IL-1RII和IL-1RAcP重組質粒對大鼠自身免疫性心肌炎的作用及機制*

常 賀， 宋 穎， 劉春曉

（1廈門大學附屬翔安醫院老年病科，福建廈門361100；2廈門大學附屬心血管病醫院，福建廈門361014；3復旦大學附屬中山醫院廈門醫院，福建廈門361015）

心肌炎（myocarditis）是一種嚴重危害人類健康的心血管疾病，自身免疫介導的免疫反應在心肌炎發病進程中發揮重要作用［1］。實驗性自身免疫性心肌炎（experimental autoimmune myocarditis，EAM）動物模型模擬人類心肌炎的臨床過程，急性期出現充血性心衰，病理表現為彌漫性心肌壞死伴大量CD11b+和CD4+T淋巴細胞及多核巨細胞的浸潤，慢性期進展為擴張型心肌病［2-3］。研究顯示，CD4+T細胞及其分泌的多種細胞因子在EAM中發揮重要作用，白細胞介素1（interleukin-1，IL-1）在EAM 初始階段的CD11b+細胞中高表達，并可誘導其他炎癥因子的分泌，被認為是啟動EAM 炎癥的主要細胞因子［3］。我們前期的研究顯示，導入 IL-1 II 型受體（IL-1 type II receptor，IL-1RII）的重組質粒對EAM有治療作用［4-5］，但具體機制尚不明確。因此，本研究從體內和細胞水平觀察同時導入IL-1RII 和IL-1 受體輔助蛋白（IL-1 receptor accessory protein，IL-1RAcP）重組質粒對EAM的治療作用并探討其機制，為深入闡明心肌炎病人的發病機制及指導臨床治療提供參考資料［6］。

材料和方法

1 實驗動物

雄性 Lewis 大鼠，SPF 級，6～8周齡，體重 180～200 g，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司［許可證號為SYXK（京）2018-0010］。所有大鼠均置于廈門大學動物實驗中心SPF 級動物飼養室，溫度16～25℃，濕度50%～70%，動物自由攝食水。本研究經廈門大學實驗動物倫理委員會批準同意，且動物飼養及處理符合廈門大學動物倫理學標準。

2 主要試劑與儀器

含結核桿菌H37Ra 株的完全弗氏佐劑（complete Freund's adjuvant，CFA；Difco）；SwaI、NotI、BamH I和XbaI 限制性核酸內切酶，T4 DNA 連接酶，逆轉錄試劑盒，LipofectamineTM2000 轉染試劑（Thermo Fisher Scientific）；Trizol（Invitrogen）；SYBR熒光定量PCR試劑盒（TaKaRa）；Real-time PCR Master Mix 試劑盒（TOYOBO）；空載質粒pUC19、pEGFP-actin 和pEGFP-tubulin（優寶生物有限公司）；引物合成（上海生工生物公司）；瓊脂糖凝膠回收試劑盒和質粒提取試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）；蛋白酶抑制劑（Roche）；Protein A 瓊脂糖珠（Santa Cruz）；SDS-PAGE 試劑（Solarbio）；IL-1RII 及 IL-1RAcP 抗體（Santa Cruz）；α-tubulin 及 β-actin 抗體（Sigma-Aldrich）；HRP 標記的羊抗兔Ⅱ抗（北京聯科生物公司）；HRP 標記的羊抗小鼠Ⅱ抗（Jackson）；MyCycler梯度 PCR 儀（Bio-rad）；7500 實時熒光定量 PCR 儀（ABI）；Vivid 7型彩色多普勒血流顯像儀（GE）。

3 方法

3.1 重組質粒的構建 （1）構建體內導入用重組質粒 pCAGGS-IL-1RII-Ig（IgG1Fc）-Glu（glucagon 19-29）和pCAGGS-IL-1RAcP-Ig-Glu：采用本實驗室前期一直使用的重組質粒pCAGGS-Ig-Glu和對照質粒pCAGGSSP（signal peptide）-Ig-Glu，制備方法如前述［4-5，7］。（2）構建體外細胞轉染用重組質粒pUC19-IL-1RII-actin、pUC19-IL-1RAcP-tub、pEGFP-IL-1RII-actin和pEGFPIL-1RAcP-tub。質粒載體見圖1，引物序列見表1。

