血清ICAM-1、BCL2和Survivin檢測(cè)對(duì)評(píng)價(jià)急性白血病病理狀態(tài)及轉(zhuǎn)歸的價(jià)值

王建君，劉 瑩，徐憲偉，馮智坤，楊金花

急性白血病（acute leukemia，AL）是一種惡性克隆增殖性疾病，其復(fù)發(fā)率和病死率仍居高不下，尋找新的治療靶點(diǎn)提高療效是當(dāng)前的研究重點(diǎn)。目前，黏附分子在惡性腫瘤中的發(fā)病機(jī)制已經(jīng)引起人們的普遍關(guān)注。已有研究表明，急性白血病細(xì)胞表面黏附分子-1（intercellular adhesion moleculer-1，ICAM-1）表達(dá)異常在白血病發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。B細(xì)胞淋巴瘤/白血病2基因（B-cell lymphoa/leukemia-2，BCL2）和凋亡抑制基因Survivin是常見的凋亡調(diào)控家族中的成員，通過抑制細(xì)胞凋亡從而促進(jìn)細(xì)胞的存活與增殖，其中在多數(shù)腫瘤組織中高表達(dá)，包括急性髓系白血病 （Acute myeloid idleukemia，AML）。目前在急性白血病中ICAM-1與侵襲、轉(zhuǎn)移和增殖方面研究較多見，其與凋亡抑制基因BCL2和Survivin相關(guān)性研究少有報(bào)道。因此筆者采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)急性白血病患者化療前后血清ICAM-1，以及BCL2和Survivin表達(dá)情況，分析其與臨床病理特征的關(guān)系，探討其在急性白血病發(fā)生、發(fā)展中的機(jī)制，以期為臨床治療提供一定的參考。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象收集鄭州人民醫(yī)院血液科2015年1月—2018年12月67例急性白血病患者血液標(biāo)本。其中，男36例，女31例；年齡3～67歲，中位年齡30歲。急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL）34例，包括完全（CR）或部分緩解（PR）19例，未緩解15例；急性髓系白血病33例，包括CR或PR 18例，未緩解15例。具有高白細(xì)胞（WBC＞100×109/L）者40例，無高白細(xì)胞者27例；具有髓外浸潤29例，無髓外浸潤38例。診斷標(biāo)準(zhǔn)按照張之南等惡性血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)（第三版）。采用20例健康體檢合格者的血液作為對(duì)照組。

1.2 標(biāo)本采集分別于化療前后取靜脈血，分離血清，-20℃凍存，備測(cè)。

1.3 血清ICAM-1、BCL2和Survivin表達(dá)水平的測(cè)定采用固相夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），反應(yīng)體系為生物素-鏈親和素-辣根過氧化物酶（SAP），TMB顯色。試劑盒為法國Diaclone公司產(chǎn)品。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析，兩樣本均數(shù)間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。雙變量相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 白血病患者治療前血清ICAM-1、BCL2和Survivin表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系67例白血病患者血清ICAM-1、BCL2和Survivin在有髓外浸潤組別中的表達(dá)均高于無髓外浸潤組別，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）；ICAM-1、BCL2和Survivin表達(dá)與患者年齡、性別、白細(xì)胞計(jì)數(shù)均無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 白血病患者治療前后血清ICAM-1、BCL2和Survivin比較ALL血清ICAM-1、BCL2和Survivin表達(dá)水平在治療前和未緩解組中均顯著高于完全/部分緩解組和正常對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）；AML血 清ICAM-1、BCL2和Survivin表達(dá)水平在治療前和未緩解組中均顯著高于完全/部分緩解組和正常對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000）。ALL患者血清中ICAM-1、BCL2和Survivin在完全/部分緩解組高于正常對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），治療前和未緩解組中表達(dá)水平基本相同，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。AML患者血清中ICAM-1、BCL2和Survivin在AML完全/部分緩解組高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.000），治療前和未緩解組中表達(dá)水平基本相同，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表2。

2.3 白血病患者血清ICAM-1和BCL2、Survivin表達(dá)相關(guān)性Spearman相關(guān)性分析顯示：67例白血病患者血清ICAM-1和BCL2表達(dá)呈顯著正相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Rs=0.924，P=0.000）。ICAM-1和Survivin表達(dá)呈顯著正相關(guān)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Rs=0.771，P=0.000）。

表1血清ICAM-1、BCL2和Survivin與臨床病理特征的關(guān)系（±s，μg/L）

表1血清ICAM-1、BCL2和Survivin與臨床病理特征的關(guān)系（±s，μg/L）

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表2 ALL和AML治療前后血清ICAM-1、BCL2和Survivin表達(dá)比較（±s，μg/L）

