針刺調控神經再生治療缺血性腦中風實驗研究的文獻計量學分析?

吳春曉，徐影珊，唐純志

(廣州中醫藥大學針灸康復臨床醫學院，廣州 510006)

缺血性腦中風會產生一系列氧化應激、炎癥以及興奮性氨基毒性等病理反應[1-2]，造成大量的神經細胞丟失以及損傷。神經元減少和損傷是導致神經功能缺損的主要原因，因此神經元的再生與修復是治療缺血性腦中風的關鍵。有研究表明，腦損傷后機體自身的神經元修復和增殖是有限的，內源性神經元的新增數量還不到腦損傷丟失的1%[3]，遠無法滿足腦損傷神經元的修復和補充。腦室區域的神經干細胞雖有分化增殖作用，然而在腦中風過程中分化出來的大部分是膠質細胞[4]，因此促進神經干細胞分化增殖為功能性神經元對治療缺血性腦中風具有重要意義。

研究表明，針刺治療能促進缺血性腦中風腦內神經干細胞的分化增殖，促進神經干細胞增生和轉化成功能性神經元，從而改善缺血性腦中風的神經功能缺損癥狀[5-6]。然而目前從針刺調控神經再生的機制研究中，發現針刺治療方法多樣、選穴各異，但未形成規范統一的方案。因此，本研究通過文獻計量學方法，將近年來針灸調控神經再生治療缺血性腦中風的文獻研究進行整理分析，以便了解目前實驗研究進展以及尋求最佳治療和選穴方案，為后續的基礎與臨床研究提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 文獻來源

通過Medline(OVID)、Embase(OVID)、Cochrane library、中國知網(CNKI)、重慶維普(VIP)、中國生物醫學文獻服務系統(CBM)、萬方7個數據庫進行文獻檢索，檢索時間從入庫至2019年1月10日。

1.2 檢索策略

針灸檢索詞(A):針灸、針刺、電針、頭針、毫針、火針、皮內針、耳針、針法、圓利針、手捻針、頭皮針、體針、溫針、長針、巨針、鋒針、鈹針、大針、穴位；有關缺血性腦中風檢索詞(B): 中風、卒中、腦血管、腦梗塞、腦梗死、腦栓塞、腦缺血、腦缺血再灌注；神經再生檢索詞(C)：神經再生、再生，檢索式為A and B and C。

1.3 文獻納入標準

針灸療法調控神經再生機制治療缺血性腦中風的實驗研究文獻；針灸療法主要為針刺(包括電針、手針、頭皮針等)。

1.4 排除標準

重復發表、臨床研究、綜述、系統評價、病例報道文獻等。

1.5 數據提取與統計

文獻篩查由2名研究者獨立執行，意見不同則由有經驗的第三者協商而定。采用Excel 2016版本將文獻相關信息進行提取，主要包括論文題目、發表年份、文獻類型、發表期刊、期刊類型、第一作者單位、基金資助、實驗動物種類以及性別、造模方法、選穴方案、擇經規律以及針刺方法。運用Excel統計功能將分類的相關信息進行綜合統計分析。

2 結果

2.1 文獻結果

圖1示，中外7個數據庫共檢索出462篇文獻，通過閱讀文獻和摘要篩除重復文獻152篇，綜述類文獻55篇，與主題不相關文獻108篇；剩余147篇下載全文進行閱讀，篩除重復文獻 6篇，會議摘要3篇，綜述類文獻6篇，干預方法非針灸3篇，研究對象非缺血性腦中風3篇，非動物實驗1篇，非神經再生機制69篇，最終納入56篇進入統計分析。

圖1 文獻篩查流程

2.2 文獻特征

2.2.1 年度發文 56篇文獻中，2016、2010年各7篇，2015年6篇，2013年5篇，2018、2014、2007、2006年各4篇，2011、2009年各3篇，2017、2008年各2篇，2012、2005、2004、2003、2002年各1篇。2001～2010年發文總量24篇，2011～2019年發文總量32篇。

2.2.2 文獻收錄類型 56篇文獻中，SCI期刊收錄16篇(28.6%)，CSCD期刊收錄14篇(24.5%)，中文核心期刊收錄2篇(3.5%)，科技核心期刊收錄8篇(14.03%)，普通期刊收錄2篇(3.5%)，學位論文收錄14篇(24.56%)。如雜志被多個數據庫收錄，按高一級數據庫為主進行統計，即SCI>CSCD>中文核心>科技核心>普通期刊。

2.2.3 發文文獻的單位情況(表1)

