三陰性乳腺癌患者BRCA1/2基因突變狀態及其臨床特征分析

王藝諾 金鋒

[摘要]目的 分析三陰性乳腺癌（TNBC）患者乳腺癌易感基因（BRCA）1/2的基因突變狀態及其臨床特征。方法 選取2017年4月～2019年4月期間我院收治的55例TNBC患者作為研究對象，對所有患者的病理組織切片采用逆轉錄聚合酶鏈反應（PCR）法和DNA序列測序法測定其BRCA1/2基因的突變情況。分析TNBC患者的BRCA1/2基因突變的特點，并根據是否存在基因突變，將其分為突變組和未突變組，比較分析兩組患者的臨床資料。結果 55例TNBC患者中共計檢測出9例BRCA1/2基因突變，突變總檢出率為16.36%;其中BRCA1基因突變6例，BRCA2基因突變3例。突變組和未突變組患者的年齡、月經狀態、腫瘤大小、病理類型、淋巴結轉移、臨床分期比較，差異無統計學意義（P>0.05）。突變組患者的乳腺癌家族史比例高于未突變組，差異有統計學意義（P<0.05）。結論 TNBC患者BRCA1/2基因突變的發生率較高，且BRCA1/2基因突變者的乳腺癌家族史的比例更高。

[關鍵詞]三陰性乳腺癌;乳腺癌易感基因;基因突變;臨床特征

[中圖分類號] R737.9 ? ? ? ? ?[文獻標識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1674-4721（2020）8（c）-0127-04

[Abstract] Objective To analyze the mutation status and clinic characteristics of breast cancer susceptibility gene （BRCA）1/2 in patients with triple-negative breast cancer （TNBC）. Methods From April 2017 to April 2019， 55 patients with TNBC treated in our hospital were selected as the research objects. Reverse transcription polymerase chain reaction （PCR） method and DNA sequence sequencing method were used to determine the mutation of BRCA1/2 gene on the pathological tissue sections of all patients. Analyze the characteristics of BRCA1/2 gene mutation in TNBC patients， and divide them into mutation group and non-mutation group according to whether there are gene mutations， and the clinical data of the two groups of patients were compared and analyzed. Results A total of 9 cases of BRCA1/2 gene mutation were detected in 55 patients with TNBC， including 6 cases of BRCA1 gene mutation and 3 cases of BRCA2 gene mutation， the total detection rate was 16.36%. There were no significant differences in the age， menstrual status， tumor size， pathological type， lymph node metastasis， and clinical stage between the mutation group and the non-mutation group （P>0.05）. The proportion of breast cancer family history in the mutation group was higher than that in the non-mutation group， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion The incidence of BRCA1/2 gene mutation is higher in TNBC patients， and the proportion of breast cancer family history in patients with BRCA1/2 gene mutation is higher.

[Key words] Triple-negative breast cancer; Breast cancer susceptibility gene; Gene mutation; Clinical features

乳腺癌是女性最為常見的惡性腫瘤之一，具有發病率高、死亡率高的特點，嚴重威脅女性的身體健康[1]。其中三陰性乳腺癌（TNBC）是一種特殊的乳腺癌亞型，是指孕激素受體（PR）、雌激素受體（ER）以及人類表皮生長因子受體-2（Her-2）三種受體均為陰性的乳腺癌[2]。TNBC在所有乳腺癌類型中的占比為10%～20%，其生物學行為和臨床病理特征均存在一定的特殊性，癌細胞的侵襲性強，遠處轉移的風險更高[3]。加上TNBC患者特殊的免疫組化分型，使得內分泌治療、靶向治療的效果不佳，因此患者的預后更差[4]。近年來，乳腺癌的高危篩查逐漸受到臨床的重視。乳腺癌易感基因1（BRCA1）和BRCA2是遺傳性乳腺癌的主要易感基因之一[5]。BRCA1/2基因突變者發生乳腺癌的風險遠高于未發生突變的人群。也有學者發現，BRCA1/2基因突變與TNBC的形成和發展有一定的關聯性[6]。因此了解TNBC患者的BRCA1/2基因突變狀態，對于其防治和預后評估均有積極的意義。本研究選取2017年4月～2019年4月我院收治的55例TNBC患者作為研究對象，探究分析其BRCA1/2基因突變狀態及與臨床特征的關系，以期為臨床診治提供一定的參考依據。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2017年4月～2019年4月我院收治的55例TNBC患者作為研究對象，均為女性，年齡68～25歲，平均（47.5±6.4）歲;美國癌癥聯合會（AJCC）的TNM分期[7]：Ⅰ期22例，Ⅱ期25例，Ⅲ期8例;病理類型分布情況：浸潤性導管癌28例，浸潤性小葉癌19例，其他類型8例。

病例入選標準：①經臨床診斷符合乳腺癌的相關標準[8]，并經病理學檢驗證實者;②免疫組化顯示ER（-）、PR（-）、Her-2（-）者;③臨床資料完整者;④自愿參與本研究，并簽署知情同意書者;⑤排除合并有其他惡性腫瘤者。