Figure 1.The vectors used for construction of recombinant plasmids.圖1 構建重組質粒用載體

3.2 EAM 大鼠模型的建立 提純豬心室肌球蛋白溶解于0.3 mol/L 氯化鉀溶液中使得濃度為10 g/L，加入同等體積含結核桿菌H37Ra 株的CFA，充分混合后，在大鼠雙足底皮下注射上述混合液，每只0.1 mL，以制備EAM模型。

3.3 重組質粒的體內導入 將實驗大鼠（總計29只）分成4組：（1）對照（control）組（n=5）：未免疫、未注射質粒的大鼠；（2）EAM+SP 組（n=9）：第0 天免疫大鼠，第6天應用流體動力學基因導入技術［4-5，7］，尾靜脈注射pCAGGS-SP-Ig-Glu（800 μg）；（3）EAM+IL-1RII組（n=8）：對已免疫的大鼠尾靜脈注射pCAGGS-IL-1RII-Ig-Glu（800 μg）；（4）EAM+IL-1RII+IL-1RAcP組（n=7）：對已免疫的大鼠尾靜脈注射pCAGGS-IL-1RII-Ig-Glu（800 μg）和 pCAGGS-IL-1RAcP-Ig-Glu（800 μg）。第17天處死動物，評估導入以上重組質粒對EAM的作用。

3.4 超聲心動圖評估 第17天對所有大鼠腹腔注射10%水合氯醛（3 mL/kg），麻醉后仰臥位固定，采用GE Vivid 7 型彩色多普勒血流顯像儀（探頭頻率14 MHz）行M型經胸超聲心動圖檢測。

3.5 組織病理學評估 第17天處死所有大鼠，稱取大鼠體重及心臟干重（去除血液），計算心重/體重比（ratio of heart weight to body weight，HW/BW；g/g）。獲取心臟組織，10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，切成5 μm厚度的切片進行HE染色。

3.6 心肌中炎癥因子的檢測 取大鼠心尖組織，Trizol 提取總RNA 并進行逆轉錄，合成cDNA（2 μg/20 μL），RT-qPCR 法檢測心衰標志物心房鈉尿肽（atrial natriuretic peptide，ANP）和腦鈉尿肽（brain natriuretic peptide，BNP），以及炎癥因子TNF-α、IL-2、IFN-γ、TGF-β、IL-10和IL-13的表達水平，GAPDH 作為內參照。擴增方法如前述［4-5，7］，引物序列見表1。

3.7 重組質粒的體外細胞轉染 Cos7細胞（非洲綠猴腎細胞）鋪于六孔板，每孔約2×105個，將pUC19-IL-1RII-actin和pUC19-IL-1RAcP-tub各2 μg，與LipofectamineTM2000 轉染試劑混合，加入 opti-MEM 稀釋至100 μL，混合均勻后，將質粒與轉染試劑形成的混合物直接加入培養基中，37℃、CO2培養箱培養72 h，留取含有IL-1RII和IL-1RAcP 蛋白的培養上清液，于-80℃保存備用。取pEGFP-IL-1RII-actin 和pEGFPIL-1RAcP-tub 各2 μg，與轉染試劑形成的混合物直接加入培養基中，37℃、CO2培養箱培養72 h，棄上清，添加RIPA 蛋白裂解液30 min，收集細胞提蛋白，進行Western blot 和免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，Co-IP）檢測。

表1 構建質粒及RT-qPCR引物序列Table 1.The sequences of the primers for plasmid construction and RT-qPCR

3.8 LPS 誘導的H9c2 細胞中炎癥因子的檢測 將本實驗室存有的H9c2 細胞（大鼠心肌細胞株）鋪于6 孔板，每孔約 2×105個，分成 4 組：（1）對照（control）組（n=5）：僅為靜息細胞；（2）LPS 組（n=5）：細胞中加入 LPS（1 g/L）；（3）LPS+IL-1RII 組（n=5）：細胞中加入LPS（1 g/L）+含有IL-1RII 蛋白的培養上清液 100 μL；（4）LPS+IL-1RII+IL-1RAcP 組（n=5）：細胞中加入 LPS（1 g/L）+含有 IL-1RII和IL-1RAcP的培養上清液 100 μL。37℃、CO2培養箱培養24 h后收集細胞，提取RNA 合成cDNA，RT-qPCR 法測定炎癥因子TNF-α、IL-2、TGF-β、IL-6、IL-10 及IL-13的表達水平。

