氧化型低密度脂蛋白刺激小鼠足細(xì)胞后的氧化應(yīng)激效應(yīng)和機(jī)制研究

李鐸 章建娜 尤小寒 張驥 蘇震

足細(xì)胞損傷在許多腎小球疾病的發(fā)病機(jī)制中起重要作用，腎病綜合征和其他慢性腎臟病患者常出現(xiàn)脂蛋白的代謝異常，腎小球損傷的進(jìn)展過程中常發(fā)現(xiàn)致動脈粥樣硬化脂蛋白的沉積[1]。研究表明，氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，ox-LDL）可與轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）相互作用，增加內(nèi)皮細(xì)胞和系膜細(xì)胞的損害，引起細(xì)胞外基質(zhì)的聚集，促進(jìn)腎小球硬化的發(fā)生[2-3]。而氧化應(yīng)激被認(rèn)為在糖尿病腎病的發(fā)病機(jī)制中起重要作用。筆者前期研究發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病腎病的腎小球內(nèi)有不同程度的ox-LDL沉積，且沉積程度與足細(xì)胞裂孔膜上的重要結(jié)構(gòu)成分nephrin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，腎小球內(nèi)超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）的沉積與足細(xì)胞裂孔膜蛋白nephrin的表達(dá)呈正相關(guān)[4]。基于此，本研究擬通過體外實驗來探討足細(xì)胞受到ox-LDL氧化損傷刺激后的效應(yīng)和可能的機(jī)制，現(xiàn)報道如下。

1 材料和方法

1.1 試劑和儀器 LDL、無水CuSO4、足細(xì)胞培養(yǎng)的所有相關(guān)試劑以及鼠抗β-actin抗體均購自美國Sigma公司；PVDF膜（美國BioRad公司）；兔抗人Cu2+-ox-LDL抗體（Chemicon International Inc，美國）；結(jié)合辣根過氧化物酶的山羊抗兔抗體（美國Amersham Biosciences公司）；增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光試劑盒（ECL kit，德國Roche公司）；透析袋購自美國Spectrum Medical Industries公司；兔抗鼠nephrin抗體、小鼠抗paxillin抗體購自英國Abcam公司；小鼠抗synaptopodin抗體購自德國Progen公司；熒光標(biāo)記的phalloidin購自美國Molecular Probe公司；TUNEL檢測試劑盒購自德國Roche公司，兔抗絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）多克隆抗體、兔抗p-MAPK多克隆抗體、兔抗糖原合成酶激酶 3β（glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β）多克隆抗體、鼠抗 p-GSK-3β（Ser9）單克隆抗體購自美國Cell Signaling公司。

1.2 方法

1.2.1 小鼠足細(xì)胞的培養(yǎng) 條件永生性小鼠腎小球足細(xì)胞來自原代分離培養(yǎng)所得[5]。在33℃、20 U/ml γ-干擾素的培養(yǎng)條件下促進(jìn)足細(xì)胞增殖以獲取足夠的細(xì)胞數(shù)。在37℃、無γ-干擾素的培養(yǎng)條件下，在完全培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)14 d至其分化成熟后用于后續(xù)實驗[5]。

1.2.2 ox-LDL的制備和鑒定 用30 ml蒸餾水將48 mg無水CuSO4溶解后用一次性無菌濾器過濾，將LDL稀釋于無菌PBS溶液，終濃度為1 mg/ml，在分子截流量為6 000～8 000道爾頓的透析袋內(nèi)將3 ml LDL置于無菌PBS溶液內(nèi)于4℃透析去除EDTA。參照J(rèn)enkins等[6]的方法，3 ml LDL溶液和3 μl CuSO4溶液混勻后置于37℃恒溫箱內(nèi)，在空氣中氧化24 h，成為氧化后的LDL溶液，實驗之前新鮮配制。采用Western blot法鑒定制備的ox-LDL的特異性。

