外周血CD4+T淋巴細胞亞群與自然殺傷細胞在非小細胞肺癌患者中的表達及臨床意義

鄭 奇，曾云芳，桂夢嵐，郭秀梅

(成飛醫院檢驗科，四川 成都 610092)

在二十世紀中葉以后發展中國家肺癌發病率和死亡率迅速增高，且居惡性腫瘤死因第一位[1]。我國肺癌發病率也是呈直線上升的趨勢，每年以11.9%的速度增長，男性多于女性，35～75歲多見，高峰為55～65歲[2]。吸煙是導致肺癌發生的主要誘因，此外大氣污染、職業危害等其他因素也可引起肺癌。肺癌分為小細胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)和非小細胞肺癌(non small cell lung cancer，NSCLC)，NSCLC占所有肺癌病例的85%以上。由于早期診斷手段不足，導致臨床診斷時大部分患者已為中晚期，因此NSCLC患者5年生存率低[3]。有研究表明，在機體抗腫瘤免疫過程中，細胞免疫是關鍵所在，而細胞的數量、質量的變化情況機體對腫瘤免疫監控異常的重要指標[4]。本文分析非小細胞肺癌患者中外周血CD4+T淋巴細胞亞群與自然殺傷細胞(natural killer cell，NK)表達以及其臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取本院2017年1月到2019年5月收治的94例NSCLC患者(觀察組)，男56例，女38例，年齡35～80歲[(55.21±6.15)歲]，體重指數(BMI)(19.53±2.89)kg/m2，所有患者經病理檢查，其中腺癌55例，鱗癌33例，未分化癌6例；出現淋巴結轉移51例，無淋巴結轉移43例；根據腫瘤分期，I～II期62例，III～IV期32例。納入標準：①經實驗室檢查、影像學檢查、臨床檢查等確診；②符合2010年NCCN肺癌國際分期標準[5]，經實驗室、CT檢查、纖維支氣管鏡、病理活檢等確診為I～IV期NSCLC患者；③知曉并同意本次研究。排除標準：①合并肺部疾病者；②臨床資料不完整，不配合本研究者；③合并血液疾病、精神病、溝通障礙者；④合并嚴重心腦血管、肝臟、腎臟疾病者；⑤合并其他惡性腫瘤者。選擇本院同期健康體檢者89例(健康組)，男51例，女35例，年齡39～77歲[(54.68±8.82)歲]，BMI(20.01±4.11)kg/m2，健康組均無相關肺部疾病，身體健康，無吸煙史。兩組基線資料比較，差異無統計學意義(P> 0.05)。

1.2 方法所有人在清晨空腹時進行靜脈外抽血采血5 ml，乙二胺四乙酸抗凝，備用。試劑：MultiTEST IMK 四色、免洗淋巴細胞亞群分析試劑盒(美國BD公司)。儀器：FACSCalibur 型流式細胞分析儀。過程：將100 μl抗凝全血放置在專門的流式試管中，并加入單克隆抗體(20 μl)，在充分混勻后靜置進行反應，注意避光儲存。按照說明書操作，將未標記的細胞以及紅細胞完全溶解。最后使用流式細胞術進行外周血CD4+T淋巴細胞亞群(Th1、Th2、Th1/Th2、Th17、Treg、Th17/Treg)及NK細胞的檢測。操作步驟嚴格按照儀器配套說明書進行。

1.3 觀察指標對所有患者進行2年隨訪，計算患者生存率。觀察不同人群、病理類型，臨床分期、淋巴結轉移、預后NSCLC患者外周血CD4+T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞表達情況。

1.4 統計學方法采用SPSS 23.0軟件分析數據。計量資料比較采用t檢驗；計數資料比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同人群外周血CD4+T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞表達情況比較觀察組NK細胞、Th1、Th1/Th2、Th17、Th17/Treg表達低于健康組，Th2、Treg表達高于健康組(P<0.05)。見表1。

表1 不同人群外周血CD4+T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞表達情況比較

2.2 不同病理類型NSCLC患者外周血CD4+T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞表達情況比較腺癌患者Th17、Th17/Treg表達低于鱗癌患者，Treg表達高于鱗癌(P<0.05)，見表2。

表2 不同病理類型NSCLC患者外周血CD4+T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞表達情況比較

2.3 不同臨床分期NSCLC患者外周血CD4+T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞表達情況比較I～II期患者NK細胞、Th1、Th1/Th2、Th17、Th17/Treg表達高于III～IV期患者，Th2、Treg表達低于III～IV期患者(P<0.05)，見表3。

表3 不同臨床分期NSCLC患者外周血CD4+T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞表達情況比較

2.4 有、無淋巴結轉移NSCLC患者外周血CD4+T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞表達情況比較有淋巴結轉移患者Th17、Th17/Treg表達低于無淋巴結轉移患者，Treg表達高于無淋巴結轉移患者(P<0.05)，見表4。