3.9 Western blot 檢測重組質粒轉染入細胞 將Cos7 細胞分成靜息細胞（control）組、轉染pEGFP-IL-1RII-actin（IL-1RII）組、轉染 pEGFP-IL-1RAcP-tub（IL-1RAcP）組和共轉染pEGFP-IL-1RII-actin+pEGFP-IL-1RAcP-tub（IL-1RII+IL-1RAcP）組。收集細胞，抽提總蛋白，BCA 法測定蛋白濃度后，SDSPAGE 分離等量蛋白，冰上行轉膜反應，添加BSA 封閉，清洗后添加 anti-IL-1RII（1∶1 000）或 anti-IL-1RAcP（1∶1 000），4℃過夜孵育，添加HRP標記的Ⅱ抗（1∶5 000），室溫下孵育2 h，ECL 發光顯影后置于凝膠成像儀中，GAPDH 為內參照，采用ImageJ 軟件對蛋白表達灰度進行定量分析。

3.10 Co-IP 檢測目的蛋白的形成 共轉染pEGFPIL-1RII-actin+pEGFP-IL-1RAcP-tub 后的 Cos7 細胞提取的蛋白分成3 份：（1）陰性對照；（2）加1 μg anti-α-tubulin（1∶1 000）沉淀后孵育anti-IL-1RII 曝光，或加 1 μg anti-β-actin（1∶1 000）沉淀后孵育 anti-IL-1RAcP 曝光；（3）陽性對照（經mouse IgG 沉淀的蛋白）。4℃過夜孵育，protein A 瓊脂糖珠加入到與抗體孵育過夜的細胞裂解液中，4℃孵育2～4 h，使抗體與protein A 瓊脂糖珠偶聯，將蛋白-抗體復合物拉下來，最后加入 15 μL 的 2× SDS 上樣緩沖液，經 SDSPAGE檢測目的蛋白的形成。

4 統計學處理

采用SPSS 18.0 軟件進行統計分析。數據以均數±標準差（mean±SD）表示。多組間比較行單因素方差分析，進一步的兩兩組間比較采用LSD-t檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

1 心臟組織病理學評估

心臟外觀改變：與control 組比較，EAM+SP 組大鼠可見明顯炎癥充血、水腫伴大面積的心肌壞死（顏色變白），部分大鼠甚至出現心包積液；與EAM+SP組比較，EAM+IL-1RII 組和EAM+IL-1RII+IL-1RAcP組的心肌炎癥程度均有減輕，見圖2A。HE 染色顯示，control組大鼠的心肌形態結構完整，細胞排列緊密，纖維結構排列規則；而EAM+SP 組大鼠心肌細胞破碎、壞死，細胞排列不規則，心肌纖維斷裂，并伴有大量炎癥細胞浸潤；EAM+IL-1RII 組和EAM+IL-1RII+IL-1RAcP 組可見破碎和壞死的心肌細胞有所減少，以心肌纖維化為主，見圖2B。

Figure 2.Assessment of myocardial pathomorphological changes.A：representative heart images；B：HE staining of the ventricular sections.圖2 心臟外觀及HE染色評價大鼠心肌組織病理形態學變化

2 心功能評估

第17天行超聲心動圖評估，結果顯示，與control組比較，EAM+SP 組左心室舒張末期內徑（left ventricular end-diastolic dimension，LVEDd）和左心室收縮末期內徑（left ventricular end-systolic dimension，LVEDs）顯著增大（P＜0.01），射血分數（ejection fraction，EF）和左室短軸縮短率（fractional shortening，FS）顯著降低（P＜0.01）；與EAM+SP 組比較，EAM+IL-1RII+IL-1RAcP 組LVEDs 顯著縮小（P＜0.05），EF和FS 有輕度升高，但差異無統計學意義；與EAM+IL-1RII 組比較，EAM+IL-1RII+IL-1RAcP 組 LVEDd顯著縮小（P＜0.05），見圖3。

3 HW/BW 和心肌中心衰標志物的表達

與 control組比較，EAM+SP 組大鼠 HW/BW 及心肌中心衰標志物ANP 和BNP 的水平均顯著升高（P＜0.01）；與EAM+SP組比較，EAM+IL-1RII組和EAM+IL-1RII+IL-1RAcP 組大鼠 HW/BW 及心肌中 ANP 和BNP水平均顯著降低（P＜0.01），見圖4。