2.2.4 基金資助 56篇文獻中，共36篇(64.4%)文獻有相關基金的資助。其中國家級基金資助共20篇(國家自然科學基金19篇，973國家重點基礎研究發展計劃1篇)，省部級基金資助共20篇(省自然科學基金16篇，省科技計劃項目4篇)，廳局級基金資助共2篇(省中醫藥管理局2篇)，市級基金1篇，其他資金資助4篇。

表1 第一作者單位發表文獻分布情況比較

2.3 納入文獻的實驗特征

2.3.1 實驗動物 納入研究的實驗動物按品種統計，其中SD大鼠39篇，Wistar 大鼠15篇，C57BL/6 小鼠2篇；按動物性別分析，其中雄性動物49篇，雌性動物2篇，雌雄兼用3篇，未提及性別2篇。

2.3.2 造模方法 缺血性腦中風的動物模型制備方法主要為大腦中動脈堵塞模型(MCAO)，其中MCAO線栓法48篇，MCAO化學法4篇，MCAO(電凝法凝閉MCA)3篇，胡須體覺皮層局灶性腦缺血以及腦缺血缺氧模型各1篇。

2.3.3 主要觀察指標 納入文獻的觀察指標為調控缺血性腦中風相關的神經再生指標。其中以神經功能缺損癥狀為指標的有25篇，巢蛋白(nestin) 21篇，Brud 16篇，GFAP 15篇，GAP-43 12篇，動物行為學實驗7篇，PCNA、SYN、PSD、PSA-NCAM為指標的2篇，NeuN、MAP-2 4篇，Bdoublecortin(DCX) 5篇。

2.3.4 穴位選用 圖2示，納入56篇文獻中共涉及穴位28個，主要為14經經穴。從使用頻次看，使用頻次最高的為百會穴共38次，占總頻數的67.9%，其次為水溝穴19次(33.9%)，大椎16次(28.6%)，足三里13次(23.2%)，曲池10次(17.9%)，內關8次(14.3%)，關元和風府各4次(各7.1%),腎俞3次(5.4%)，氣海、肝俞、承漿、合谷各2次(各3.6%)，肺俞、心俞、膈俞、中脘、膻中、脊中、風隆、外關、地機、筋縮、頸夾脊、伏兔、手三里、頂顳前斜線、頂顳后斜線各1次(各1.8%)。

圖2 針刺調控神經再生治療缺血性腦中風的實驗選穴頻次圖

圖3 針刺調控神經再生治療缺血性腦中風的實驗研究擇經分布圖

2.3.5 擇經規律 圖3示，56篇文獻中共涉及9條經脈，選用經脈頻次依次為督脈44次，胃經13次，大腸經10次，心包經8次，膀胱經6次，任脈4次，脾經3次，膽經1次，經外奇脈1次。

2.3.6 治療方法 56篇文獻中，單純電針治療44篇，電針結合藥物治療8篇，剩余4篇為單純手針治療。

3 討論

3.1 文獻研究特征分析

從發文數量看，關于針刺對神經再生機制的研究集中在近10年期間，尤以近5年發文量較多，表明針刺調控神經再生機制治療缺血性腦中風為近年研究的熱點。統計納入分析文獻雜志的收錄情況，發現對于神經再生相關的研究，發表在SCI國際期刊者占據首位，發表在國內的文章也主要為核心期刊以上。據統計，發表在核心期刊以上期刊者占總納入文獻的82.47%，一方面表明關于針刺調控神經再生在缺血性中風領域的研究在國際上有較高的認可度，另一方面可為后續相關基礎研究提供較高質量的文獻證據支持。從發文單位看，主要集中在中醫院校及其附屬醫院，排名前三位的中醫院校為廣州中醫藥大學、北京中醫藥大學和黑龍江中醫藥大學，表明目前對于針刺調控神經再生機制的研究主要集中在中醫院校，而尤以廣州中醫藥大學在此方面研究最多。而綜合性西醫院校在神經再生領域也有所涉及，重慶醫科大學和皖南醫學院在神經再生機制研究領域發文量也較大，表明多學科交融能促進針刺機制的研究開展。在實驗研究資金資助方面，有64.3%的研究得到基金資助，其中國家級基金資助者占55.6%，位居第一位，其次為省部級的基金資助，表明國家近年來對于針灸機制研究進行了大力資助，保障資金來源充足，確保機制實驗順利開展。