1.2.3 實驗分組 將條件永生性小鼠腎小球足細(xì)胞分別接種于面積為25 cm2（T25）的細(xì)胞培養(yǎng)瓶、包被膠原的載玻片中。在37℃、無γ-干擾素的培養(yǎng)條件下，采用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)14 d后分化成熟。成熟的足細(xì)胞分為6組：12 h對照組、12 h LDL 刺激組（終濃度為 50 μg/ml）、12 h ox-LDL 刺激組（終濃度為 50 μg/ml）、24 h 對照組、24 h LDL刺激組、24 h ox-LDL刺激組。單純用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的足細(xì)胞作為對照組。免疫熒光法和細(xì)胞凋亡檢測培養(yǎng)于載玻片上的細(xì)胞，提取培養(yǎng)瓶內(nèi)細(xì)胞的蛋白做蛋白分析。

1.2.4 nephrin和細(xì)胞骨架蛋白paxillin、F-actin表達(dá)檢測 采用免疫熒光法。將條件永生性小鼠腎小球足細(xì)胞接種于包被膠原的載玻片上，用4℃丙酮固定細(xì)胞后，Tris鹽酸緩沖液沖洗，Triton X-100進(jìn)行細(xì)胞通透后，1% FBS封閉，加入一抗4℃孵育過夜，陰性對照組以TBS代替。加入二抗于室溫下孵育1 h，二抗分別為相應(yīng)的山羊抗小鼠和山羊抗兔抗體，DAPI（1：1 000）染色細(xì)胞核。TBS沖洗后封片。在400倍的熒光顯微鏡下觀察并隨機(jī)選取10個視野，對視野內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)和陽性細(xì)胞數(shù)分別計數(shù)，計算兩者的比值即為陽性率。

1.2.5 細(xì)胞凋亡情況檢測 采用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated UTP nick-end labeling，TUNEL）法。取24 h各實驗組接種于包被膠原的載玻片上的足細(xì)胞，PBS清洗后，室溫下固定細(xì)胞1 h，3% H2O2-甲醇溶液封閉10 min，在冰上于0.1% Triton X-100及0.1%檸檬酸鈉溶液中通透蓋玻片2 min，然后蓋上玻片。按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，實驗重復(fù)3次，光鏡下每組至少觀察200個細(xì)胞，計數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)并計算百分率。

1.2.6 細(xì)胞SOD活性檢測 采用細(xì)胞超氧基團(tuán)介導(dǎo)的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinaminde adenine dinucleotide,NADH）氧化率來反映SOD活性，若SOD活性高，則NADH的氧化率下降。根據(jù)上述原理，參照Paoletti等[7]的方法，提取足細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)SOD。將12 h對照組及ox-LDL刺激組、24 h對照組及ox-LDL刺激組的細(xì)胞分別用冰的無菌PBS清洗后，加入250 μl 25 mmol/L的三乙醇胺-二乙醇胺（Tea-Dea）緩沖液后，收集細(xì)胞裂解液，4℃離心后取上清液。分光光度法檢測提取的足細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)SOD活性。依次加入800 μl Tea-Dea緩沖液，5 μl 7.5 mmol/L NADH 溶液，25 μl EDTA/MnCl2，100 μl稀釋后的樣品至水晶比色杯后，混合均勻，空白對照組以100 μl Tea-Dea緩沖液替代樣品。以空水晶比色杯調(diào)零點，分別記錄各組和空白對照組在340 nm波長下的吸收值，以此作為基線值，同時向各組分別加入 100 μl 10 mmol/L β-巰基乙醇，觀察并記錄吸光度變化值，共觀察24 min，每8 min記錄1次。重復(fù)實驗3次，第8分鐘相對基線值的吸光度變化值記為ΔA340。抑制率為各組ΔA340與當(dāng)次實驗中空白對照組ΔA340的比率，通過抑制率來計算SOD的活性。

