東海縣2019-2020年羊口蹄疫和小反芻獸疫抗體檢測分析

閆穎穎 李艷陽 胡傳利

（東海縣畜牧獸醫站，江蘇東海 222300）

東海縣是畜牧大縣，養羊業在我縣的畜牧業中占有重要地位，口蹄疫和小反芻獸疫是危害養羊業的主要疫病，2016年～2018年，農業部將口蹄疫、小反芻獸疫都列為國家強制免疫病種，東海縣作為養殖大縣，積極做好這兩種疫病的疫苗免疫工作，調查研究表明，疫苗本身的質量、地區免疫程序、防疫注射人員的操作等多方面存在的問題導致疫苗免疫以后體內的抗體水平參差不齊，不能有效的保護動物群體[1]。免疫抗體檢測是評價疫苗免疫效果的常用方法，通過免疫監測，可以準確了解疫情動態，根據監測情況進行綜合免疫防控[2]。為了更好的預防和控制這兩種傳染病，本研究對我縣2019～2020年免疫羊群共計936份樣品進行抗體水平檢測，并進一步了解我縣的疫病防控情況以及存在的問題，提出相應的解決辦法及建議，為我縣的養羊業健康發展保駕護航。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 羊群疫苗免疫注射

由東海縣畜牧獸醫站提供的政府招標的強制免疫疫苗，于每年的春秋季安排動物防疫組織集中進行強制免疫接種。疫苗在儲存、運輸過程、使用全程冷鏈。具體接種方式為：口蹄疫疫苗每年春秋兩季集中免疫，1mL/只，肌肉注射，間隔28天進行二免；小反芻獸疫疫苗每年春秋兩季集中免疫，1頭份/只，皮下注射。

1.1.2 免疫羊群血清樣品采集

強制免疫結束以后，安排防疫人員采集血液樣品，分離血清待檢。所采集的樣品均來源于政府統一招標免疫的羊群。

1.1.3 檢測試劑

O型口蹄疫液相阻斷ELISA抗體檢測試劑盒（廠家：蘭州獸醫研究所）、小反芻獸疫阻斷ELISA 抗體檢測試劑盒（廠家：青島立見）。

1.1.4 儀器設備與器材

酶標儀（BIO-RAD iMark）、離心機（盧湘儀 TD 4）、恒溫培養箱（上海森信 HWS-250）、全自動高壓滅菌器（重慶雅馬拓SQ510C）、微型振蕩器（國華 ZW-A）。

離心管、移液器、一次性采血器等。

1.2 方法

1.2.1 血清樣品的采集方法

被檢羊頸靜脈采集全血3ml/只，室溫靜置2～3h以后，3000r/min離心5min，無菌分離血清，做好標記，置于-20℃冰箱待檢。

1.2.2 口蹄疫抗體檢測方法

根據國標GB T 18935-2018，采用液相阻斷ELISA方法，按照口蹄疫O型液相阻斷抗體檢測試劑盒說明書的操作步驟進行檢測。

1.2.3 小反芻獸疫抗體檢測方法

根據《小反芻獸疫阻斷ELISA抗體檢測技術要點及注意事項》（任立強2016），采用阻斷ELISA方法，按照青島立見小反芻獸疫病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒的說明書對待檢樣品進行檢測。

2 結果與分析

2.1 2019～2020東海縣羊O型口蹄疫免疫抗體檢測結果與分析（表1）

從表1可以看出，東海縣2019年春季羊O 型口蹄疫的免疫抗體合格率為71.74%，2019年秋季羊O型口蹄疫的免疫抗體合格率為94.35%，對比春季O型口蹄疫免疫抗體合格率提高了22.61個百分點，差異顯著（P＜0.05），2020年春季羊O型口蹄疫的免疫抗體合格率為90.11%，與2019年秋季相比，下降了4.24個百分比，但是同比增加了18.37個百分點，差異顯著（P＜0.05）。

從圖1中可以更直觀的對各個鄉鎮的羊群O型口蹄疫免疫抗體情況進行比較分析，可以看出，除開發區、洪莊鎮、溫泉鎮等少數幾個鄉鎮，其他多數鄉鎮羊O型口蹄疫的免疫抗體合格率穩步提高。從圖3可以直觀的看出，東海縣羊O型口蹄疫三次集中免疫抗體合格率上升趨勢明顯，顯著提高。

圖1 2019～2020年東海縣羊O型口蹄疫免疫抗體情況

2.2 2019～2020東海縣羊小反芻獸疫免疫抗體檢測結果與分析（表1）

通過表1可以看到，東海縣2019年春季到2020年春季羊群小反芻獸疫的免疫抗體合格率在逐步提高，2019年春季羊群小反芻獸疫的免疫抗體合格率為87.32%，2019年秋季羊群小反芻獸疫的免疫抗體合格率為88.91%，提高了1.59個百分點，2020年春季羊群小反芻獸疫的免疫抗體合格率為92.86%，同比和環比分別增加了5.54和3.95個百分點。

