；DL 溫度250 ℃；CID 氣230 kPa；IG 真空度1.9 pa；PG 真空度7.5 pa；檢測方式為多重反應監測。其他質譜參數見表2。

表2 反應監測的質譜采集參數

（四）添加回收試驗

準確稱取不含上述藥物的草魚樣品2.0 g，分別以2.5 mg/kg 和4.5 mg/kg 兩個水平進行添加回收試驗，重復5 次，按照上述試驗方法測定，計算添加回收率和相對標準偏差。

二、結果與討論

（一）線性回歸方程

AOZ 的基質標準曲線為y=0.217 700x-0.000 564 679（r=0.996 987 6，=0.993 984 3）。

（二）方法的準確度、精密度

在空白草魚中分別進行2.5 mg/kg 和4.5 mg/kg 兩個水平的加標回收試驗，每個水平重復測定5 次，計算加標回收率和相對標準偏差。由表 3 可知，在 2.5 mg/kg 和4.5 mg/kg 兩個添加水平下，AOZ 的平均回收率分別為99.648%和95.63%，相對標準偏差分別為8.43%和6.19%，方法顯示出良好的準確度和精密度，可以滿足試劑樣品中農藥殘留的檢測要求。

表3 AOZ在草魚中的回收率和相對標準偏差

（三）實際樣品分析

用本方法對市場銷售的2 份草魚進行硝基呋喃類代謝物AOZ 檢測，均未檢出。

三、結論

本研究通過對樣品前處理方法、質譜條件和色譜條件的優化，建立了液相色譜-串聯質譜法測定草魚中AOZ 殘留量的分析方法，該方法前處理簡單、快速、回收率高，方法的靈敏度、準確度和精密度等均滿足農藥殘留分析的要求，適用于大量樣品的快速檢測。