1.2方法

1.2.1逆轉錄聚合酶鏈反應 ?將55例TNBC患者的腫瘤組織經石蠟包埋處理后，采用QIAamp DNA FFPE的組織試劑盒（北京華夏遠洋科技有限公司，生產批號：20170351）進行提取其中的DNA。提取完后，將其作為模板，置于無菌PCR管中，進行逆轉錄聚合酶鏈反應（PCR）進行擴增，根據相關文獻合成引物。PCR體系總體積25 μl，其中模板DNA 100 ng，含Mg2+的10×PCR緩沖液（上?？道噬锟萍加邢薰?，生產批號：20170812）5 μl，10 mmol/L的dNTP（上海康朗生物科技有限公司，生產批號：20170509）0.8 μl、Taq DNA聚合酶（上海康朗生物科技有限公司，生產批號：20170525）2 U以及上下游引物各0.5 μmol/L。PCR條件：94℃條件下進行預變性，然后以94℃ 5 min、94℃ 45 s、57℃ 30 s進行30個循環。完成后在72℃條件下進行延伸10 min。

1.2.2 DNA序列測序 ?通過瓊脂凝膠對獲得的PCR產物進行電泳鑒定，確定單一亮條帶后進行純化回收，并應用DNA序列測序法對PCR產物進行正反向雙端測序。

1.2.3信息處理 ?將測序結果與GenBank的野生型序列進行對照，分析BRCA1/2基因的突變情況。根據人類基因組變異學會的規則對基因突變的堿基進行命名。并將基因突變的位點與ClinVar數據庫、BRCA Exchange數據庫進行比較，以明確是否為新的突變。

1.3觀察指標

分析55例TNBC患者BRCA1/2基因的突變情況，根據基因測序對比結果中是否存在基因突變，將其分為突變組和未突變組，比較分析兩組患者的臨床資料。

1.4統計學方法

采用SPSS 20.0統計學軟件進行數據分析，符合正態分布的計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，不符合正態分布者轉換為正態分布后行統計學分析;計數資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1 TNBC患者BRCA1/2基因的突變情況分析

55例TNBC患者中共計檢測出9例BRCA1/2基因突變，突變總檢出率為16.36%;其中BRCA1基因突變6例，BRCA2基因突變3例。1例BRCA1基因突變c.4779_4780delAC的缺失移碼突變為新發現的致病突變（表1）。

2.2 BRCA1/2基因突變與TNBC患者的臨床特征分析

突變組和未突變組患者的年齡、月經狀態、腫瘤大小、病理類型、淋巴結轉移、臨床分期比較，差異無統計學意義（P>0.05）。突變組患者的乳腺癌家族史比例高于未突變組，差異有統計學意義（P<0.05）（表2）。

3討論

TNBC患者的免疫組織分型特殊，由于ER、PR、Her-2三種受體的缺失，使其失去了相應的3個治療靶點，因此治療的難度高，預后不良[9]。而TNBC的發生發展是原癌基因、抑癌基因等多基因共同作用的結果。原癌基因突變后的激活、抑癌基因的突變或缺失，打破了細胞增殖的正常調控機制，使得細胞進入惡性增殖的狀態[10]。而BRCA1/2均是臨床公認的抑癌基因之一，能激活DNA損傷的修復并參與細胞周期的調控，從而抑制乳腺癌的形成。其中前者位于染色體chr17上，后者位于chr13上，兩者均與遺傳性乳腺癌的發生密切相關[11]。臨床數據[12]統計顯示，亞洲人群的BRCA1/2突變發生率在20%以下。本研究結果顯示，55例TNBC患者中共計檢測出9例BRCA1/2基因突變，突變總檢出率為16.36%，基本符合既往報道[13]。其中BRCA1突變6例，BRCA2突變3例，BRCA1突變的比例要高于BRCA2。所有的突變均為外顯子突變，有2例BRCA2和5例BRCA1突變均由于堿基的改變提前產生終止信號，通過截短蛋白或無義介導的mRNA衰變導致BRCA蛋白質正常生物功能的喪失，使其失活，進而影響受損DNA的修復，參與TNBC的形成[14]。BRCA1基因中的c.5470_5477delATTGGGCA突變在多個中國家族遺傳性乳腺癌、早發性三陰性乳腺癌患者中檢出，被認為是中國人群特有的致病變異，與家族遺傳性乳腺癌、卵巢癌發生發展相關[15]。同時，本研究還檢測出BRCA1基因中1個意義未明位點c.5402G>A，這一錯義突變，導致1801號氨基酸編碼由甘氨酸的密碼子突變為天冬氨酸，可能會影響蛋白結構或功能，但由于這種突變較為罕見，目前尚無足夠證據確定該變異致病性或良性。而BRCA1基因中c.4779_4780delAC突變在數據庫中暫無記錄，可視為新的突變位點，VEP生信注釋軟件預測該變異對蛋白質影響較大，并綜合受檢者具體情況，綜合判定該變異的臨床意義為可能致病。BRCA2基因的c.5164_5165delAG缺失移碼突變可能會影響BRCA2蛋白活性和功能，影響攜帶者罹患乳腺癌或卵巢癌[16]。BRCA2基因的錯義突變c.7975A>G不是常見人群的良性多態性，但目前臨床意義不明確。