核固紅染液不同配制方法對含鐵血黃素染色的影響

李 莉，梁永波，陳 玲，劉玲玲，齊 華

含鐵血黃素染色是病理診斷技術(shù)中常用的方法。組織內(nèi)有出血時(shí)紅細(xì)胞被吞噬細(xì)胞吞噬，血紅蛋白在吞噬細(xì)胞中的溶酶體內(nèi)降解后形成棕黃色顆粒，即含鐵血黃素[1]。現(xiàn)階段在很多疾病的檢測中均采用含鐵血黃素檢測。含鐵血黃素細(xì)胞是特發(fā)性肺含鐵血黃素沉著癥診斷的特異性指標(biāo)[2]，有文獻(xiàn)對含鐵血黃素染色技術(shù)進(jìn)行改良[3]。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道配制1%核固紅染液[4]，核固紅溶解性較差，放置一段時(shí)間后無法染色。因此，作者對該方法進(jìn)行改進(jìn)，應(yīng)用不同的配制方法，減少了核固紅的用量，使核固紅染色液穩(wěn)定，染色亮麗，結(jié)果可靠，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料亞鐵氰化鉀、核固紅、硫酸鋁鉀、冰乙酸、二甲苯、無水乙醇等均購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司；鹽酸購于洛陽昊華化學(xué)試劑公司；含鐵血黃素試劑盒購于珠海貝索公司；Leica RM2245切片機(jī)、Leica HI1210撈片機(jī)、Leica HI1220烤片機(jī)；寧波舜宇EX31光學(xué)顯微鏡；永鑫科教通風(fēng)廚；上海上平分析天平等。

1.2 方法2%亞鐵氰化鉀：稱量2 g亞鐵氰化鉀溶于100 mL純化水中，過濾后，避光4 ℃保存；2%鹽酸：2 mL濃鹽酸加入98 mL純化水中，過濾后室溫保存。染色步驟：切片常規(guī)脫蠟至水；亞鐵氰化鉀與鹽酸鄰用前1 ∶1混合后滴于組織上染色20 min；切片水洗，核固紅8 min；水洗后，梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封固。

2 結(jié)果

2.1 1%核固紅染液染色根據(jù)相關(guān)資料配制1%核固紅染色液，對腎組織進(jìn)行染色，初配時(shí)染色正常(圖1)，染色亮麗。染液放置1周后再次進(jìn)行染色時(shí)，發(fā)現(xiàn)核固紅染色能力嚴(yán)重下降。組織只能染出藍(lán)色，紅色幾乎不顯示，出現(xiàn)核固紅不能染色的情況。

ABCD

2.2 染色液配方調(diào)整后染色對核固紅染液的配制方法進(jìn)行調(diào)整，共6個(gè)配方(表1)。按照表1中的不同配方進(jìn)行配置后對腎組織切片進(jìn)行染色，并以Baso含鐵血黃素染色試劑作為對照進(jìn)行染色。

不同核固紅配方染出的紅色效果差異較大，0.1%核固紅+1%冰乙酸(配方3)和0.1%核固紅+2%冰乙酸(配方4)核固紅染色強(qiáng)度減弱，鏡下觀察困難。1%核固紅+1%冰乙酸+1%乙醇組(配方6)，核固紅染色強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，但染色出現(xiàn)定位問題，胞核和胞質(zhì)均為紅色，界限不清，使觀察難度增加。0.1%核固紅+1%硫酸鋁鉀(配方1)、0.1%核固紅+5%硫酸鋁鉀(配方2)、1%核固紅+5%硫酸鋁鉀組(配方6)核固紅染色胞核和胞質(zhì)染色清晰，其中0.1%核固紅+5%硫酸鋁鉀組染色效果優(yōu)于其他組。不同核固紅配方，不影響含鐵血黃素(藍(lán)色)的染色，這可能主要是由于含鐵血黃素和酸性亞鐵氰化鉀發(fā)生反應(yīng)(圖2)。

ABCDEFG圖2 腎組織切片不同核固紅配方染色:A.Baso染色;B.配方1,染色正常;C.配方2,染色正常;D.配方3,染色強(qiáng)度減弱;E.配方4,染色強(qiáng)度減弱;F.配方5,染色正常;G.配方6,染色特異性差

表1 核固紅染色液的配制方法

3 討論

當(dāng)組織切片中出現(xiàn)黃棕色色素時(shí)，為了鑒別色素的種類，可以使用含鐵血黃素染色法。核固紅染色與其他染色聯(lián)用，可以更好的顯示組織結(jié)構(gòu)，有文獻(xiàn)報(bào)道核固紅和苯胺藍(lán)聯(lián)用對腎組織切片進(jìn)行染色，能更好的顯示腎臟的組織結(jié)構(gòu)[5]；改良的勞克堅(jiān)牢藍(lán)和核固紅染色對髓鞘染色效果較理想[6]。

有文獻(xiàn)表明使用微波加熱來減短含鐵血黃素的染色時(shí)間[7]，但很少有文獻(xiàn)研究核固紅的配制與染色方法。本實(shí)驗(yàn)通過核固紅染色液不同的配制方法來觀察核固紅的染色效果，發(fā)現(xiàn)0.1%核固紅+1%硫酸鋁鉀、0.1%核固紅+5%硫酸鋁鉀、1%核固紅+5%硫酸鋁鉀組核固紅染色胞核和胞質(zhì)染色清晰，核固紅染色亮麗，與對照組Baso染色效果相當(dāng)。其中0.1%核固紅+5%硫酸鋁鉀染色優(yōu)于其他組，核固紅染料濃度為0.1%，核固紅用量較少時(shí)便達(dá)到較好的染色效果，降低了染料的配制成本。