1.2.7 細(xì)胞 nephrin及 MAPK、phosphor-p44/42MAPK（p-MAPK）、GSK-3β、phosphor-GSK-32（p-GSK-3β）表達(dá)檢測 采用Western blot法。各實驗組細(xì)胞加入蛋白提取液，于冰上裂解5 min后收集蛋白提取物并定量。變性、電泳、轉(zhuǎn)膜封閉后，加入一抗 nephrin、GSK-3β、p-GSK-3β、MAPK、p-MAPK；使用相應(yīng)的二抗室溫孵育1 h后，用ECL試劑盒發(fā)光、曝光、沖片。膠片掃描后，采用Image J軟件對條帶進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件。計量資料以表示，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ox-LDL特異性的鑒定結(jié)果 Western blot結(jié)果顯示，抗Cu2+-ox-LDL多克隆抗體與陰性對照、LDL、Cu2+-ox-LDL共同孵育后，僅Cu2+-ox-LDL泳道觀察到1條160 kd左右的條帶，證實Cu2+-ox-LDL制備成功，其特性不同于LDL。兔來源的免疫球蛋白IgG與Cu2+-ox-LDL孵育后，膜上也未觀察到任何條帶，表明該抗體具有特異性（圖1），進(jìn)一步證實制備的ox-LDL具有特異性。

圖1 ox-LDL特異性鑒定電泳圖（1：緩沖液，一抗為兔抗Cu2+-ox-LDL；2：Cu2+-ox-LDL，一抗為兔的 IgG；3：LDL，一抗為兔抗Cu2+-ox-LDL；4：配制的 Cu2+-ox-LDL，一抗為兔抗 Cu2+-ox-LDL）

2.2 ox-LDL刺激組、LDL刺激組、對照組足細(xì)胞nephrin和paxillin、F-actin表達(dá)比較 間接免疫熒光染色后，觀察到12 h對照組、LDL刺激組和ox-LDL刺激組的nephrin表達(dá)強(qiáng)度及部位未見明顯變化（圖2，見插頁）。24 h對照組的nephrin在細(xì)胞膜、足突和細(xì)胞的足突間連接上仍有表達(dá)，與12 h對照組相比nephrin強(qiáng)度未見明顯變化，LDL刺激組在足突上仍可觀察到nephrin少量表達(dá)，而ox-LDL刺激組在細(xì)胞膜、足突上均未觀察到nephrin表達(dá)（圖2，見插頁）。表明ox-LDL刺激小鼠腎小球足細(xì)胞24 h后導(dǎo)致足細(xì)胞正常表達(dá)部位nephrin的喪失。

圖2 氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激組、LDL刺激組、對照組足細(xì)胞nephrin表達(dá)比較（免疫熒光染色，×400）

足細(xì)胞骨架蛋白的觀察結(jié)果顯示，24 h對照組的paxillin在細(xì)胞質(zhì)和足突均有表達(dá)，LDL刺激后足細(xì)胞的paxillin強(qiáng)度和分布均未見明顯改變，ox-LDL刺激24 h后，足突上paxillin的表達(dá)消失，paxillin僅細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有表達(dá)（圖3，見插頁）。異硫氰熒光素標(biāo)記的phalloidin可染色F-actin。24 h對照組的F-actin沿細(xì)胞輪廓和足突有序分布；24 h LDL刺激組的染色強(qiáng)度降低，但F-actin沿細(xì)胞輪廓分布仍可見；經(jīng)ox-LDL刺激24 h后，未見足細(xì)胞中F-actin的正常分布，F(xiàn)-actin重新分布，結(jié)構(gòu)紊亂（圖3，見插頁）。提示此時足突的骨架蛋白發(fā)生重構(gòu)。

圖3 氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激組、LDL刺激組、對照組足細(xì)胞骨架蛋白paxillin、F-actin表達(dá)比較（免疫熒光染色，×250）

2.3 24hox-LDL刺激組、LDL刺激組、對照組足細(xì)胞凋亡情況比較 TUNEL檢測顯示，無論24 h對照組，還是24 h LDL和ox-LDL刺激組，均未觀察到足細(xì)胞核著色（即發(fā)生凋亡）（圖4，見插頁），陽性對照觀察到細(xì)胞核染色陽性。說明50 μg/ml的LDL和ox-LDL分別刺激24 h，均不足以完全激活足細(xì)胞凋亡通路，只引起足細(xì)胞nephrin表達(dá)下降等損傷性改變。