4 心肌中炎癥因子的表達

RT-qPCR 結果顯示，與control 組比較，EAM+SP組心肌中 TNF-α、IL-2、IFN-γ和TGF-β 的 mRNA 表達水平均顯著升高（P＜0.01），IL-4和IL-13的表達水平輕度降低，但差異無統計學意義；與EAM+SP 組比較，EAM+IL-1RII組TNF-α和IL-2的表達水平顯著降低（P＜0.05），IL-4 的表達水平顯著升高（P＜0.05），EAM+IL-1RII+IL-1RAcP 組 TNF-α、IL-2、IFN-γ 和TGF-β 的表達水平均顯著降低（P＜0.01），IL-4 和IL-13 的表達水平顯著升高（P＜0.01），尤其是IL-13 的水平較 EAM+IL-1RII 組顯著升高（P＜0.01），見圖5E、F。

Figure 3.Echocardiogram for determining cardiac structutre and function of the rats in each group.A：left ventricular end-diastolic diameter（LVEDd）；B：left ventricular end-systolic diameter（LVEDs）；C：left ventricular ejection fraction（EF）；D：left ventricular fractional shortening（FS）.Mean±SD. **P＜0.01 vs control group；#P＜0.05 vs EAM+SP group；△P＜0.05 vs EAM+IL-1RII group.圖3 超聲心動圖測定大鼠心臟結構和功能

Figure 4.Assessment of ratio of heart weight to body weight（HW/BW；A），and ANP（B）and BNP（C）mRNA expression in the heart.Mean±SD.**P＜0.01 vs control group；#P＜0.05，##P＜0.01 vs EAM+SP group.圖4 大鼠心臟重量/體重比及心肌中ANP和BNP的表達

5 LPS誘導的H9c2細胞中炎癥因子的表達

RT-qPCR 結果顯示，與 control 組比較，LPS 刺激細胞后TNF-α、TGF-β、IL-2和IL-6的mRNA表達水平均顯著升高（P＜0.01），提示LPS成功誘導了細胞發生炎癥反應；進一步加入含有IL-1RII和IL-1RAcP 的培養上清后，與LPS 組比較，LPS+IL-1RII 組和LPS+IL-1RII+IL-1RAcP組TGF-β和IL-6的表達水平顯著降低（P＜0.01），IL-10 的表達水平顯著升高（P＜0.05）；與LPS+IL-1RII組比較，LPS+IL-1RII+IL-1RAcP組TNF-α 和IL-2 的表達水平降低得更顯著（P＜0.05），IL-13的表達水平顯著升高（P＜0.01），見圖6。

Figure 5.The expression of inflammatory factors in rat myocardial tissues.The relative mRNA levels were detected by RT-qPCR and normalized to the internal control GAPDH.A：TNF-α；B：IL-2；C：IFN-γ；D：TGF-β；E：IL-4；F：IL-13.Mean±SD.**P＜0.01 vs control group；#P＜0.05，##P＜0.01 vs EAM+SP group；△△P＜0.01 vs EAM+IL-1RII group.圖5 大鼠心肌中炎癥因子的表達

6 IL-1RII和IL-1RAcP質粒被成功轉染入細胞

Western blot 結果顯示，轉染IL-1RII或IL-1RAcP一種質粒后，檢測到IL-1RII或IL-1RAcP 的蛋白表達量均比control 組升高，提示質粒轉染成功；而共轉染IL-1RII和IL-1RAcP兩種質粒后 ，IL-1RII和IL-1RAcP 的表達量均比單獨轉染一種質粒的表達量更高，提示兩種質粒共轉染成功，見圖7。

7 IL-1RII/IL-1RAcP異源二聚體的形成

樣品均為共轉染IL-1RII 和IL-1RAcP 兩種重組質粒后提取的蛋白，且被分為3份。圖8A 中，1為陰性對照，2 為目的蛋白（經anti-α-tubulin 沉淀的蛋白加anti-IL-1RII），3 為陽性對照（經mouse IgG 沉淀的蛋白），Co-IP 結果顯示，第2 列在約56 kD 處（rat IL-1RII 的分子量為46 kD，rat IL-1RAcP 的分子量為66 kD）檢測到一個新的蛋白條帶。在圖8B 中，1 為陰性對照，2為陽性對照（經mouse IgG 沉淀的蛋白），3為目的蛋白（經anti-β-actin 沉淀的蛋白加anti-IL-1RAcP），Co-IP 結果顯示，第 3 列在約 56 kD 處檢測到一個新的蛋白條帶。這些結果提示IL-1RII 和IL-1RAcP兩者結合形成了一個新的異源二聚體。