3.2 實驗特征分析

3.2.1 模型動物選擇 納入分析實驗動物的文獻主要有SD大鼠、Wistar 大鼠、C57BL/6 3種動物，而96.4%的研究者選用大鼠作為實驗對象。選用大鼠制作缺血性腦中風模型的原因主要是大鼠價格較為低廉，腦血管解剖和生理功能近似人類，動物存活時間較長，且用大鼠制作缺血性腦中風MCAO模型與小鼠相比，造模成功率以及存活率均更高。大鼠的MCAO模型是目前國際上比較公認的研究缺血性腦中風的標準模型之一[7-8]。然而仍有少部分研究者采用小鼠進行模型制作。因為小鼠制作模型在后續取材、切片以及病理生化檢測方面也具有較好的優勢，特別對于轉基因型動物的研究尚需采用小鼠進行模型制作，提示運用小鼠進行MCAO的模型制作對于多角度、多層次研究針刺治療缺血性腦中風的機制也是一個新的發展趨勢。而對于動物性別的選擇，87.5%的研究者選用雄性，研究表明雌性動物由于雌激素的影響可能在腦代謝、行為學以及手術耐受性諸方面與雄性動物有所區別，對干預的結果可能有所影響，故大部分研究者采用雄鼠作為干預對象[9-10]。在缺血性腦中風模型的制作上，85.7%的研究者采用MCAO(線拴法)進行模型制備，這是由于線拴法具有損傷小、可重復性操作以及控制缺血和再灌注時間等優勢，實驗模型也較為穩定，而且能較近似地模擬臨床中風病的各種癥狀以及病理生理過程[11-12]。觀察指標方面主要檢測內源性干細胞以及突觸可塑性標志物，內源性神經干細胞主要以nestin、Brud、DCX、PSA-NCAM、GFAP為主要指標，突觸軸突的再生則以GAP-43、SYN、PSD為主要指標，此類標記物為研究神經再生的代表性指標。然而經過統計分析發現，對內源性干細胞神經再生轉化增殖為功能性神經元的檢測指標較少涉及，且在突觸重構及突觸功能相關指標研究方面也相對較為薄弱，后續的相關神經再生研究可重點關注此類標記物。

3.2.2 選穴擇經規律 根據統計分析，頭項部主要選用督脈穴位，其中百會、水溝、大椎為高頻選用穴位，軀體則選用足三里、曲池為多。督脈為陽經之海，統籌全身經脈氣血，《素問》中提及“督脈入屬于腦，絡腎”，與腦髓、腎均密切相關。督脈上通于腦，下聯通腎，將腎中精髓經督脈上輸于腦，濡養腦髓，協助腦絡生長修復，所以選用督脈穴位能促進缺血性腦中風神經細胞再生，故針刺督脈穴位可起到益精生髓、修復損傷的作用。而百會位于顛頂，為諸陽之會，可激發周身陽氣促進其生長和修復；水溝為任、督二脈交會之處，可調整陰陽平衡、填精益髓[13]。大椎則為手足三陽經與督脈交會穴，為陽氣的集中點，通過督脈統領協調經絡功能。有研究表明，該穴的配合運用，具有腦保護及促進突觸可塑性形成的作用[14-15]。足三里、曲池穴為陽明經合穴，缺血性中風由于氣血精氣不足，導致一側肢體偏癱痿廢，根據《素問·痿論篇》“治痿獨取陽明”理論，可選用足三里、曲池改善神經缺損癥狀，促進神經缺損功能的恢復。因此，百會、大椎、水溝、足三里、曲池均為治療缺血性腦中風的高頻用穴，可作為研究針灸調控神經再生治療腦中風相關機制的選穴依據。

3.2.3 針刺方法 納入的文獻中，78.6%的研究者采用單純電針作為干預手段。電針操作較手針規范、統一、可量化，能準確控制電流、電壓、頻率等參數，較好地控制干預方法的一致性。相關研究也表明，電針在改善神經功能缺損癥狀以及促進神經干細胞的分化增殖和突觸的重塑方面與手針相比具有一定的優勢[16-17]。因此，在促進神經再生方面的研究中，電針為首選針刺方法。

綜上，通過文獻計量學分析，總結了實驗動物類型、造模方法、選穴擇經以及針刺方法在神經再生領域研究的特點以及規律，即對于動物模型可選用MCAO(線栓法)，選穴擇經則可選擇高頻的督脈百會、大椎、水溝作為主穴以及配合軀體部高頻穴位足三里、曲池，而針刺方法則首選電針治療。通過上述總結的規律特點，可為后續針刺調控神經再生在治療缺血性腦中風方面的研究提供較為有效、規范化的選穴和治療方案。