大鼠大網膜Ⅰ型乳斑和Ⅱ乳斑的免疫熒光研究

燕璐璐，丁洪華

（1.壽光市人民醫院放射科，山東 濰坊 262700；2.壽光市人民醫院肝膽胃腸外科，山東 濰坊 262700）

腹腔內大網膜素有“腹腔衛士”之稱，發揮腹腔內免疫功能的是大網膜上的乳斑[1]，大網膜乳斑是腹腔內免疫細胞的集合體，主要由巨噬細胞（ED1、ED2）、淋巴細胞等構成[2]，本實驗主要是通過免疫熒光實驗研究Ⅰ型乳斑和Ⅱ乳斑上的組成細胞在單位面積上的數量來說明Ⅰ型乳斑和Ⅱ乳斑在腹腔內的免疫功能，為進一步研究大網膜乳斑在腹腔內的免疫功能提供基礎資料。

1 資料和方法

1.1 實驗動物

選擇30只清潔級健康雄性SD大鼠，鼠齡7周，體重180～260 g，標準環境下飼養（常溫自由進食飲水），飼養一周無異常后開始實驗。

1.2 標本的制備

SD大鼠脫椎處死，取完整大網膜組織，完全平展于載玻片上，自然干燥3～4天，普通光學顯微鏡下每張標本標記Ⅰ型乳斑和Ⅱ乳斑各三處，使用1∶100稀釋的一抗4℃、24h處理大鼠網膜，再用二抗室溫孵育2h，完成免疫熒光染色。

1.3 免疫熒光顯微鏡的觀察

觀察每張標本上已經標記好的Ⅰ型乳斑和Ⅱ乳斑在10×40倍免疫熒光顯微鏡下每種細胞的數量計數。

1.4 統計學方法

實驗數據采用SPSS 11.5統計軟件處理，兩樣本均數的比較采用t檢驗，結果用±s表示。

2 結 果

生理狀態下Ⅰ型乳斑和Ⅱ乳斑ED1（142±7.5；3 7±3.3），差異有統計學意義（P＜0.0 5）；ED2（134±5.8；39±6.6），差異有統計學意義（P＜0.05）；淋巴細胞（155±11.2；14±2.9），差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

Ⅰ型乳斑和Ⅱ乳斑各細胞數量（±s）

Ⅰ型乳斑和Ⅱ乳斑各細胞數量（±s）

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3 討 論

乳斑最早由Von Reeklinghausen[2]在幼兔的大網膜和膈膜上發現的，大網膜在腹腔內發揮重要的免疫機制，幾乎都是用大網膜乳斑的免疫細胞來解釋。乳斑主要有巨噬細胞、淋巴細胞、單核細胞、漿細胞、嗜酸性粒細胞網狀細胞等構成，SHIMOTSUMA[3]等用免疫組化方法證實巨噬細胞47.5%，B淋巴細胞29.1%，T淋巴細胞11.7%。安偉德[4]等通過腹腔注射標記的癌細胞，標記的癌細胞在乳斑區和非乳斑區有明顯的差別，說明癌細胞具有特異性侵入乳斑的特性。

目前很多研究都集中在乳斑與癌細胞接種的研究，很少對乳斑自身的研究。Imai[5]等跟據離血管的遠近及其與大網膜上的脂肪的關系將乳斑分為兩型即Ⅰ型乳斑和Ⅱ乳斑。本研究表明：在生理狀態下Ⅰ型乳斑和Ⅱ乳斑在細胞的密度上存在明顯的差異，為乳斑的分型提供了更加可靠的客觀的依據。生理狀態下Ⅱ乳斑在細胞的密度明顯高于Ⅰ型乳斑，表明在生理狀態下Ⅱ乳斑發揮了更重要的免疫功能。

本課題對大鼠大網膜兩型乳斑三種主要細胞的數量及比例做了研究：Ⅰ型乳斑上各種細胞在單位面積上的密度遠遠小于Ⅱ乳斑各種細胞的密度，這樣在大鼠腹腔內發揮免疫作用方面Ⅱ乳斑強于Ⅰ型乳斑；Ⅰ型乳斑和Ⅱ乳斑上的三種細胞的構成比例基本相同，對于研究兩型乳斑之間是否具有同源性以及是否存在轉化關系提供了基礎資料。

大網膜乳斑是大網膜上的淋巴樣組織被認為是腹腔內巨噬細胞的來源[6]。本課題研究中發現無論是Ⅰ型乳斑還是Ⅱ乳斑其上的巨噬細胞都占有很大的比例進一步論證了大網膜乳斑是腹腔內重要的免疫組織。