固相萃取-超高效液相色譜法測定菜籽油中的三種抗氧化劑

楊眉 宋明雄 業潤澤

摘? 要：本文建立了固相萃取結合超高效液相色譜測定糧油中的三種抗氧化劑（BHT、BHA、TBHQ）的方法。樣品經乙腈提取和C18固相萃取柱凈化，用全自動平行濃縮儀蒸干，用乙腈定容，過濾后進入高效液相色譜測定，外標法定量。結果表明，三種抗氧化劑線性關系良好（R>0.999），加標回收率為100.4%～100.8%，精密度RSD為1.53%～1.63%。本方法簡便快捷，結果更加準確，并成功應用于實際糧油樣品中三種抗氧化劑的測定。

關鍵詞：固相萃取-超高效液相色譜法;菜籽油;固相萃取;三種抗氧化劑

中圖分類號：TS227

作者簡介：楊眉，女，碩士，研究方向為糧油監測分析工作。

現如今加工業發展迅速，大部分食品及藥品中都含有人工合成抗氧化劑。其中，丁基羥基茴香醚（butylated hydroxyanisole，BHA）、二丁基羥基甲苯（butylated hydroxytoluene，BHT）和特丁基對苯二酚（tert-butyhydroquinone，TBHQ）是我國允許使用的三種食品中抗氧化劑。抗氧化劑作為食品添加劑，可以幫助對抗食品變質，防止油脂及制品、餅干、罐頭等含油脂食品的酸敗。經調查和統計研究，發現食品中添加抗氧化劑會導致人體患上前列腺癌等一系列相關疾病，因此對這三種抗氧化劑的使用有著一定的限制。近年來，對食品中抗氧化劑的分析檢測有不少研究報道[1-5]，隨著現代分析檢測技術的發展，目前多為氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜-質譜聯用法和液相色譜-質譜法等[6-8]。這些方法大多數涉及復雜的樣品前處理，操作比較復雜，耗費試劑較多，處理過程容易造成待測成分損失而使測定結果產生誤差，樣品量大時，耗費時間較多，難以滿足日常工作需要，因此尋求一個簡便而快速的測定這三種物質的分析方法十分有必要。本文在總結國內外各種分析方法的基礎上建立一種簡單實用，能夠同時測定糧油中BHA、BHT和TBHQ的方法，該方法簡便可靠，便于實驗室日常操作。

1 材料與方法

1.1 儀器

Ultimate 3000高效液相色譜儀：配有紫外檢測器和變色龍工作站，賽默飛世爾科技（中國）有限公司;C18色譜柱：250mm×4.6mm×5μm，美國安捷倫公司;Raykol Fotector Plus全自動固相萃取儀、Raykol EVA-60全自動氮吹平行濃縮儀：睿科集團股份有限公司;離心機：轉速不低于4 000r/min，北京時代北利離心機有限公司;分析天平：感量0.1mg和0.01mg，梅特勒-托利多。

1.2 主要試劑和材料

1.2.1 試劑

乙腈（色譜純）、甲酸（色譜純）、甲醇色譜純）、正己烷（分析純）、無水硫酸鈉（分析純）、BHA、BHT、TBHQ標準品均購于北京壇墨質檢公司。

1.2.2 材料

固相萃取柱：C18柱，2 000mg/12mL。

2 試驗部分

2.1 樣品前處理

提取：稱取1g新鮮滇雪菜籽油試樣（精確至0.01g）于50mL塑料離心管中，并添加5mL乙腈飽和正己烷溶液溶解樣品，振蕩10min后，靜置15min。再加入5mL正己烷飽和乙腈溶液渦旋提取6min，4 000r/min離心6min，樣品分層后，收集乙腈層于25mL試管中，再重復使用6mL正己烷飽和乙腈溶液提取2次，合并提取液，待凈化，同時做空白試驗。凈化過程：在C18固相萃取柱中裝入2.5g無水硫酸鈉，用5mL甲醇活化，再以10mL乙腈平衡萃取柱，棄去流出液，將之前合并的提取液上柱，棄去流出液后，再以5mL乙腈和甲醇的混合溶液洗脫，收集所有洗脫液于試管中，50℃氮吹至干。加入2mL乙腈定容，用0.22μm有機相微孔濾膜過濾，用于測定。

2.2 標準溶液的配制

2.2.1混合標準中間液

取三種抗氧化劑的單標，用乙腈稀釋。中間儲備液的濃度為1 000mg/L。中間儲備液在-20℃冰箱中冷凍保存。

2.2.2 工作標準溶液

取適量的混合標準中間液，依次稀釋成濃度為2.0mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L、10.0mg/L的工作標準溶液。

2.3 儀器方法

2.3.1 液相色譜方法

色譜柱：C18柱，柱長250mm，內徑4.6mm，粒徑5μm;流動性A：0.5%甲酸水溶液，流動相B：甲醇;洗脫梯度：0～2min，流動相A 45%，2～8min，流動相A從45%降至5%，8～14min，流動相A 5%，14～14.1min，流動相A從5%增至45%;柱溫：35℃;進樣量：50;檢測波長：280nm。

3 試驗結果和討論

3.1 標準曲線

以濃度為2.0mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L、10.0mg/L混標溶液，建立標準曲線，以峰面積對應各標準物質的質量濃度，進行線性回歸，試驗結果呈現良好的線性關系，相關系數均大于0.999，三種抗氧化劑的線性方程和色譜圖見表1和圖1～圖2。

3.2 方法精密度

配制濃度為8.0mg/L的三種抗氧化劑混合溶液，同條件下進樣7次得出RSD在1.53%～1.63%，7次平行試驗數據和色譜圖見表2和圖3。

3.3 樣品加標回收率

選擇新鮮的滇雪菜籽油作為樣品，檢測其中含有的BHA、BHT、TBHQ，試驗結果表明新鮮的滇雪菜籽油中未含有三種抗氧化劑。以此菜籽油為空白樣品基質，進行樣品加標試驗，測定回收率，平行測定4次，空白樣品加標回收率在100.4%～100.8%，結果見表4，色譜圖見圖4～圖6。

4 結束語

本文建立了固相萃取-超高效液相色譜法測定糧油中BHA、BHT、TBHQ三種抗氧化劑的方法，該方法前處理操作簡單方便，減少了有機溶劑的使用和接觸，回收率好（100.4%～100.8%），精密度高（1.53%～1.63%）、方便快捷，能滿足糧油樣品中三種抗氧化劑的檢測。

參考文獻：

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