圖2 2019～2020東海縣羊小反芻獸疫免疫抗體情況

根據圖2顯而易見，只有石榴街道、平明鎮、曲陽鄉等幾個鄉鎮（街道）羊小反芻獸疫的免疫抗體合格情況不是特別穩定，忽高忽低，三次檢測情況，平明鎮的免疫抗體合格率連續下降，其余鄉鎮的抗體合格率逐次上升。

圖3 東海縣2019～2020羊O型口蹄疫和小反芻獸疫免疫抗體情況

圖3表明，2019～2020年東海縣羊O型口蹄疫和小反芻獸疫的免疫抗體合格率均達到農業部的強制免疫要求（70.00%以上），呈上升趨勢，東海縣羊小反芻獸疫三次集中免疫抗體合格率穩步提高，上升趨勢緩慢。羊O型口蹄疫免疫抗體合格率上升明顯，大幅提高。

表1 東海縣2019～2020年羊口蹄疫和小反芻獸疫免疫抗體情況

3 討論與分析

東海縣是畜牧養殖大縣，從2018年實行政府購買服務，本地區中小規模以及散養家畜家禽的集中免疫工作由動物防疫組織來承擔，通過對免疫抗體的檢測，一方面監測轄區內的動物疫病的免疫情況，指導疫病防控工作，另外一方面作為評價動物防疫組織工作的績效指標之一。

3.1 羊O型口蹄疫與小反芻獸疫疫苗免疫抗體檢測結果分析

3.1.1 羊O型口蹄疫疫苗免疫抗體檢測結果分析

東海縣2019～2020年春三次集中免疫羊O型口蹄疫的平均抗體合格率分別是74.18±15.92%、93.85±11.94%、90.88±19.63%，表明東海縣整體羊O型口蹄疫的免疫抗體水平整體在上升，2019年秋季免疫抗體水平較高，2020年春季的整體抗體水平略有降低，原因在于個別鄉鎮免疫抗體水平參差不齊而導致，這可能是由于每個鄉鎮（街道）的養殖場的防疫意識和免疫人員的操作技術有關。對比2019年春季全縣羊O型口蹄疫的免疫抗體水平，2019年秋和2020年春全縣羊O型口蹄疫的免疫抗體水平有大幅提升（P＜0.05）。

3.1.2 羊小反芻獸疫疫苗免疫抗體檢測結果分析

東海縣2019～2020年春三次集中免疫羊小反芻獸疫的平均抗體合格率分別是87.18±12.52%、89.95±11.17%、95.94±7.96%，小反芻獸疫免疫抗體水平逐次穩步提升，這反映了我縣小反芻獸疫的免疫程序合理，免疫操作技術規范，使得我縣羊小反芻獸疫的免疫取得了較好的效果。

3.2 影響羊O型口蹄疫和小反芻獸醫免疫抗體合格率的因素分析

3.2.1 疫苗因素

一方面，疫苗下發以后，個別的防疫人員保存不當，在高溫季節導致疫苗失去活性，從而導致動物免疫注射以后沒有抗體產生[3]。另一方面，免疫操作人員未按照疫苗使用注意事項操作，造成注射的疫苗沒有免疫效果[4]。

3.2.2 動物個體因素

第一、羊群的健康水平的影響。防疫人員在疫苗免疫接種之前，應先提前篩選老齡羊、身體較為瘦弱的羊和患病羊，對這些羊應禁止疫苗免疫接種[3]；第二、動物體內本身的母源抗體情況，在幼畜年齡過低，體內母源抗體水平較高時，注射疫苗，會產生中和反應，使幼畜不能產生自身抗體，同時體內母源抗體的水平也降低[1，5、6]；第三、其他的免疫抑制情況，免疫前，羊已經感染其他細菌或病毒，或使用抗生素等藥物，這個時候接種疫苗就會出現免疫抑制問題導致免疫效果不足[1]。

3.2.3 免疫操作過程中存在的問題

首先，免疫程序制定不合理，調查發現口蹄疫預防一次并不能達到很好的免疫保護作用，通常在免疫接種1個月后，需要進行第二次疫苗加強免疫接種，免疫人員縮短接種間隔期或者圖省事沒有進行強化免疫，導致機體抗體與后來的疫苗產生中和反應，從而影響到免疫效果[1，7]。其次，免疫操作不規范。疫苗免疫接種對技術操作人員提出了很高要求，防疫工作者在疫苗免疫時注射方法的不正確也會導致免疫失敗，例如注射部位、注射劑量掌握不準確，應該皮下注射的為了方便采用肌肉注射，隨意加減疫苗注射量等[1]。

3.3 結論

農業部對羊O型口蹄疫和小反芻獸疫的強制免疫要求是免疫后免疫抗體合格率大于70.00%，東海縣2019～2020年羊O型口蹄疫和小反芻獸疫的整體免疫合格率均高于農業部的標準，表明我縣在羊的疫病防控工作中取得了較好的成效，提高了易感動物的機體免疫能力，能夠有效的保護羊群抵抗O型口蹄疫和小反芻獸疫的發生與流行，降低我縣羊群發生O型口蹄疫和小反芻獸疫的風險。