ApoA5基因多態性與2型糖尿病血管病變的相關性研究

馮 佳，齊 婷，王述進，左 紅

2型糖尿病是目前臨床最常見的全身代謝相關性疾病，主要是因為長期血糖升高，而出現胰島素抵抗，其中血管病變作為糖尿病最常見的并發癥，是引起糖尿病足、糖尿病相關心腦血管并發癥的主要原因[1]。一旦發生糖尿病血管相關病變，可能出現視網膜動脈、腎動脈、冠狀動脈及下肢血管等損傷，從而嚴重影響病人生活質量，甚至危及病人生命安全[2]。雖然目前對于2型糖尿病的相關研究已經較為深入，但針對2型糖尿病血管病變的基因層面的研究仍相對有限[3]。本研究采用聚合酶鏈反應(PCR)技術檢測載脂蛋白A5(ApoA5)-1131T>C基因多態性，探討其在正常人群、單純2型糖尿病病人以及2型糖尿病合并血管病變病人中的差異，以明確ApoA5-1131T>C基因多態性是否與2型糖尿病血管病變有關系，在分子層面探索2型糖尿病血管病變的危險因素，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2016年1月—2018年12月西安市第九醫院收治的2型糖尿病病人為研究對象，入組前病人均簽署入組同意書，本研究申報醫院倫理委員會批準，診斷符合2015年中華醫學會內分泌分會關于2型糖尿病及糖尿病血管病變診斷標準，年齡18～60歲；排除合并惡性腫瘤、肺部感染、結核、免疫系統疾病、入組前30 d內使用免疫抑制劑或糖皮質激素、精神疾病、妊娠及哺乳期女性、無法配合檢查與治療者。A組(85例)為2型糖尿病合并血管病變者，B組(86例)為單純2型糖尿病者，C組(85名)為正常健康人。3組性別、年齡等一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 3組一般資料比較

1.2 PCR反應引物及測序 本研究ApoA5-1131T>C基因檢測引物均由上海生物工程技術有限公司提供。其引物序列為上游：5 ′-GCTGGGCTGTTGATGTTTAGA3′，下游：5′-AGAGGCAAGGTTTTCCCATAA3′。測序由chromas軟件經ABI3730自動測序儀進行。

1.3 ApoA5基因結果判斷 ApoA5-1131T>C基因蛋白的主要表達產物位于細胞漿和細胞核中，并以出現黃色或棕褐色染色者評定為陽性，同時依據陽性細胞出現的百分率及染色顏色深度行半定量分析。染色強度分為4級，其中無色者評定為0分，淡黃色者評定為1分，棕黃色者評定為2分，棕褐色者評定為3分，所有結果均以高倍鏡視野，隨機留取500個腫瘤細胞進行評定，無陽性表達或陽性表達細胞數在5%以內者為陰性，其余評定為陽性。

1.4 觀察指標 首先進行ApoA5-1131T>C位點Hardy-Weinberg平衡檢驗，隨后了解ApoA5-1131T>C在3組的基因型及等位基因分布情況，并觀察是否發生2型糖尿病及是否發生血管病變(未發生為0，發生病變為1)與ApoA5-1131T>C基因(CC、CT、TT基因型)間是否存在關聯，分析2型糖尿病及糖尿病血管病變與ApoA5-1131T>C基因型的相關性，統計3組ApoA5-1131T>C基因型分布頻率。分析2型糖尿病及糖尿病血管病變與ApoA5-1131T>C基因型分布的相關性。

2 結 果

2.1 2型糖尿病及糖尿病血管病變病人ApoA5-1131T>C基因型分布 2型糖尿病病人和2型糖尿病血管病變病人中CT及TT基因型多于CC基因型(P<0.05)。詳見表2。

表2 各組ApoA5-1131T>C基因型分布 單位：例(%)

2.2 不同ApoA5-1131T>C基因型發生2型糖尿病血管病變的多因素Logistic回歸分析 以發生2型糖尿病血管病變為因變量，行多因素Logistic回歸分析發現，ApoA5-1131T>C基因型CT及TT基因型為發生2型糖尿病血管病變的獨立危險因素。詳見表3。

表3 不同ApoA5基因型發生2型糖尿病血管病變的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

隨著人們生活水平的提升及生活方式的改變，糖尿病的發病率明顯升高，尤其是2型糖尿病[4]，其發病存在年輕化、復雜化趨勢，病人的死亡率與致殘率均明顯升高[5]。2型糖尿病血管病變作為最常見及最嚴重的并發癥，對病人全身血管均造成嚴重影響。以往研究證明，糖尿病大血管病變存在多種影響因素，如血脂水平、血糖控制情況、攝入食物種類、家族遺傳、種族、環境、生活習慣等[6]，其中家族遺傳、種族情況等與遺傳基因密切相關[7]。但目前針對2型糖尿病血管病變基因的相關研究資料極少[8]。ApoA5被認為是與血糖水平變化最為相關的基因之一[9]。

本研究針對2型糖尿病及糖尿病血管病變與ApoA5-1131T>C基因型分布進行相關性研究發現，2型糖尿病病人和糖尿病血管病變病人ApoA5-1131T>C基因型分布為CT及TT基因型多于CC基因型。提示ApoA5-1131T>C基因突變者發生2型糖尿病及糖尿病血管病變的概率明顯增加。針對不同ApoA5-1131T>C基因型發生2型糖尿病血管病變的多因素Logistic回歸分析發現，CT及TT基因型為發生糖尿病血管病變的獨立危險因素。說明2型糖尿病病人存在CT及TT基因型者，其發生血管病變的概率增加。

ApoA5-1131T>C基因位于11q23，全長1 889 bp，主要編碼ApoA5[10]。以往研究證明，ApoA5與血脂水平調節存在密切相關性，同時亦與血糖調節存在一定關系[11]。考慮可能與通過ApoA5增強低密度脂蛋白活性，抑制ApoB和ApoC3活化[12]，促進極低密度脂蛋白清除有關，同時有研究提示其與冠狀動脈粥樣硬化的發生發展亦存在相關性[13]。另外，針對ApoA5-1131T>C基因多態性的研究提示，ApoA5-1131T/C基因多態性是最為重要的基因型改變。2型糖尿病病人有很強的遺傳異質性[14]，且ApoA5-1131T>C基因多態性與2型糖尿病血管病變存在更為密切的關系[15]。

綜上所述，ApoA5-1131T>C基因多態性與2型糖尿病血管病變密切相關，存在ApoA5-1131T>C基因缺失或突變者發生血管病變的概率更高。