表2 ALL和AML治療前后血清ICAM-1、BCL2和Survivin表達(dá)比較（±s，μg/L）

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3 討論

已有研究表明，急性白血病細(xì)胞表面黏附分子表達(dá)異常在白血病發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。ICAM-1屬細(xì)胞黏附分子免疫球蛋白超家族，其在多種惡性腫瘤如乳腺癌［1］、前列腺癌［2］、肺癌［3］中均高表達(dá)，提示腫瘤的進(jìn)展和預(yù)后不良。該研究結(jié)果顯示ALL和AML血清ICAM-1表達(dá)水平在治療前和未緩解組中均顯著高于完全/部分緩解組和正常對(duì)照組，ICAM-1血清水平在有髓外浸潤組別中高于無髓外浸潤組別。這一結(jié)果與以往文獻(xiàn)報(bào)道基本相似［4］。此外，該研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ICAM-1在白細(xì)胞計(jì)數(shù)>100×109/L組別表達(dá)高于計(jì)數(shù)小于白細(xì)胞計(jì)數(shù)<100×109/L組別，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這一點(diǎn)與以往大多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道不同［5］。可能與以下原因有關(guān)：（1）樣本量不同；（2）實(shí)驗(yàn)方法不同；（3）標(biāo)本來源不同。

BCL2是從濾泡性B淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)的一種癌基因，其定位于18q21上，能夠與促凋亡蛋白BAX結(jié)合形成復(fù)合物抑制細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)細(xì)胞的存活與增殖。研究表明，BCL-2在乳腺癌、食管癌、胃癌等腫瘤中高表達(dá)，并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［6-8］。國外有文獻(xiàn)［9］通過免疫組化方法證實(shí)，AML患者中BCL-2顯著高于對(duì)照組，并與患者預(yù)后密切相關(guān)。孫巨勇等［10］用RT-PCR和Western blot方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)急性髓性白血病初治組BCL-2蛋白及mRNA表達(dá)量顯著高于健康對(duì)照和緩解組。筆者研究結(jié)果與以往文獻(xiàn)報(bào)道基本一致。該研究還發(fā)現(xiàn)，BCL-2的表達(dá)在有髓外浸潤組別中高于無髓外浸潤組別，這說明BCL-2在急性白血病的發(fā)生發(fā)展過程中起著促進(jìn)作用。

Survivin屬于凋亡抑制蛋白家族的新成員，定位于17q25，是唯一與細(xì)胞周期密切相關(guān)的凋亡抑制基因，其在胚胎組織及腫瘤組織中有較高的表達(dá)，且其高表達(dá)提示腫瘤預(yù)后差。該課題采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)果顯示Survivin基因表達(dá)水平在治療前和無緩解組中顯著高于對(duì)照組，這一結(jié)果與任啟霞等［11］報(bào)道初治組及復(fù)發(fā)組中Survivin mRNA及蛋白表達(dá)量均高于緩解組較一致，這提示Survivin在白血病發(fā)生、發(fā)展起著重要作用，可以作為預(yù)后不良的因素之一。

該研究相關(guān)性分析顯示，ICAM-1與BCL2及Survivin表達(dá)均呈顯著正相關(guān)。通過查閱文獻(xiàn)筆者發(fā)現(xiàn)高表達(dá)的ICAM-1在參與腫瘤血管形成中扮演重要角色，該分子異常的高表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤與血管黏附性增加，并且刺激腫瘤內(nèi)部血管新生的能力，為腫瘤的浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)［12-14］。已有研究證明在腎母細(xì)胞瘤、結(jié)直腸癌等中BCL2能夠誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子的表達(dá)，并且促進(jìn)血管的形成［15，16］。研究表明Survivin和腫瘤血管內(nèi)皮生長因子密切相關(guān)［17］，并且與腫瘤微血管形成關(guān)系密切，其中甲狀腺癌中表達(dá)越高，腫瘤微血管密度越高［18］。筆者推測(cè)ICAM-1、BCL2和Survivin三者可能存在協(xié)同作用，共同促進(jìn)血管的形成，進(jìn)一步促進(jìn)白血病的發(fā)生發(fā)展。該文僅用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)方法得出上述結(jié)論證據(jù)尚不充分，因此，有必要在分子水平進(jìn)一步探討。此外，三者相互作用的機(jī)制可以作為后續(xù)的研究課題進(jìn)一步探討。