呼吸道患病犬菌群組成及病因分析

解秀梅 蔣含偉 張麗芳 牛玉豐

（青海畜牧獸醫職業技術學院，青海湟源 812100）

寵物犬呼吸道疾病是臨床常見病、多發病，在寵物犬疾病中占很大比例，常因發病原因復雜[1]，很難做出確切的臨床診斷，給疾病治療帶來很大的困擾。若治療不及時或者不合理，加重病情而危及生命。因此，了解西寧地區寵物犬呼吸道疾病的發生原因和患呼吸道疾病的菌群組成，可以為西寧地區寵物醫院治療呼吸道疾病提供有利可行的科學依據，也可以提高寵主的防護意識，減少寵物犬呼吸道疾病的發生。

1 材料

1.1 研究對象

選取青海省西寧地區佰匯緣寵物醫院、好伙伴寵物醫院等相關醫院7家，在2018年2月至2018年6月內選取患有呼吸道疾病，并伴有明顯呼吸道癥狀，如咳嗽、流鼻涕或出現黃膿鼻涕的犬只，共92例作為研究對象。其中1歲以下病例67例，占總患病樣本的72.8%；1～8歲的病例25例，占總患病樣本的27.2%。

1.2 快速診斷試劑板

犬瘟熱（CDV）、犬副流感（CIV）、犬腺病毒感染（CAV）等相應的病毒病的抗原快速診斷試劑板均為韓國安捷動物診斷試劑有限公司生產。革蘭陰性細菌鑒定卡和革蘭陽性細菌鑒定卡購自于梅里埃生物科技有限公司。

1.3 培養基

増菌液選用LB液體培養基，制備方法：胰蛋白胨10g，氯化鈉5g，酵母粉10g，1000ml溶液，溶解后，調節PH值并高壓滅菌。進行細菌分離培養的培養基為LB固體培養基。配方：LB液體培養基1000ml，瓊脂粉20g。進行生化實驗時選用的是TSA培養基，購自杭州微生物試劑有限公司。

2 方法

2.1 樣本采集

采用咽拭子采集法，事先在專用咽拭子采集管中放入2ml無菌LB液體培養基。樣本采集時使用一次性無菌棉拭子進行咽部深層旋轉采集，采集的拭子迅速插入采集管中旋轉以利于細菌的洗脫，之后立即蓋緊蓋口。注意采集時棉拭子盡量避免接觸口腔和舌黏膜。收集的咽拭子標本立即放入-20℃的冰箱儲存。

2.2 病毒篩查

對未進行疫苗注射的犬只，按犬瘟熱（CDV）、犬副流感（CIV）、犬腺病毒感染（CAV）快速診斷試劑板的操作步驟進行呼吸道常見病毒病的篩查診斷。

2.3 細菌分離培養

取出儲存于冰箱的咽拭子培養基，放置于恒溫培養箱內進行細菌復蘇培養 4～8h，之后取增菌培養液接種于LB固體培養基，37℃培養18～48h。挑出分離培養結果為陽性的固體LB培養基，根據形成的菌落形態、大小等不同的特征，分別進行純培養；并進行革蘭氏染色鏡鑒。

2.4 菌種的鑒定

最后將純培養出的細菌接種于TSA培養基，后按MicroScan WalkAway-40（西門子公司）全自動細菌鑒定儀的操作要求和步驟，根據染色結果選擇相對應的革蘭陰性細菌或革蘭陽性細菌鑒定卡，進行細菌種屬鑒定。

3 結果與分析

3.1 病毒篩查結果

樣本經病毒快速診斷試劑板檢測，結果由病毒感染引起的呼吸道疾病有19例，具體情況如下表1。

表1 犬呼吸道病毒感染統計表

3.2 細菌的分離培養結果

92份病例樣本進行分離培養后，有13份未生長出菌落，其余79份都有不同程度的菌落形成，占總體病例的85.9%。對每份中形成的不同菌落進行計數，共計104株菌。有23個病例樣本分離到兩種或兩種以上菌株。

3.3 分離鑒定結果

將純培養的104株菌經過染色鏡檢后，確定革蘭陰性菌34株，革蘭陽性菌70株，經全自動細菌鑒定儀的鑒定，最終確定細菌種屬12種。其中葡萄球菌種類和數量較多，合計分離率為48.1%，其次是放射根瘤菌。主要呼吸道致病菌金黃色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌臭鼻亞種，分離率合計為15.3%。其具體分離情況和菌種生化結果見表。

4 討論與結論

從患呼吸道疾病的寵物犬來看，年齡幼小的犬較易發呼吸道疾病，其中1歲以內的幼犬發病概率和數量均較高，年齡較大的犬發生率較低，這可能與幼犬自身免疫力低下及氣管粘膜脆性有關[2]。其次，在西寧地區，幼犬的呼吸道疾病中病毒引起的感染不可忽視，其感染率達28.4%，其中犬瘟熱病毒感染比例最大，占幼犬病例的19.4%。而成年犬病毒感染發生極少。這可能與幼犬未能及時注射疫苗，且易受環境因素的影響而使呼吸道抵抗力下降有關[3]，而成年犬疫苗注射完全且抵抗力較強[5]。因此及時的疫苗免疫是防制幼犬呼吸道病毒感染的關鍵措施。

表2 分離鑒定菌株名稱及所占比例表

在呼吸道感染的總體病例中可以看到，病毒和主要致病菌感染占36.1%，其他原因如支原體、真菌、過敏等原因引起的更是少見[1、6、8]，而且犬呼吸道疾病易發生于氣候變化較大的早春晚秋[7]，這就意味著，犬呼吸道疾病大部分是由于環境發生改變，引起呼吸道菌群失調或條件性致病菌的大量繁殖而發病。因次，環境因素的刺激或改變是導致犬呼吸道疾病發生的主要原因。建議寵主在環境發生改變時采取相應的清潔、保暖等防護措施減少寵物犬呼吸道疾病的發生。

從患病犬呼吸道菌群分離的相對情況而言，除未分離出菌種的13份（占總病例的14.1%）病例樣本外，其余病例83.9%的病例都可分離出細菌，主要分離菌為葡萄球菌。肖焰[8]等調查研究發現犬瘟熱發病期細菌引起的呼吸道感染率達90%，這也說明犬呼吸道疾病中前期或后期都有細菌感染的參與。因此臨床用藥治療呼吸道疾病或繼發感染可偏抗革蘭氏陽性菌，尤其是葡萄球菌的抗生素。

在92例呼吸道感染病例中，有19例混合感染病毒性疾病，有23例病例分離出兩種及兩種以上的菌株，可見呼吸道疾病中通常是以混合感染的形式出現[9]，混合感染率達45.6%。因此臨床用藥不能忽視混合感染，若只使用單一抗生素可能達不到較好的治療效果[10]。呼吸道感染的細菌種類繁多，在呼吸道感染病例治療時，最好進行藥敏實驗，根據實驗結果選用合理的藥物，避免盲目用藥和濫用抗生素而導致耐藥性的急劇升高[11]。同時，還要結合其他綜合性的治療方法，如加強營養、加強護理等也是關鍵[12]。