圖4 24h ox-LDL刺激組、LDL刺激組、對照組足細(xì)胞凋亡情況比較（TUNEL法，×100）

2.4 ox-LDL刺激組和對照組足細(xì)胞SOD活性比較 12 h ox-LDL刺激組、12 h對照組、24 h ox-LDL刺激組、24 h對照組比較，12 h ox-LDL刺激組的SOD活性最高，NADH的氧化抑制率為（22.77±5.29）%，和其它3組相比均有統(tǒng)計學(xué)差異（均P＜0.05），24 h ox-LDL刺激組的SOD活性較12 h ox-LDL刺激組下降，抑制率為（14.33±5.36）%，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P ＞0.05）（圖5），表明足細(xì)胞受到氧化刺激時會產(chǎn)生抗氧化能力，但若氧化刺激持續(xù)存在，抗氧化能力亦會逐漸下降。

圖5 氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激組和對照組足細(xì)胞超氧化物岐化酶（SOD）活性比較

2.5 ox-LDL刺激組、LDL刺激組、對照組足細(xì)胞nephrin及MAPK和GSK-3β信號通路情況比較 與12 h對照組相比，12 h ox-LDL刺激組、LDL刺激組足細(xì)胞nephrin表達(dá)水平無統(tǒng)計學(xué)差異（均P＞0.05），提示12 h后的足細(xì)胞的nephrin表達(dá)暫未受到刺激的影響。p-MAPK/MAPK、p-GSK-3β/GSK-3β兩組信號通路中，分別進(jìn)行比值比較后均未見統(tǒng)計學(xué)差異（均P＞0.05）（圖6-7），說明盡管足細(xì)胞受到不同刺激，但是12 h后的MAPK、GSK-3β的活性無明顯變化。

圖6 12 h氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激組、LDL刺激組、對照組足細(xì)胞nephrin及絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）和糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）信號通路蛋白表達(dá)電泳圖（1：對照組；2：12 h LDL刺激組；3：12 h ox-LDL刺激組）

24 h LDL刺激組與24 h對照組相比，nephrin表達(dá)水平略有下降，而24 h ox-LDL刺激組和其它兩組相比，nephrin表達(dá)水平降低（P＜0.05），表明足細(xì)胞受到ox-LDL造成的氧化刺激24 h可引起嚴(yán)重?fù)p傷，導(dǎo)致其正常的裂孔膜蛋白表達(dá)下降。同樣，與24 h對照組相比，24 h LDL刺激組的p-MAPK和MAPK比值、p-GSK-3β和GSK-3β比值均無統(tǒng)計學(xué)差異（均P＞0.05）；與24 h LDL刺激組和24 h對照組相比，24 h ox-LDL刺激組 p-MAPK和MAPK比值、p-GSK-3β和GSK-3β比值均明顯增高（均P＜0.05）（圖8-9），MAPK和GSK-3β信號通路在ox-LDL刺激24 h后被激活。

3 討論

圖7 12 h氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激組、LDL刺激組、對照組足細(xì)胞nephrin及絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）和糖原合成激酶3β（GSK-3β）信號通路蛋白表達(dá)水平比較（a：nephrin表達(dá)水平比較；b：p-MAPK和MAPK比值；c：p-GSK-3β和GSK-3β比值）

圖8 24 h氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激組、LDL刺激組、對照組足細(xì)胞nephrin及絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）和糖原合成酶激酶 3β（GSK-3β）信號通路蛋白表達(dá)電泳圖（1：對照組；2：24 h LDL刺激組；3：24 h ox-LDL刺激組）

