邁瑞全自動化學發光免疫分析儀檢測梅毒螺旋體抗體結果分析

宋 燕 劉金玲 王 兵

根據全國法定傳染病疫情概況顯示，2018年梅毒發病人數在甲、乙類傳染病中排名位居第3位，是發病人數最高的性傳播疾病[1]。鑒于梅毒可通過血液傳播，因此有創檢查及手術等操作前，有必要進行梅毒感染情況篩查[2]。

實驗室常用的梅毒篩查手段主要針對梅毒螺旋體(treponema pallidum，TP)感染機體后產生的兩種抗體進行檢測，即梅毒特異性抗體和梅毒非特異性抗體。其中梅毒特異性抗體一旦產生，可持續甚至終身陽性，常用于梅毒感染狀態的篩查。針對特異性抗體常用的檢查方法包括化學發光法(CMIA)，酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(TPPA)等，其中化學發光法因敏感度高、檢測速度快等優點使得其更易在臨床實驗室推廣應用[3～6]。

目前各醫院檢驗科CMIA法檢測TP抗體多使用進口儀器，國產儀器檢測TP抗體的相關文獻報道較少。航天中心醫院檢驗科2019年6月份開始使用邁瑞全自動化學發光免疫分析儀CL6000-i檢測TP，現將2019年6月～2020年1月份的相關數據進行整理分析。

對象和方法

1.研究對象：選取2019年6月～2020年1月在航天中心醫院進行TP抗體檢測的樣本23298例，其中男性10305例，女性12993例。23298例研究對象包括體檢人群2201例，皮膚性病患者145例，門診患者9880例，內科住院患者7983例，外科住院患者2856例，圍產孕婦233例。

2.試劑和儀器：采用邁瑞全自動化學發光免疫分析儀CL6000-i及相配套TP抗體檢測試劑、校準品和質控品，陽性判斷標準為抗TP抗體的S/CO(吸光度值/臨界值)≥1。梅毒螺旋體抗體明膠顆粒凝集試驗法(TPPA)試劑盒賽樂迪亞，由日本富士瑞必歐株式會社提供。血清盤采用梅毒螺旋體抗體化學發光試劑國家參考品(批號370036-201801)。所有操作均參照試劑盒和儀器說明書進行。

3.檢測方法和流程：選取邁瑞CL6000-i TP抗體相應兩個水平質控品，其中低值為陰性質控品，高值為弱陽性質控品。低值質控品和弱陽性質控品各連續測定20遍，計算批內CV。兩個質控品每日上、下午各1次，每次重復2遍，共4次，連續檢測5天，計算批間CV。質控品和血清盤標本按照血清樣本同樣測定。23298例樣本首先在邁瑞CL6000-i平臺檢測，篩查陽性樣本會進一步做TPPA確證。

4.統計學方法：采用SPSS 13.0統計學軟件對數據進行統計分析，計數資料以率(%)表示，不同組之間率的比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

低值質控品和弱陽性質控品各連續測定20遍，計算得批內CV。兩個質控品每日上、下午各1次，每次重復2遍，共檢測4次，連續檢測5天，計算批間CV。經計算得出低值質控品總均值0.21，批內CV 1.31%，批間CV 1.47%，弱陽性質控品總均值2.47，批內CV 0.61%，批間CV 1.28%。血清盤中陰性企業參考品檢出率19/20，陽性企業參考品檢出率9/10，最低檢出限的4個參考品L1和L2均檢出陽性(要求L1和L2檢出陽性)，L3和L4均檢出陰性(L3要求檢出陰性或陽性，L4要求檢出陰性)，試劑性能均滿足國家血清盤要求。

23298例樣本在邁瑞CL6000-i進行TP抗體篩查，篩查陽性286例，陽性率1.22%(286/23298)。初篩陽性的286例樣本進行TPPA確證，結果顯示TPPA陽性176例，TPPA陰性110例，真陽性率61.53%(176/286)，邁瑞CL6000-i篩查TP抗體假陽性率0.47%(110/23298)。χ2檢驗結果顯示，差異有統計學意義(P=0.00,表1)。

表1 邁瑞CL6000-i CMIA法和TPPA確證法的結果比較

初篩陽性的286例樣本根據S/CO值劃分為1～3、3～5、5～7、7～10及>10 共5段，梅毒特異性抗體的真陽性率隨著S/CO值的增加而逐漸增高，當S/CO>10時，真陽性率可達100%，不同值段的真陽性率詳見表2。

表2 286例陽性樣本在不同S/CO值段的TPPA結果分布

286例初篩陽性患者根據科室分為6組，即體檢人群、門診患者、內科住院患者、外科住院患者、圍產患者和皮膚性病科患者。不同科室患者的初篩陽性數及TPPA確證情況詳見表3，不同科室之間梅毒篩查的真陽性率比較，差異有統計學意義(P=0.00)。