討 論

本研究首先從體內水平評估了導入IL-1RII 和IL-1RAcP 重組質粒對EAM 的作用，我們前期構建了質粒pCAGGS-Ig-Glu 和對照質粒pCAGGS-SP-Ig-Glu［4-5，7］，在此基礎上構建了重組質粒 pCAGGS-IL-1RII-Ig-Glu 和pCAGGS-IL-1RAcP-Ig-Glu。構建質粒載體時融合了IgG1Fc 片段，不僅可以使得目的基因獲得更長的循環半衰期并具有免疫球蛋白的特性，還可以使之與配體有更強的親和力及維持血中持續高濃度水平。另外，為了檢測質粒導入后的血中濃度，我們在質粒載體上融合了glucagon 19-29 片段，這樣通過檢測血中glucagon 的濃度可以間接反映重組質粒導入體內后的濃度［5］。

我們前期的研究已顯示，尾靜脈注射IL-1RII 重組質粒后，在肝臟和心臟組織中均檢測到過表達，證明質粒被有效穩定地導入EAM 大鼠體內［4-5］。本研究結果顯示，尾靜脈注射IL-1RII和IL-1RAcP 兩種重組質粒后，與EAM+SP 組相比，EAM+IL-1RII 組和EAM+IL-1RII+IL-1RAcP組大鼠EAM 均顯著減輕，表現為左室內徑縮小，HW/BW 減小，心衰標志物ANP和BNP 水平降低，心肌中炎癥因子TNF-α、IL-2、IFN-γ和TGF-β表達降低，IL-4和IL-13的表達升高，尤其是同時導入兩種質粒能夠更強力地抑制炎癥因子的表達。我們前期的研究顯示，多種炎癥因子如IL-1β、TNF-α、IFN-γ、IL-17、IL-6 等在 EAM 早期的急性炎癥階段高表達，在促進炎癥方面起主導作用［8-9］；而IL-13、IL-10、IL-4 等因子在 EAM 中后期的細胞免疫反應階段高表達，發揮抗炎作用而緩解EAM［10-11］。IL-1是一種T淋巴細胞激活因子，主要產生于單核細胞、巨噬細胞、自然殺傷細胞等，是調節細胞免疫的主要致炎細胞因子，并且可以誘導其他一些炎癥細胞因子如TNF-α、MCP-1、IL-6 等的激活，故被認為是炎癥的主要效應因子，其中IL-1β是炎癥和宿主防御的重要調節因子，在促進炎癥和自身免疫等方面起主導作用［12］。IL-1RII和IL-1RAcP 是 IL-1 受體家族中的重要成員，IL-1RI 是功能性受體，當與IL-1β 結合時具有較高的親和力，可以招募IL-1RAcP 形成異源二聚體從而發揮促炎作用；相反，IL-1RII作為抑制性受體，因其胞內缺乏Toll 樣受體區域，可以與IL-1RI競爭性結合IL-1β，故IL-1RII與IL-1RAcP結合形成異源二聚體后，在一些炎癥性疾病中通過抑制IL-1 而發揮抗炎作用［12-13］。在本研究中，我們檢測了轉染IL-1RII 和IL-1RAcP 重組質粒后獲取的培養上清對LPS 誘導的H9c2 細胞中炎癥因子的作用，結果顯示，與 LPS 組比較，LPS+IL-1RII 組和 LPS+IL-1RII+IL-1RAcP 組 TGF-β和IL-6 表達水平顯著降低，IL-10表達水平顯著升高，尤其是LPS+IL-1RII+IL-1RAcP組TNF-α 和IL-2 的水平顯著降低。因此本研究不僅在體內水平證明了IL-1RII 和IL-1RAcP 對EAM 有更強的抗炎作用，而且在細胞水平也證明了兩種蛋白可更強力地抑制炎癥因子的表達，這是對抗炎作用機制的初步闡明。

