淺談法醫(yī)物證DNA自動化檢驗(yàn)技術(shù)的有效運(yùn)用

張二偉 何 軍 桑志明 李曼曼

1.周口三川司法鑒定所，河南 周口 466000；

2.洛陽市公安局，河南 洛陽 471000

公安局可以快速破案離不開物證的支持，在到達(dá)案發(fā)現(xiàn)場后，首先技術(shù)人員會采集有效物證，并對物證進(jìn)行DNA檢測，通過檢測結(jié)果可以為偵破案件提供方向，更可以快速鎖定嫌疑人。基于此，檢測DNA物證時，選擇高科技檢驗(yàn)技術(shù)可有效提高結(jié)果可信度，為破案提供便利。在本次研究中對收集到的生物檢材進(jìn)行不同技術(shù)法（工作站-chelex法、手工-chelex法）檢驗(yàn)，并對不同技術(shù)法檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行對比分析，以下為詳情資料。

一、材料與方法

（一）檢測材料

隨機(jī)取2018年10月至2019年10月在各案件中收集的600份證物作為本次主要檢驗(yàn)對象，生物檢材包括血跡、毛發(fā)、組織、骨、煙蒂、指甲拭子、精斑，分別為230份、104份、62份、46份、76份、44份、38份。

（二）檢測方法

將精斑置入96個孔的U型板，當(dāng)精斑中混有女性上皮細(xì)胞時，應(yīng)先將其裂解，徹底去除女性上皮細(xì)胞，然后實(shí)施離心處理，取上清備用。血跡標(biāo)本：3-5根長3mm紗線，毛發(fā)：需帶有毛囊且長為3mm；軟骨樣本：1-2片厚為1mm肋軟骨切面；煙蒂：煙蒂需含三分之一圈口端煙紙；指甲拭子：3-5根長3mm紗線；精斑：3-5根長3mm紗線。

1.提取DNA

按照chelex流程提取DNA，將“DNA-chelex”自動提取程序裝載到freedom EVO 100-4工作站內(nèi)，嚴(yán)格按照流程使用工作站法、手工法提取受檢材料DNA。

2.PCR擴(kuò)增

按照PCR操作流程進(jìn)行，將“PCR-Chelex”自動程序裝載到freedom EVO 75-2工作站內(nèi)，構(gòu)建PCR反應(yīng)體系，擴(kuò)增使用儀器型號為AB-9700。

3.毛細(xì)管電泳檢測

按照STR操作流程進(jìn)行，將“STR-Chelex”自動上樣程序裝載到freedom EVO 75-2工作站內(nèi)，構(gòu)建PCR擴(kuò)增產(chǎn)物DNA變性、STR檢測體系，使用儀器為型號為AB3130。

（三）觀察指標(biāo)

①對比兩種檢測技術(shù)檢測結(jié)果。②當(dāng)樣品數(shù)為96、192時，檢驗(yàn)材料予以同板STR檢測，對比兩種檢測技術(shù)檢測時間。③取96份沒有關(guān)系的個體血斑樣本，以交叉形式放入96個孔的U型板中，余下96個空白孔，提取DNA后檢測STR，連續(xù)做五次，對交叉污染狀況進(jìn)行分析。

（四）統(tǒng)計學(xué)處理

研究取得資料經(jīng)統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS19.0進(jìn)行對比，檢測結(jié)果數(shù)據(jù)采用檢驗(yàn)?zāi)Ｊ綖榭ǚ剑瑱z測時間數(shù)據(jù)采用檢驗(yàn)?zāi)Ｊ綖閠計算器，P值結(jié)果＞0.05表示無差異，P值＜0.05表示有差異。