表4 有、無淋巴結轉移NSCLC患者外周血CD4+T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞表達情況比較

2.5 不同預后外周血CD4+T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞表達情況比較2年后94例患者中存活者62例，死亡32例；死亡組NK細胞、Th2、Th1/Th2、Th17、Th17/Treg表達低于生存組，Th1、Treg表達高于生存組(P<0.05)，見表5。

表5 不同預后外周血CD4+T淋巴細胞亞群、自然殺傷細胞表達情況比較

3 討論

肺癌嚴重的威脅到了人類的健康，而肺癌又以NSCLC占大多數。根據以往報道提出機體的免疫功能與NSCLC患者的病情發展與發生存在相關性，而細胞的免疫應答也是機體在抗腫瘤中重要的免疫機制[6]。T淋巴細胞可介導特異性細胞免疫，在腫瘤免疫的過程中發揮著重要的調控作用，大量的研究數據說明，在T淋巴細胞亞群數量、質量有異常后，會導致機體免疫紊亂并可連帶出現病理變化；NK細胞則對腫瘤有直接的殺傷作用，而近年研究也提出，NK細胞存在這較強的免疫調節功能[7，8]。

為效應T淋巴細胞的主要成員CD4+T淋巴細胞最初可分為Th1和Th2兩類亞群[9]。IL-2、INF-γ、腫瘤壞死因子等介導免疫反應由Th1分泌，可有效抑制腫瘤血管生成，誘導腫瘤細胞的凋亡等作用。Th2可分泌IL-4、IL-5、IL-13、IL-10進行免疫反應。兩者在正常的情況下相互制衡、調節，在炎性因子的調控下處于動態平衡的情況，但在機體出現病理變化后，會導致機體免疫功能遭到破壞，Th1、Th2平衡被破壞，導致機體出現免疫性疾病、腫瘤等[10]。

以往研究指出，在乳腺癌、肝癌、肺癌等多種惡性腫瘤中，Th1細胞表達均呈下降趨勢，而Th2細胞表達為增高趨勢，而兩者比值則下降[11]。本研究中，NSCLC患者Th1、Th1/Th2表達低于健康組，Th2表達高于健康組；I～II期患者NK細胞、Th1、Th1/Th2、Th17、Th17/Treg表達高于III～IV期患者，Th2、Treg表達低于III～IV期患者；死亡組與生存組NK細胞、Th1、Th2、Th1/Th2、Th17、Treg、Th17/Treg表達上也有明顯差異。目前研究發現，與Th1/Th2細胞亞群不同的是CD4+效應T淋巴細胞亞群，可產生出IL-17，因此被稱為Th17[12]。在臨床研究中表明此細胞因子可將中性粒細胞聚集在，從而誘導細胞釋放炎性因子，以此來達到調控機體免疫能力，控制疾病、腫瘤進展[13]。而Treg則可分泌出IL-4、IL-10、轉化生長因子-β等，對T淋巴細胞活化有抑制作用，在肝癌、卵巢癌、結腸癌等腫瘤中均出現異常增高的情況；在以往研究中[14]也證明Treg具有促癌因子作用，此外有研究發現在乳腺癌患者外周血中，其CD4+、CD25+細胞比列有異常增高，且腫瘤細胞的轉移、侵蝕、預后和Treg存在著明顯相關性[15]。

本研究結果中，NSCLC患者Treg表達高于對照組，Th17/Treg低于對照組，在NSCLC患者不同分期、病理分型、淋巴結轉移中發現，CD4+T淋巴細胞亞群表達各有特點，鱗癌、和無淋巴結轉移患者外周血中Th17/Treg比例增高，說明Th17/Treg和NSCLC患者的臨床分期、病理分型、淋巴結轉移有著密切的關系[16，17]，外周血CD4+T淋巴細胞亞群有著重要的免疫調節作用，各個亞群發揮著其相應的作用，而Th17/Treg、Th1/Th2是否處于平衡狀態對機體免疫功能的維持存在影響[18，19]。而NK細胞在活化后可發揮抗腫瘤效應，因此對腫瘤的發展有抑制作用，本研究中，NSCLC患者外周血腫NK細胞低于對照組；III～IV期患者低于I～II期患者，說明在腫瘤發展和病情進展中，機體的免疫能力減低，對腫瘤細胞出現免疫耐受的情況，特別是NK細胞功能，導致免疫功能有進行性下降。在熊佳時等[20]研究中也提出外周血 T 細胞亞群、NK 細胞與NSCLC患者臨床分期及預后的相關性，可反映出患者病情進展以及治療和預后，與本文研究結果一致。

綜上所述，外周血CD4+T淋巴細胞亞群(h1、Th2、Th17、Treg)、NK殺傷細胞在NSCLC的發展與發生中發揮著重要的作用，在一定程度上可反映出患者病情變化，對了解患者免疫機制有重要的參考價值。