表3 286例初篩陽性樣本在不同科室的真陽性率

286例初篩陽性患者根據年齡分為3組，即<30歲，30～60歲和>60歲。不同年齡組之間患者的初篩陽性數及TPPA確證情況詳見表4，不同年齡段患者之間梅毒篩查的真陽性率比較，差異有統計學意義(P=0.00)。

表4 286例初篩陽性樣本在不同年齡組的真陽性率

討 論

2018年中國梅毒發病人數達到494867例，在甲、乙類傳染病排名中位居第3位，其中排名首位的是病毒性肝炎，第2位是肺結核，在世界范圍內每年梅毒的發病人數約為1200萬人[1，7]。梅毒感染機體后可產生兩種抗體，一種是梅毒特異性抗體，另一種為梅毒非特異性抗體，綜合兩種抗體檢查結果可判斷患者是否是現癥感染。

梅毒螺旋體感染機體后，螺旋體本身會產生一些類脂質物質，另外被感染的機體組織細胞也會釋放類脂質物質，機體針對這些類脂質物質產生的抗體即梅毒非特異性抗體，機體處于感染狀態時才會產生非特異性抗體，因此這一指標常用于判斷梅毒是否是現癥感染，還可用于治療效果觀察和復發監測。目前實驗室常用的檢測非特異性抗體的方法包括RPR、TRUST和VDRL等，但是這類方法是手工操作，肉眼判讀，不適合于大批量人群的篩查。梅毒特異性抗體是機體針對TP本身的特異性抗原所產生的，可持續甚至終生存在，常用于患者感染狀態篩查。針對特異性抗體的檢查方法包括CMIA、ELISA、TPPA、TPHA和膠體金等，其中CMIA檢測敏感度高，速度快，更適合于大批量人群的篩查，但該方法存在一定的假陽性率，假陽性結果可能引起潛在的醫療糾紛[8～11]。TPPA操作繁瑣，但因特異性相對較好，甚至可達99.9%，常用做梅毒螺旋體抗體的確證實驗[12～14]。CMIA和TPPA兩種方法結合，可在一定程度上保證梅毒螺旋體抗體檢測結果的準確性，這也是很多文獻推薦的檢測方法[15～17]。

目前實驗室CMIA法檢測TP抗體使用較多的是進口儀器，關于國產儀器檢測TP抗體的文獻報道較少。本實驗室2019年6月開始采用邁瑞全自動化學發光免疫分析儀CL6000-i檢測TP抗體，為避免假陽性結果引起潛在的醫療風險，所有篩查陽性樣本會進一步加做TPPA確證。為了初步評價該系統檢測性能，選擇配套低值質控品和弱陽性質控品各連續測定20遍，計算批內CV。兩個質控品每日上、下午各1次，每次重復2遍，共檢測4次，連續檢測5天，計算批間CV。經計算得出低值質控品批內CV 1.31%，批間CV 1.47%，弱陽性質控品批內CV 0.61%，批間CV 1.28%。血清盤中陰性企業參考品檢出率19/20，陽性企業參考品檢出率9/10，最低檢出限的4個參考品L1和L2均檢出陽性(要求L1和L2檢出陽性)，L3和L4均檢出陰性(L3要求檢出陰性或陽性，L4要求檢出陰性)，試劑性能均滿足國家血清盤要求。

2019年6月～2020年1月，本實驗室共檢測TP抗體23298例，初篩陽性286例，陰性23012例。286例初篩陽性樣本中176例TPPA陽性，110例TPPA陰性，邁瑞CL6000-i檢測TP抗體的真陽性率為61.53%，假陽性率0.47%。實驗數據還提示，篩查陽性樣本隨著S/CO值增加，真陽性率也增高，當S/CO>10時，真陽性率達到100%。筆者將286例初篩陽性患者按照科室和年齡進行了分組，結果顯示，與其他科室患者比較，體檢人群和產科患者真陽性率較低，與其他年齡段患者比較，>60歲患者組真陽性率較低，即體檢人群、產科患者及>60歲患者梅毒篩查假陽性較多，這部分患者報告在審核時需要格外注意。分析造成這部分人群假陽性較多的原因可能如下：不同的生理病理狀態下如妊娠期、老年期或者疾病時，體內產生某些物質，會和試劑發生非特異反應，出現假陽性結果；試劑不夠成熟，可以和TP抗體以外的成分發生反應，其特異性有待于進一步完善[18～20]。

綜上所述，邁瑞CL6000-i檢測TP抗體重復性較好，檢測結果中隨著檢測標本的S/CO值增加，檢測真陽性率增加。建議工作中，對于標本檢測S/CO在1～10的樣本，因為存在一定的假陽性情況，為了保證檢測結果的準確性，此類標本報告前需要加做TPPA，而S/CO>10的樣本不存在假陽性情況，這類樣本不需做TPPA，可直接報告陽性。對于體檢人群、妊娠患者及>60歲患者，因為梅毒螺旋體抗體篩查真陽性率較低，這部分患者的報告在審核時需要格外注意。