二、結(jié)果

（一）不同檢驗(yàn)技術(shù)檢測結(jié)果比較

手工-chelex法與工作站-chelex法檢測成功率比較并無差異，P＞0.05。具體數(shù)據(jù)，見表1。

表1 不同檢測技術(shù)檢測結(jié)果比較（%/份）

（二）不同檢驗(yàn)技術(shù)檢測時間比較

與手工-chelex法檢測時間比較，工作站-chelex法檢測時間較短，數(shù)據(jù)差異顯著P＜0.05，見表2。

表2 不同檢驗(yàn)技術(shù)檢測時間比較（±s，min）

表2 不同檢驗(yàn)技術(shù)檢測時間比較（±s，min）

樣本數(shù)量 工作站法 手工法 t P 48 3.4±0.8 5.2±1.2 5.581 ＜0.05 96 4.0±0.9 9.1±1.7 11.857 ＜0.05

（三）交叉污染狀況

本次研究中共連續(xù)做了五次交叉污染實(shí)驗(yàn)，在試劑空白孔內(nèi)并沒有檢測到臨近樣本STR分型，自動化工作在提取DNA時不會發(fā)生孔間交叉感染現(xiàn)象。

三、討論

DNA存儲著遺傳信息，在破案過程中DNA是重要證據(jù)，將在現(xiàn)場獲取重要證物交到法醫(yī)手中，法醫(yī)通過相關(guān)技術(shù)在證物中提取DNA，為案件破獲提供證據(jù)。想要保證DNA檢驗(yàn)準(zhǔn)確性，最關(guān)鍵的是提取DNA，DNA自動化檢驗(yàn)技術(shù)體統(tǒng)可以提取不同載體上DNA，在載體上提取DNA后進(jìn)行檢驗(yàn)，可為破案提供有效證據(jù)。

機(jī)體細(xì)胞較為穩(wěn)定，也就是說一個人機(jī)體血液、毛發(fā)等產(chǎn)生DNA圖形是一致的，這也為法醫(yī)檢測提供了便利，即使是最細(xì)微的肌肉、骨片等，利用先進(jìn)技術(shù)均可以提取到DNA，并與犯罪嫌疑人DNA進(jìn)行比對，不僅為破案提供了證據(jù)，更可以快速定罪。科學(xué)技術(shù)的提升，使得DNA分析技術(shù)也越來越完善，目前法醫(yī)使用的DNA分析技術(shù)甚至可以從多年前保存樣本中將DNA提取出來，現(xiàn)有DNA分析檢測技術(shù)多種多樣，可以分析不同時期細(xì)胞殘留。

在此研究中，對600份檢材分別使用工作站-chelex與手工-chelex方法，通過比較得知：雖然工作站-chelex法檢驗(yàn)成功率略高于手工-chelex法，但是并不具有統(tǒng)計學(xué)意義；與手工-chelex法比較，工作站-chelex法檢驗(yàn)花費(fèi)時間較短，且具有統(tǒng)計學(xué)意義；進(jìn)行交叉污染實(shí)驗(yàn)證實(shí)，DNA自動化檢驗(yàn)技術(shù)并不會產(chǎn)生孔間交叉污染。

雖然通過DNA自動化檢驗(yàn)技術(shù)系統(tǒng)可以提取DNA并進(jìn)行檢測，但是在實(shí)際中也會受到一些因素影響，一旦有異常勢必會影響檢測結(jié)果，一些證物收集極為不易、證物數(shù)量少等，一旦被損害，就失去了價值，為破案增加了難度，甚至使犯罪嫌疑人逃脫法律制裁。由此可見法醫(yī)在提取DNA時，應(yīng)嚴(yán)格按照DNA自動化檢驗(yàn)鑒定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作、控制物證保管等，更要強(qiáng)化對法醫(yī)培訓(xùn)、建立完善檢測制度、證物管理等制度，保證法醫(yī)物證DNA自動化檢驗(yàn)結(jié)果、保障檢驗(yàn)結(jié)果科學(xué)性、權(quán)威性。

總而言之，在檢驗(yàn)物證時，法醫(yī)可使用DNA自動化檢驗(yàn)技術(shù)系統(tǒng)，可及時為破案提供有效證據(jù)，利于案件破獲。