在過量自由基和其他致氧因素作用下，沉積在血管壁上的血漿LDL的多價不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化，產(chǎn)生多種活性醛類，LDL載脂蛋白B中的賴氨酸殘基與活性醛結(jié)合發(fā)生化學(xué)修飾，形成的產(chǎn)物為ox-LDL。高脂血癥可以使ox-LDL在腎臟沉積、炎癥細(xì)胞浸潤、腎臟固有細(xì)胞增生和損傷、細(xì)胞外基質(zhì)積聚及泡沫細(xì)胞形成，直接或間接地導(dǎo)致腎小球硬化。因此，ox-LDL是腎小球硬化進(jìn)展的主要危險因素之一。近年研究發(fā)現(xiàn)，足細(xì)胞有攝取ox-LDL的受體[8]，對足細(xì)胞的損傷可能通過RhoA激酶1介導(dǎo)的脂質(zhì)自噬障礙[9]。筆者在前期研究中觀察到2型糖尿病腎病的腎小球內(nèi)存在氧化程度較重的ox-LDL沉積，且隨著ox-LDL在腎小球內(nèi)的沉積增加，足細(xì)胞的nephrin表達(dá)呈下降趨勢。在有較多SOD-1表達(dá)的腎小球內(nèi)，nephrin的表達(dá)相對增多。因此，本研究利用體外培養(yǎng)成熟的足細(xì)胞來觀察ox-LDL作用足細(xì)胞后造成的損傷及足細(xì)胞抗氧化的反應(yīng)，探討可能的機(jī)制。

免疫熒光和Western blot的結(jié)果表明，與LDL刺激組和對照組相比，50 μg/ml的ox-LDL刺激足細(xì)胞12 h后，nephrin的蛋白表達(dá)強(qiáng)度、在足細(xì)胞上的分布，骨架蛋白paxillin和F-actin的活性，MAPK、GSK-3β的活性都未見顯著變化，說明在50 μg/ml濃度的LDL、ox-LDL刺激下，12 h可能不足以造成足細(xì)胞損傷。以相同濃度的ox-LDL、LDL分別刺激足細(xì)胞24 h后，LDL刺激組nephrin表達(dá)有所下調(diào)，但骨架蛋白的分布未見明顯改變，p-MAPK/MAPK、p-GSK-3β/GSK-3β 均略有增加，但與對照組相比未見統(tǒng)計學(xué)差異；ox-LDL刺激組的上述指標(biāo)均發(fā)生了顯著變化，nephrin表達(dá)顯著降低，足突上骨架蛋白paxillin的表達(dá)消失，足細(xì)胞中phalloidin染色的F-actin發(fā)生了重構(gòu)，同時p-MAPK/MAPK、p-GSK-3β/GSK-3β兩組比值顯著增加，提示這兩條通路的激活可能參與足細(xì)胞的氧化損傷。TUNEL檢測結(jié)果顯示24 h未見凋亡細(xì)胞，證實24 h的50 μg/ml ox-LDL刺激尚不足以引起細(xì)胞凋亡，此時足細(xì)胞的損傷作用可能主要表現(xiàn)為裂孔膜復(fù)合體分子構(gòu)成的變化和足突結(jié)構(gòu)的重排。而使用80 μg/ml的ox-LDL作用于人的足細(xì)胞則可導(dǎo)致足細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的蓄積[10]。

MAPK 家族包括 c-Jun N-terminal kinase（JNK）、細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）和p38，是多種細(xì)胞外刺激（如生長因子）和周圍環(huán)境刺激改變細(xì)胞功能的通路[11]。MAPK信號通路涉及多種磷酸化級聯(lián)反應(yīng)，每一種或者單獨介導(dǎo)不同的信號事件或者與其它通路相連。本實驗所使用的特異性抗體針對的是MAPK通路中ERK1/ERK2，因此觀察的MAPK通路是ERK1/ERK2通路。而Hu等[12]的研究發(fā)現(xiàn)ox-LDL通過激活FAK/p38途徑引起足細(xì)胞損傷。ERK1/p-ERK2和ERK1/ERK2的比值在LDL刺激組無明顯變化，而在ox-LDL刺激組增加明顯，表明ox-LDL具有激活ERK通路的作用。

