靶向配體DPE-PEG₂₀₀₀-TAT的合成

王姣?牟萍?李培峰

摘要：目的：將TAT修飾在DSPE-PEG2000-NHS長(zhǎng)鏈的末端，反應(yīng)合成靶向化合物DSPE-PEG2000-TAT，來(lái)提高藥物靶向性。結(jié)果：采用此方法能夠很好的制得功能性磷脂共軛化合物DSPE-PEG2000-TAT，并且操作簡(jiǎn)單，用時(shí)少，減少浪費(fèi)節(jié)約成本。

關(guān)鍵詞：穿膜肽;靶向配體

將藥物制成靶向制劑，不但可以提高藥物在腫瘤部位的濃度，使藥物的功效增大;還可以降低其他部位的血藥濃度，使藥物的副作用降低，從而使藥物的利用率大大增加[1]。細(xì)胞穿膜肽幾乎能夠穿過(guò)所有與之相接觸的細(xì)胞胞膜，并且對(duì)細(xì)胞膜沒(méi)有損傷作用[2]。最理想的方法是將靶頭與PEG長(zhǎng)鏈的末端相連，既可以起到長(zhǎng)循環(huán)的作用，又可以有效的靶向作用到腫瘤細(xì)胞[3， 4]。

1 試驗(yàn)方法

按照摩爾比為1：1的比例稱取功能化磷脂材料DSPE-PEG2000-NHS和TAT各2mg置于西林瓶中，加入2ml的無(wú)水DMF溶解，利用N-甲基嗎啉調(diào)節(jié)酸堿度至pH值為9.0。室溫?cái)嚢?6小時(shí)后轉(zhuǎn)移至透析袋中（MWCO， 3500 Da），用去離子水透析36小時(shí)，除去反應(yīng)溶劑，將樣品冷凍干燥后放于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 MALDI-TOF-MS測(cè)定

本試驗(yàn)通過(guò)MALDI-TOF-MS測(cè)定產(chǎn)物的分子量，進(jìn)而來(lái)確定產(chǎn)物。本試驗(yàn)使用2， 5-二羥基苯甲酸作為MALDI-TOF-MS法的基質(zhì)。結(jié)果見圖1。

如Figure 1 A和 Figure 1 B所示，DSPE-PEG2000-NHS的平均相對(duì)分子質(zhì)量約為2895.35 Da，反應(yīng)產(chǎn)物中DSPE-PEG2000-TAT的平均相對(duì)分子質(zhì)量約為4290.54 Da。

2.2討論

基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）簡(jiǎn)稱飛行時(shí)間質(zhì)譜常用于混合物、生物大分子的測(cè)定[5]。通過(guò)上述方法測(cè)得了DSPE-PEG2000-NHS與DSPE-PEG2000-TAT的平均相對(duì)分子質(zhì)量，由反應(yīng)路線可知，合成產(chǎn)物的分子量計(jì)算公式如下：MDSPE-PEG-TAT=MDSPE-PEG-NHS + MTAT-MNHS。DSPE-PEG2000-TAT與DSPE-PEG2000-NHS之間的分子量差約為1395.19Da，再考慮到發(fā)生合成反應(yīng)時(shí)有基團(tuán)-NHS離去，與TAT的分子質(zhì)量1555.16 Da相近而吻合，從而判定TAT與DSPE-PEG2000-NHS發(fā)生反應(yīng)的摩爾比例是1：1。

3.結(jié)果

本試驗(yàn)成功合成了一種靶向性載體材料DSPE-PEG2000-TAT，可將其修飾于脂質(zhì)體表面作為靶向分子，制備TAT修飾他莫昔芬與紫杉醇脂質(zhì)體。通過(guò)MALDI-TOF-MS對(duì)合成產(chǎn)物DSPE-PEG2000-TAT進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果符合實(shí)際操作的要求，可以證明本試驗(yàn)采用此方法操作簡(jiǎn)單，用時(shí)少，減少浪費(fèi)節(jié)約成本，能夠很好的制得功能性磷脂共軛化合物DSPE-PEG2000-TAT。

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通訊作者：牟萍