Figure 6.The expression of inflammatory factors in LPS-induced H9c2 cells.The relative mRNA levels were detected by RT-qPCR.A：TNF-α；B：IL-2；C：TGF-β；D：IL-6；E：IL-10；F：IL-13.Mean±SD. n=5. **P＜0.01 vs control group；#P＜0.05 vs LPS group；△P＜0.05，△△P＜0.01 vs LPS+IL-1RII group.圖6 LPS介導的H9c2細胞中炎癥因子的表達

Figure 7.Identification of recombinant plasmid transfection into cells.A：the protein expression of IL-1RII；B：the protein expression of IL-1RAcP.Cos7 cells were transfected with recombinant plasmids pEGFP-IL-1RII-actin（IL-1RII group），pEGFPIL-1RAcP-tub（IL-1RAcP group）or pEGFP-IL-1RII-actin and pEGFP-IL-1RAcP-tub（IL-1RII+IL-1RAcP group）.The protein levels were detected by Western blot，and GAPDH served as internal control.圖7 Western blot鑒定重組質粒被成功轉染入細胞

Figure 8.Detection of IL-1RII/IL-1RAcP heterodimer formation by Co-IP.A：proteins precipitated by anti-α-tubulin plus anti-IL-1RII；B：protein precipitated by anti-β-actin plus anti-IL-1RAcP.Cos7 cells were co-transfected with recombinant plasmids pEGFP-IL-1RII-actin and pEGFP-IL-1RAcP-tub.圖8 免疫共沉淀檢測IL-1RII/IL-1RAcP異源二聚體的形成

為進一步明確IL-1RII 和IL-1RAcP 兩者是否可以相互結合形成異源二聚體，我們將IL-1RII 和IL-1RAcP 兩種重組質粒轉染入細胞，Co-IP檢測到一個新的融合蛋白，間接驗證了兩者相互結合形成了異源二聚體。二聚體是兩種蛋白質相互作用的形式，可以看作是兩種功能相關或結構相似的亞單位組成的一種蛋白質-蛋白質復合物。若組成二聚體的兩種亞單位的結構和功能完全相同則稱為同源二聚體，若結構或功能不完全相同則稱為異源二聚體。目前關于IL-1RII/IL-1RAcP 異源二聚體的研究相對較少。Hanawa 等［14］在細胞水平用分離純化的方法，不僅鑒定了IL-1RII/IL-1RAcP異源二聚體的存在，而且發現此異源二聚體較IL-1 受體拮抗劑（IL-1 receptor antagonist，IL-1Ra）對 IL-1 有更強的抑制作用。Wang 等［15］解析了 IL-1β 與 IL-1RII/IL-1RAcP 異源二聚體結合的空間晶體結構，生化分析表明，IL-1β-IL-1RI和IL-1β-IL-1RII 與 IL-1RAcP 的結合具有一定的相似性，同時也明確了IL-1Ra 對IL-1 的重要拮抗作用，為IL-1 受體家族的激活提供了結構基礎。Ge等［16］進一步解析了 IL-1RII/IL-1RAcP 異源二聚體的結構功能域，明確了IL-1受體家族在細胞外區含有3個免疫球蛋白樣結構域（D1～D3），負責傳遞IL-1 細胞因子的多向信號，并應用小角度X 射線散射技術證明了配體結合的共受體由于D2/D3 連接體而具有固有的結構域間靈活性，表明了D2/D3連接體是IL-1受體重要的功能決定因素，并強調了結構域間靈活性在細胞因子/受體結合和信號傳遞中的重要作用。這些研究從空間結構上解析了IL-1RII 和IL-1RAcP兩者可以結合形成異源二聚體，但未對功能進行深入探討。本實驗首次在體內水平評估了導入IL-1RII和IL-1RAcP 重組質粒對EAM 的作用，并且從機制上進行了初步探討，鑒定了IL-1RII和IL-1RAcP 兩者可以相互結合形成異源二聚體，并觀察了對炎癥因子表達的影響。

綜上所述，本研究發現IL-1RII和IL-1RAcP 重組質粒導入可有效緩解大鼠EAM 的炎癥損傷，其機制與兩者結合形成異源二聚體并強力抑制炎癥因子的表達有關。關于異源二聚體的功能區解析以及異源二聚體的作用，還有待后續進一步探究。