GSK-3最早系調(diào)節(jié)糖原合成酶和磷酸化的激酶而被發(fā)現(xiàn)。有兩種類型：GSK-3α和GSK-3β，兩者結(jié)構(gòu)高度相似，GSK-3可調(diào)控糖原代謝，并可調(diào)節(jié)多種底物的磷酸化。它的活性可被GSK-3α（ser21位點）和GSK-3β（ser9位點）磷酸化所抑制。本研究發(fā)現(xiàn)足細(xì)胞受ox-LDL刺激24 h后磷酸化的GSK-3β較其它兩組增強(qiáng)，GSK-3β活性受到抑制。研究發(fā)現(xiàn)，GSK-3β的活性與Fyn酪氨酸激酶的活性相關(guān)。Fyn的活性對于nephrin細(xì)胞內(nèi)段酪氨酸磷酸化具有重要調(diào)節(jié)作用。筆者推測，足細(xì)胞受到50 μg/ml的ox-LDL刺激24 h后，p-GSK-3β增加，造成活性下降，并可能導(dǎo)致Fyn的活性也下降，進(jìn)一步使nephrin磷酸化減少，引起nephrin表達(dá)下調(diào)。但這一推測仍需進(jìn)一步的深入研究才可能明確。

圖9 24 h氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）刺激組、LDL刺激組、對照組足細(xì)胞nephrin及絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）和糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）信號通路蛋白表達(dá)水平比較（a：nephrin表達(dá)水平比較；b：p-MAPK和MAPK比值；c：p-GSK-3β和GSK-3β比值）

細(xì)胞骨架是維持真核細(xì)胞生命活動的重要組成成分。細(xì)胞維持正常的形態(tài)、保持細(xì)胞彈性，在細(xì)胞黏著、識別和相互的“交流”中，細(xì)胞骨架的正常分布具有重要作用。ox-LDL刺激足細(xì)胞24 h后，不同細(xì)胞骨架蛋白的分布也發(fā)生異常改變，這可能是足細(xì)胞損傷后足突結(jié)構(gòu)發(fā)生改變、濾過屏障完整性受損的重要原因之一。Paxillin是分子量為68 kd的細(xì)胞骨架蛋白，在調(diào)節(jié)細(xì)胞的伸展和移行中起到重要作用。Paxillin的磷酸化依賴于GSK-3和ERK的雙重調(diào)節(jié)作用，而磷酸化對它的生物活性的調(diào)節(jié)至關(guān)重要[13]。本研究發(fā)現(xiàn)的ERK1/ERK2通路激活和GSK-3β活性下降，推測可能是造成paxillin磷酸化改變以及細(xì)胞骨架蛋白重構(gòu)的原因。

本研究還發(fā)現(xiàn)，暴露于ox-LDL刺激12 h后，足細(xì)胞的SOD活性會明顯增加，高出同樣條件對照組19.94%，而當(dāng)該刺激持續(xù)24 h后，SOD活性僅比對照組高7.3%。結(jié)合12、24 h時這兩個時間點的nephrin表達(dá)變化，再次肯定了筆者前期在2型糖尿病腎病患者腎活檢中發(fā)現(xiàn)的現(xiàn)象，即SOD活性增加可保護(hù)足細(xì)胞免受氧化刺激損傷；若氧化刺激持續(xù)存在造成SOD耗竭，則會打破抗氧化和氧化之間的平衡，最終導(dǎo)致足細(xì)胞受到損傷，并且引發(fā)裂孔膜蛋白喪失、細(xì)胞骨架蛋白重構(gòu)等一系列嚴(yán)重病理事件。

總之，本研究結(jié)果顯示，體外培養(yǎng)的足細(xì)胞受到ox-LDL的氧化刺激后，早期可引起抗氧化物質(zhì)SOD活性明顯增加，足細(xì)胞并不出現(xiàn)損傷，而隨著氧化刺激的持續(xù)存在，SOD的活性僅輕度升高，足細(xì)胞出現(xiàn)損傷，MAPK、GSK-3β兩條信號通路的激活可能參與導(dǎo)致nephrin表達(dá)下調(diào)和細(xì)胞骨架蛋白重構(gòu)這些病理事件的發(fā)生。